Методические указания к практическому заданию 38
НСТ-тест
Бактерицидная активность фагоцитирующих клеток во многом определяется ферментным набором клетки. Поэтому косвенные показатели нарушения бактерицидной активности можно получить при определении различных клеточных ферментов, характеризующих окислительные процессы (пероксидаза и др.). Для этих целей используется реакция восстановления нитросинего тетразолия.
НСТ-тест основан на учете отложений в клетке диформазана – нерастворимой формы восстановленного нитросинего тетразолия, что является показателем бактерицидной функции фагоцитов.
К позитивным относятся клетки с четко выраженными темно-синими отложениями диформазана. Нейтрофилы с пылевидными гранулами считаются неактивными. У здоровых людей число спонтанно активных нейтрофилов не превышает 10 %. При использовании стимулятора число активированных нейтрофилов в норме – 40–80 %.
Клиническое значение. НСТ-тест используется для дифференцировки бактериальных и вирусных инфекций со сходной клиникой. При вирусной инфекции достоверно увеличивается количество нейтрофилов, восстанавливающих НСТ.
Задание 39. Изучение бактерицидной активности собственной кожи методом агаровых отпечатков. Результаты отразить в следующей таблице:
Время исследования |
Количество колоний |
Индекс бактерицидности |
После нанесения культуры |
|
|
Через 10 мин |
|
|
Заключение:
Соответствует ли индекс бактерицидности значениям нормы?
Каковы возможные причины снижения бактерицидности кожи?
Методические указания к практическому заданию 39
Метод агаровых отпечатков
На кожу ладонной стороны предплечья нанести пипеткой одну каплю культуры кишечной палочки. Распределить жидкость стерильным стеклянным шпателем. Сделать первый отпечаток с кожи пластинкой с питательной средой и зафиксировать время. Экспозиция контакта микробов и кожи – 10 мин. Сделать второй отпечаток с кожи (рядом с первым, но не с того же участка). Чашки со стеклами-отпечатками поместить в термостат на 24 ч.
Подсчитать количество выросших колоний на пластинках из расчета на 1 см2 (считать не менее чем в трех полях).
Определить индекс бактерицидной (ИБ – это доля погибших микробов в процентах) активности кожи по формуле:
где: А – 1-я пластинка (число колоний после нанесения культуры, пример 75 + 90 + 85, среднее 83,3);
Б – 2–я пластинка (пример, число колоний через 10 мин контакта с кожей 2 + 4 + 6, среднее 4).
В норме бактерицидная активность кожи должна быть не ниже 85 %.
Задание 40. Определение количества С3 компонента комплимента сыворотки в демонстрационных препаратах.
Методические указания к практическому заданию 40
Определение количества СЗ компонента комплемента сыворотки
Для количественной оценки фракций комплемента, в том числе и СЗ фракции, используется простая радиальная иммунодиффузия в геле. В пластиковые чашки вносят расплавленный чистый агар (агар Difko или агарозу), смешанный с диагностической моноспецифической сывороткой к третьему компоненту комплемента (СЗ) человека. После застывания агара в нем вырезают лунки диаметром 2 мм и в них вносят микрошприцем по 2 мкл исследуемых сывороток. Иммунодиффузию проводят во влажной камере при температуре 20 °С в течение суток. В контрольные лунки вносится стандартная сыворотка, содержащая известное количество СЗ компонента комплемента. Через сутки оценивают результат иммунодиффузии по измерению диаметра зоны преципитации вокруг лунки с внесенной исследуемой сывороткой. Расчет концентрации СЗ компонента комплемента проводится по калибровочной кривой, построенной по результатам измерения диаметра зон преципитатов разных разведений стандартной сыворотки.
Пример:
Диаметр зоны преципитации, см: |
Количество СЗ компонента, мг/мл: |
0,32 |
0,4 |
0,42 |
1,6 |
0,55 |
3,2 |
0,65 |
6,4 |
0,82 |
12,9 |
Заключение:
Состояние естественной резистентности у обследуемого.
Что может быть причиной изменений?
Занятие 15
Этапы развития иммунологии.
Иммунная система организма человека.
Клетки иммунной системы. Формы иммунного ответа.
Антигены. Антитела
Студент должен:
знать:
органы иммунной системы;
антигены бактериальной клетки и организма человека (понятие, химическая природа, свойства);
гуморальные иммунные реакции;
клеточные иммунные реакции;
иммунодиагностику инфекционных болезней;
методы идентификации нуклеиновых кислот;
уметь:
владеть техникой постановки и учета простых и сложных серологических реакций;
владеть техникой постановки и учета реакций с применением меченых антител и антигенов;
владеть техникой постановки и учета гибридизации нуклеиновых кислот и полимеразной цепной реакцией.