Серологическая диагностика малярии

Большинство серологических методов диагностики малярии (пассивная гемагглютинация, преципитация в геле, связывание комплемента и др.) не получили широкого распространения вследствие сложной методики их постановки, необходимости специальной подготовки персонала, наличия особого лабораторного оснащения и стандартизированных антигенов, а также из-за недостаточной специфичности результатов. Даже наилучший из этих методов — метод непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), играет в лабораторной диагностике лишь второстепенную роль.

Во всех случаях диагностики малярии основной является паразитологическая диагностика путем приготовления и изучения препаратов толстой капли и тонкого мазка.

Задача №1

При подсчете тромбоцитов по Фонио в мазке на 1000 эритроцитов было подсчитано 50 тромбоцитов. Общее количество эритроцитов в 1 литре крове 4,7*10¹²/л.

1. Сколько тромбоцитов у пациента в 1 литре крови? 4,7*50 = 235*10⁹/л

2. Дайте оценку результату. Норма. (180-320*10⁹/л)

3. Какие методы определения тромбоцитов вам известны? В камере Горяева, по Фонио, на анализаторе.

4. Какие методы исследования гемостаза применяются в клинической лаборатории? Подсчет тромбоцитов: в камере Горяева, по Фонио, на анализаторе. Длительность кровотечения по Дуке. Свертываемость по Сухареву, по Бюркеру. Ретракция кровяного сгустка. Скрининговые тесты. Индуцированная агрегация тромбоцитов.

Задача №2

При подсчете количества ретикулоцитов был получен результат 25‰

1. Что такое ретикулоциты? Незрелые эритроциты.

2. Дайте оценку полученному результату. Намного выше нормы (5-8‰)

3. Что могло явится причиной подобного результата? Гемолитическая анемия, острая кровопотеря, малярия, полицитемия, лечение железом железодефицитной анемии, острая гипоксия, метастазы опухолей в костный мозг.

4. Назовите один из методов окраски ретикулоцитов и его принцип.

Бриллианткрезилблау — сначала на стекло наносится краска, потом делается мазок крови.

Задача №3

У пациента с высокой температурой и ознобом подозрение на приступ малярии. Назначено исследование крови на наличие марярийного плазмодия.

1. Какова технология взятия крови на наличие малярийного плазмодия? Капиллярная кровь, тонкий мазок, толстая капля, 5-10 стекол.

2. Опишите методику окраски препаратов на выявление малярийного плазмодия?

3. Какие стадии развития и где проходит малярийный плазмодий?

4. Опишите микроскопическую картину в препаратах.

Определение групп крови человека АВ0 при помощи Цоликлонов анти-А и анти-В

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп кроуи человека системы АВ0, взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

Определение групп крови системы АВ0 включает выявление антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами и выявление агглютининов альфа и бетта в сыворотке или плазме исследуемой крови стандартными эритроцитами.

Характеристика и основные свойства цоликлонов анти-А и анти-В

Цоликлоны анти-А и анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителобразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридомные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, полностью идентичные по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.

Цоликлоны не являются продуктами клеток человека и поэтому исключены контаминация препаратов вирусами гепатита и СПИДа.

Техника определения групп крови человека системы АВ0

Определение группы крови АВ0 производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.), и крови, взятой из пальца (без консерванта).

Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.

Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15 до +25 градусов Цельсия.

Реагенты не должны хранится открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную («анти-А» или «анти-В») пипетку.

Для каждого определения группы крови достаточно применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. На планшет или пластину Цоликлоны анти-А и анти-В наносят по одной большой капле (0,1 мл) по соответствующими надписями: анти-А и анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше капли антител (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо обеспечить достаточно большое количество эритроцитов, т. е. надо брать первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови (без избытка сыворотки).

При определении группы крови на планшете антитела и крови смешивают тщательно вымытым сухим шариком, покачивая планшет; при определении на пластинке — стеклянной палочкой, которую промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли.

Наблюдение за ходом реакции с Цоликлонами проводят при легком покачивании пластинки или планшета в течение не более 2,5 минут.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным.

Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья вплоть до одного большого агглютината.

При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Агглютинация с Цоликлонами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 3-5 секунд. Наблюдение следует вести 2,5 минуты ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Оценка результатов реакции агглютинации с Цоликлонами анти-А и анти-В представлены в таблице, в которую также включены результаты определения агглютинатов в сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов.

№	Реакция исследуемых эритроцитов с Цоликлоном		Реакция исследуемой сыворотки (плазмы) со стандартными эритроцитами группы		Исследуемая кровь принадлежит к группе
	Анти-А	Анти-В	А(II)	B(III)
1	-	-	+	+	0 (I)
2	+	-	-	+	A (II)
3	-	+	+	-	B (III)
4	+	+	-	-	AB (IV)

1. Агглютинации нет ни с Цоликлоном анти-А, ни с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты не содержат антигенов А и В, и кровь принадлежит к группе 0 (I). Это подтверждается наличием агглютининов альфа и бета в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и B (III).

2. Агглютинация наблюдается только с Цоликлоном анти-А. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген А, и кровь принадлежит к группе А(II). Это подтверждается наличием агглютининов бета в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы В (III).

3. Агглютинация наблюдается только с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген В, и кровь принадлежит к группе В (III). Это подтверждается наличием агглютининов В (III) в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы А (II).

4. Агглютинация наблюдается как с Цоликлоном анти-А, так и с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат оба антигена (А и В), и кровь принадлежит к группе АВ (IV). Это подтверждается отсутствием агглютининов альфа и бета в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам отрицательной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и В (III).