Ситуационные задачи

1. Количество билирубина (общего в сыворотке крови 40 мкм/л, окраска кала и мочи обычная). О каких нарушениях свидетельствуют такие признаки?

2. Содержание общего билирубина в крови равно 25 мкмоль/л, моча темно-коричневого цвета, кал обесцвечен. Как называется такое состояние. Когда она наблюдается?

3. Содержание общего билирубина в сыворотке крови 42 мкмоль/л – 18 мкм/л, повышенная активность АлАТ моча окрашена в темный цвет окраска кала обычная. При каком виде желтухи это наблюдается? Почему?

4. Содержание мочевой кислоты в сыворотки крови и в моче увеличены. О патологии какого обмена можно думать?

Лабораторная работа Определение содержания билирубина в сыворотке крови методом Ендрашика, Клеггорна и Грофа.

У здоровых людей в сыворотке и плазме крови содержится 0,4-0,8 мг билирубина. Этот общий билирубин складывается из двух форм:

1. Свободный билирубин образуется в ретикулоэндотелиальной системе, не растворяется в воде и поэтому не дает реакцию с диазореактивом Эрлиха. Указанная реакция получается с данной формой билирубина только после добавления веществ, обладающих свойством повышать растворимость билирубина (кофеиновый реактив, спирт), и поэтому носит название непрямой реакции. Соответственно этому свободный билирубин называется еще непрямым билирубином.

2. Глюкуронид билирубина образуется в печени, растворим в воде и дает реакцию с диазореактивом Эрлиха (прямая реакция). Эта форма билирубина называется прямым билирубином.

Повышение концентрации билирубина в сыворотке крови (гипербилирубинемия) свыше 2 мг сопровождается желтой окраской склер, слизистых оболочек, кожных покровов, т.е. развитием желтухи. Гипербилирубинемия может наблюдаться при усиленном гемолизе эритроцитов (гемолитическая желтуха), нарушении функции печеночных клеток (печеночных желтухи) или затруднении оттока желчи из желчного пузыря (механическая желтуха). Для дифференциальной диагностики различного вида желтух важно определение в сыворотке не только общего количества билирубина, но и его фракций.

Принцип: «Прямой» билирубин с диазореактивом дает розово-фиолетовое окрашивание, по интенсивности которого колориметрически определяют концентрацию данной фракции билирубина в сыворотке. Добавлением к сыворотке крови кофеинового реактива (водный раствор кофеина, бензойнокислого и уксуснокислого натрия) переводят «непрямой» билирубин в растворимое состояние и добавив диазореактив, колориметрически определяют содержание общего билирубина. По разнице между «общим» и «прямым» билирубином находят концентрацию «непрямого».

Ход определения. Исследуемую сыворотку разводят в 2 раза физиологическим раствором после чего в 3 пробирки (для определения «общего» билирубина, «непрямого» и контроля) отмеривают указанные в таблице количества мл сыворотки и реактивов.

Реактив	N пробирки
	1 («общий билирубин»)	2 («прямой билирубин»)	3 контроль
Сыворотка крови (разведение 1:2)	0,5	0,5	0,5
Кофеиновый реактив	1,75	-	1,75
Физиологический раствор	-	1,75	0,25
Диазореактив	0,25	0,25	-

В пробирках развивается разной интенсивности розово-фиолетовое окрашивание. Колориметрируют на фотоэлектроколориметре при зеленом светофильтре в кювете с расстоянием между рабочими гранями 0,5 см для определения «прямого» билирубина через 5-10 минут, а для определения «общего» - через 20 минут после добавления дизореактива (технику колориметрии на ФЭК-М см. в работе 274).

Из показателя оптической плотности для жидкости в первой и второй пробирках вычитают показатель оптической плотности контроля.

Химизм. В диазореактиве из сульфаниловой кислоты, азотокислого натрия и соляной кислоты образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая с билирубином дает комплексное соединение розово-фиолетового цвета.

Расчет. Производят по калибровочной кривой для построения которой используют несколько растворов билирубина с известной концентрацией. Стандартные пробы обрабатывают описанным выше методом, затем определяют их оптическую плотность на ФЭК-М.

Для построения калибровочной кривой откладывает на оси ординат разность оптических плотностей стандартных и контрольных проб, а на оси абсцисс соответствующие концентрации билирубина в мг%.