Колориметрическое определение остаточного азота крови

Остаточным, или небелковым, азотом крови называется азот веществ, оставшихся в растворе после осаждения белков крови. В остаточный азот крови входят: азот мочевины (около 50% всего остаточного азота), аминокислот, креатина, креатинина, мочевой кислоты, солей аммония, полипептидов и других соединений

У здорового человека в крови и в сыворотке крови содержится от 20 до 40 мг% остаточного азота.

Принцип. Органические вещества безбелкового фильтрата крови сжигаются с серной кислотой в присутствии катализатора. При этом содержащийся в исследуемом фильтрате азот превращается в сернокислый аммоний. Образовавшаяся аммиачная соль разлагается затем щелочью. Выделившийся аммиак с реактивом Несслера дает оранжево-желтое окрашивание, по интенсивности которого судят о количестве остаточного азота в крови.

Ход определения.

А. Получение безбелкового центрифугата. В центрифужную пробирку отмеривают 2,8мл 20% раствора трихлоруксус-ной кислоты и 0,2мл крови. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и через 10-15 минут центрифугируют.

Б. Минерализация. Подбирают две по возможности одинакового диаметра пробирки из тугоплавкого стекла. В одну из них (опытную) вносят 1мл центрифугата, во вторую (контрольную) - 1мл дистиллированной воды. В обе пробирки добавляют по 2 капли концентрированной серной кислоты и нагревают на слабом огне до появления тяжелых белых паров. (Пробирки следует держать над огнем в наклонном положении, чтобы кипящая жидкость не разбрызгивалась). После охлаждения в обе пробирки добавляют по 2 капли пергидроля и снова нагревают до получения бесцветной и прозрачной жидкости.

В. Цветная реакция. В охлажденные пробирки добавляют по 6мл дистиллированной воды, по 1 капле 0,01% раствора метилового красного (или лакмусовую бумагу) и затем содержимое пробирок осторожно, при постоянном помешивании нейтрализуют 1н. раствором едкого натра до слабощелочной реакции. После нейтрализации в обе пробирки добавляют по 0,5мл реактива Несслера. Жидкость опытной пробирки окрашивается в оранжево-желтый цвет, а жидкость в контрольной пробирке в бледно-желтый.

г) Последний этап определения содержания азота можно вести двумя способами: титрометрическим или колориметрическим.

1. Титрометрический способ. Пользуясь белым фоном (лимтом бумаги), содержимое контролшьной пробирки титруют из микробюретки стандартным раствором сернокислого аммония до получения окраски, по интенсивности одинаковой с окраской жидкости в опытной пробирке. После этого можно считать, что количество добавленного в контрольную пробирку азота равно количеству азота, содержащегося в 1 мл центрифугата крови. Расчет производят по формуле:

х · 0,05 · 3· 100 = мг азота,

0,2

где х- количество мл ихрасходованного стандартного раствора;

0,05 - количество мг азота в 1 мл стандартного раствора;

3 - количество смеси (2,8 мл осадителя и 0,2 мл крови);

0,2 - количество мл крови, взятой для анализа.

Пример расчета. Если на титрование контрольной жидкости пошло 0,4 мл стандартного раствора сернокислого аммония, то в 100 мл крови будет содержаться

0,4·0,05·3·10030мг  азота.

0,2

2. Колориметрический способ. Опытную пробу колориметрируют на фотоэлектроколориметре с синим светофильтром в кювете с расстоянием между рабочими гранями 0,5 см против контрольной пробы (технику колорометрии см. в работе 274).

Расчет. С помощью калибровочной кривой (принцип построения см. в работе 274) находят количество азота в опытной пробе, т.е. в 1мл центрифугата. Содержание остаточного азота в 100мл крови определят по формуле:

А·3·100  мг ,

0,2

где А - количество мг азота в 1 мл центрифугата.

Билет N 1

1. Растворимость альбуминов.

2. Количество остаточного азота плазмы крови в норме.

3. Состав крови (схема).

4. Гипопротеинемия, виды.

5. Химическая природа индикана.

Билет N 2

1. Растворимость глобулинов.

2. Значение определения мочевины в крови в оценке степени повреждения почек.

3. Количество общего белка в сыворотке крови в норме.

4. Иммуноглобулины, классы, строение, изменение уровня при патологии.

5. Химическая природа мочевой кислоты.

Билет N 3

1. Особенность аминокислотного состава альбуминов.

2. Чем отличается сыворотка крови от плазмы крови?

3. Белки острой фазы, значение определения.

4. Функции крови.

5. Перечислить вещества, входящие в состав остаточного азота крови.

Билет N 4

1. Особенность аминокислотного состава глобулинов.

2. Значение биохимического анализа крови.

3. Виды азотемии.

4. Белки-ферменты. Виды ферментов сыворотки крови, происхождение, диагностическое значение.

5. Химическая природа билирубина, его уровень в норме.

Билет N 5

1. Методы разделение альбуминов и глобулинов сыворотки крови.

2. Значение белков плазмы крови. Перечислить.

3. Гипопротеинемия виды.

4. При каких состояниях повышается количество остаточного азота.

5. Химическая природа креатинина.

Билет N 6

1. Назвать белковые фракции сыворотки крови.

2. Органические составные части крови. Перечислить.

3. Количество сывороточных альбуминов в норме. Значение их исследования.

4. Белки кининовой системы. Образование кининов. Значение.

5. Химическая природа скатоксилглюкуроновой кислоты.

Билет N 7

1. Отличаются ли по заряду молекулы альбуминов и глобулинов.

2. Что понимают под термином остаточный азот крови?

3. Фибриноген, значение, изменение уровня при патологии, количество в норме.

4. Парапротеинемия, понятие. Диагностическое значение.

5. Химическая природа мочевины, количество в крови в норме.

Билет N 8

1. Направленность и скорость движения альбуминов и глобулинов при элек-трофорезе.

2. Диагностическое значение определения остаточного азота.

3. Какие белки входят в состав плазмы крови?

4. Гиперпротеинемия виды.

5. Химическая природа креатина.