Окраска ретикулоцитов краской бриллианткрезилблау

Реактив: насыщенный раствор бриллианткрезилблау в абсолютно спирте (1,2 г краски на 100 мл спирта). Бриллианткрезилблау можно заменить таким же количеством краски азур II или азур I.

Ход определения: каплю краски наносят стеклянной палочкой на хорошо вымытые обезжиренные теплые предметные стекла, шлифовальным стеклом делают тонкие мазки. Поверхностные стекла, где размазана краска, отмечают стеклографом. Такие стекла можно заготовить впрок.

На подготовленные таким образом стекла наносят каплю крови, делают тонкие мазки поверх краски и помещают стекла с мазками во влажную камеру на 3-5 минут. Затем мазки высушивают на воздухе. В зависимости от количества краски длительность экспозиции мазков во влажной камере удлиняется до 8-10 минут.

При окраске ретикулоцитов указанными методами эритроциты окрашиваются в желтовато-зеленый тон, а нитчато-сетчатая субстанция — в синий цвет.

Техника подсчета количества ретикулоцитов

Окашенный мазок микроскопируют с иммерсионной системой в тонкой его части. Ретикулоциты учитываются в числе подсчитанных 1000 эритроцитов при суженном поле зрения (через «окошечко»). Таким образом определяют, сколько незрелых клеток встречается на 1000 эритроцитов.

Количество ретикулоцитов выражают на 1000 эритроцитов — в промилле и на 100 эритроцитов — в процентах.

Норма ретикулоцитов: 5-8% или 0,5-0,8 промилле.

Некоторые авторы отмечают, что у женщин количество ретикулоцитов несколько больше, чем у мужчин. У детей в первые дни жизни количество ретикулоцитов по разным данным может достигать 5-10 %, а затем уменьшается.

1. 100 мкл крови, стабилизированной ЭДТА, поместить в эпиндорф с краской, перемешать.

2. Инкубировать 15-30 минут, перемешать.

3. Сделать тонкий мазок, высушить.

4. Микроскопировать

Увеличение ретикулоцитов в периферической крови (ретикулоцитоз) отмечается:

1. При гемолитических анемиях (число ретикулоцитов может доходить до 60% и более (особенно сильно увеличиваясь при гемолитических кризах).

2. При острых кровопотерях (на 3-5 сутки после кровопотери возникает ретикулоцитарный криз), в том числе, увеличение ретикулоцитов позволяет заподозрить скрытое кровотечение (например, у больных язвенной болезнью желудочно-кишечного тракта, брюшным тифом).

3. При малярии

4. При полицитемии

5. При лечении железом железодефицитных анемий (через несколько дней 3-10) после начала антианемического лечения пернициозной анемии.

6. При остром недостатке кислорода

7. При метастазах опухолей в костный мозг

Истинный ретикулоцитоз: увеличение количества ретикулоцитов в периферической крови с одновременным увеличением количества ретикулоцитов в костном мозге.

Ложный реткулоцитоз: отсутствие повышенного количества ретикулоцитов в костном мозге при повышении их количества в периферической крови (что говорит об усилении вымывания ретикулоцитов из костного мозга в периферическую кровь).

Фактором, приводящим к увеличению значения процентного содержания ретикулоцитов могут быть прием следующих препаратов: кортикотропин, противомалярийные лекарственные средства, жаропонижающие препараты, фуразолидона (у маленьких детей), леводопы.

Возможной ошибкой при подсчете ретикулоцитов может быть их ложное завышение из-за наличия:

1. Включений в эритроцитах (тельца Жолли, малярийные паразиты)

2. Высокого лейкоцитоза

3. Аномальной формы гемоглобина

4. Гипертромбоцитоза

5. Гигантских тромбоцитов.

Снижение количества или отсутствие ретикулоцитов (ретикулоцитопения) наблюдается:

1. При арегенераторных апластических и гипопластических анемиях.

2. При анемиях, вызванных недостаточностью содержания железа, витамина В12, фолиевой кислоты (микроцитарно-гипохромные и мегалобластные анемии);

3. При талассемии

4. При сидеробластной анемии

5. При метастазах рака в кость

6. При лучевой болезни и лучевой терапии

7. При лечении цитостатиками

8. При аутоимунных заболеваниях системы кроветворения

9. При заболеваниях почек

10. При алкоголизме

11. При рецидиве анемии Аддисона -Бирмера

12. При микседеме

Факторы, искажающие результат лабораторного исследования процентного содержания ретикулоцитов:

1. Неправильный выбор антикоагулянта или недостаточное перемешивание крови с антикоагулянтом

2. Длительное сдавливание руки жгутом

3. Прием сульфаниламидов (возможны как заниженные, так и завышенные результаты)

4. Переливание крови незадолго до исследованиям

5. Гемолиз пробы крови

Показания к назначению анализа на ретикулоциты:

1. Оценка активности эритропоэза при состояниях, сопровождающихся гемолизом или кровопотерей.

2. Оценка способности костного мозга к регенерации после цитотоксической терапии и трансплантации костного мозга.

3. Оценка восстановления синтеза эритропоэтина после трансплантации почки

4. Допинговый контроль у спортсменов (прием эритропоэтина)

5. Диагностика неэффективного гемопоэза или снижения продукции эритроцитов

6. Дифференциальная диагностика анемий

7. Детекция нарушения регенераторной способности косного мозга при дефиците железа, витаминов В12, В6, фолатов, меди и мониторинга соответствующей терапии

8. Оценка реакции на терапию эритропоэтином, эритросупрессорами.