Определение содержания неорганического фосфора в сыворотке крови.

В сыворотке крови взрослого человека неорганического фосфора содержится 3-5мг% (1,8-2,6 мэкв/л), в сыворотке крови здорового ребенка-4-6мг%. Увеличение содержания неорганического фосфора в крови (гиперфосфатемия) наблюдается при гипофункции околощитовидных желез, при почечной недостаточности и гипервитаминозе Д; уменьшение (гипофосфатемия) - при рахите.

Принцип. Белки сыворотки осаждаются трихлоруксусной кислотой. Фосфаты безбелкового фильтрата при взаимодействии с молибденовой кислотой образуют фосфорномолибденовую кислоту, которая, восстанавливаясь гидрохиноном и сернокислым натрием или аскорбиновой кислотой, образует молибденовую синь. Последняя имеет синий цвет, интенсивность которого в растворе пропорциональна содержанию в нем фосфора.

Ход определения. Осаждение белков. В колбочку отмеривают 2мл сыворотки, 6мл дистиллированной воды, перемешивают, после чего добавляют 2мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты и вновь перемешивают. Жидкости дают постоять 10-15минут (белки коагулируют) и фильтруют. Цветная реакция. В пробирки N1 и N2 наливают ряд растворов, названия и количества которых в мл приведены в таблице:

Раствор	N1 пробирки
	1	2
Безбелковый фильтрат Стандартный раствор фосфора (1мг%) Молибденовый реактив (2,5% раствор молибденовокислого аммония в 5н. серной кислоте). Смесь равных количеств 1% раствора гидрохинона и 20% раствора серно-кислого натрия.	3 - 1 1	- 3 1 1

В случае применения в качестве восстановителя аскорбиновой кислоты в пробирки N1 и N 2 отмеривают в указанном порядке следующие растворы (количество в мл).

Раствор	N1 пробирки
	1	2
Безбелковый фильтрат Стандартный раствор фосфора (1мг%) Молибденовый реактив 1% раствор аскорбиновой кислоты в 0,1н. растворе соляной кислоты. Дистиллированная вода	3 - 0,3 0,3 1,4	- 3 0,3 0,3 1,4

Содержимое обеих пробирок перемешивают и через 10 минут сравнивают интенсивность полученных окрасок в ФЭК-М или в колориметре типа Дюбоска.

При колориметрии на ФЭК-М используют кюветы с рабочей длиной 10мм и желтый светофильтр. Колориметрируют против воды.

Расчет в этом случае ведется по калибровочной кривой или по формуле:

К_ст х Е_х

К_Х = ,

Е_ст

где К_ст равняется 1мг%; Е_х и Е_ст - экстинкции исследуемого и стандартного растворов; К_х - концентрация фосфора в безбелковом фильтрате в мг%. Если учесть, что при получении безбелкового фильтрата сыворотка крови была разведена в 5 раз, то для вычисления концентрации фосфора в ней нужно К_х умножить на 5.