Облік результатів аналізу
Результати аналізу оцінюють візуально, порівнюючи забарвлення лунок стандарту морфіну із забарвленням лунок в досліджуваних пробах, або спектрофотометрично при довжині хвилі 492 нм (плейтфотометр ІФКО-2).
Кількість морфіну в досліджуваних пробах визначають за градуювальним графіком залежності середньої оптичної густини двох-трьох паралельних визначень від концентрації морфіну-стандарту в напівлогарифмічних координатах: по осі абсцис відкладають значення С (С - концентрація морфіну в нг/мл), по осі ординат – відношення оптичної густини А (Ао - оптична густина стандартного розчину, А - оптична густина «сліпого» досліду). Дані для побудови градуїровочного графіка заносять в таблицю).
Форма запису даних для побудови градуювального графіку при іфа
№ п/п |
С, нг/мл |
Lq С |
А |
А0 |
А/ А0 |
1. |
500 |
2,7 |
0,40 |
0,88 |
0,47 |
2. |
250 |
|
|
|
|
3. |
125 |
|
|
|
|
4. |
62 |
|
|
|
|
5. |
31 |
|
|
|
|
6. |
15 |
|
|
|
|
7. |
7,5 |
0,9 |
0,68 |
0,88 |
0,80 |
5. Ознайомитись з методами експрес-аналізу канабіоїдів
Для ізолювання канабіоїдів з біологічних рідин живих осіб використовують наступні методики
А) Ізолювання з крові. До 5мл крові додають 7,5% розчин гідроксиду амонію і 3мл суміш діетиловий ефір-н-пентан (9:1), суміш струшують протягом 3хв, потім центрифугують. Надосадову рідину переносять у склянну ємність, попередньо промиту метанолом (щоб запобігти сорбції канабіоїдів) і випарюють у тоці азоту. Отриманий осад досліджують методом ТШХ.
Б)Ізолювання з сечі. 10мл змішують з 0,5мл 50% розчином гідроксиду натрію і суміш гідролізують протягом 20хв при температурі 60ºС. Після охолодження до гідролізату додають концентровану соляну кислоту до рН 2, далі розчин екстрагують сумішшю гексан-етилацетат (7:1). Органічний шар відділяють і упорють до сухого залишку і досліджують методом ТШХ.
В) Ізолювання зі слини. Відбирають 3мл слину. Порожнину рота промивають спиртом 70% і насиченим розчином хлориду натрію (щоб не ковтали). Слину і змив об’єднують і екстрагують 10мл етилацетату протягом 5хв. Органічний шар відділяють і фільтрують крізь б/в сульфат натрію. Фільтрат упарюють в тоці азоту і сухий залишок досліджують методом ТШХ.
Для аналізу канабіоїдів використовують наступні системи розчинників.
Загальні
ТА: метанол – 25% розчин аммиаку (100:1,5)
ТЕ: етилацетат - метанол — 25%- розчин аміаку (85:10:5)
TAJ: хлороформ - етанол (90:10)
ТАК: хлороформ - циклогексан — льодяна оцтова кислота (4:4:2)
TAL: хлороформ — меганол - пропіонова кислота (72:18 10).
Приватні
Толуол
Ксилол — гексан - диетиламнн (25:10:1)
Петролейний ефір — діетиловий ефір (4:1).
Ацетон — гептан — льодяна оцтова кислота (30:22:0.5).
Гексан — ізобутанол – льодяна оцтова кислота (90:9:1).
Зразок ТШ- хроматограми при експрес-аналізі канабіоїдів
