Малярия

Возбудители малярии относятся к типу Sporozoa, классу Coccidea, отряду Haemosporida, семейству Plasmodiidae. Известно четыре вида плазмодиев — возбудителей трех клинических форм малярии человека: Plasmodium vivax — возбудитель трехдневной малярии, P. malariae — возбудитель четырехдневной малярии, P. falciparum — возбудитель тропической малярии, P. ovale — возбудитель ovale-малярии (типа трехдневной).

Цикл развития малярийных паразитов совершается со сменой хозяев. Бесполое размножение, или шизогония, протекает в клетках печени больного малярией (проэритроцитарная шизогония) и в эрироцитах (эритроцитарная шизогония). Высказано предположение о наличии параэритроцитарного цикла у P.vivax и P.ovale. Половое размножение с последующей спорогонией происходит в организме в организме комара рода Anopheles.

Для обнаружения малярийных плазмодиев готовят мазки и толстые капли крови обследуемых. Паразиты обнаруживаются в крови как на высоте приступов болезни, так и в промежутках между ними.

Лабораторная диагностики малярии. Исследование тонкого мазка крови

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, пипетки или дозаторы, предметные стекла, шлифовальное стекло или шпатель, ватные шарики, скарификаторы, карандаш, контейнер для окрашивания, микроскоп.

Реактивы 3-5% водный раствор краски Романовского-Гимзы, буферная вода, 70% этиловый спирт, 96% этиловый или метиловый спирт.

Приготовление реактива:

1. Для приготовления 100 мл 3-5% раствора краски Романовского-Гимзы в мерную колбу на 100 мл наливают 3-5мл маточного ее раствора и доливают буферной водой (pH 7,0-7,2).

2. Для приготовления 1 л буферной воды (pH 7,0) нужно в мерный цилиндр налить 63 мл раствора Na₂HPO₄, затем 37 мл раствора KH₂PO₄ и 900 мл дистиллированной воды.

Алгоритм действий:

1. Капиллярная кровь из пальца забирается в комплекте, тонкий мазок и толстая капля.

2. На предметное стекло с правой стороны, отступив от края на 1-1,5 см, наносят маленькую капельку крови. Стекло кладут на горизонтальную поверхность и фиксируют его левой рукой.

3. В правую руку берут шлифовальное стекло, ставят перед каплей крови под углом 45 градусов, продвигают вперед со соприкосновения с последней и, когда кровь равномерно распределится между обоими стеклами, быстрым движением делают мазок.

4. Тонкий мазок на воздухе высыхает очень быстро. После высыхания его маркируют карандашом (пишут по мазку на толстом краю).

5. После маркировки мазок фиксируют в 96% этиловом спирте в течение 20-30 минут или в метиловом 3-5 минут.

6. После фиксации мазок высушивают и окрашивают 3-5% водным раствором краски Романовского-Гимзы.

7. По окончании окраски, препараты тщательно промывают, подставляя контейнер под слабую струю воды, а затем просушивают в вертикальном положении.

8. После просушивания препарат исследуют под микроскопом с масляной иммерсией (объектив х90 или х100, окуляр х7).

9. Просматривают не менее 100 полей зрения и подсчитывают численность паразитов.

Исследование толстой капли крови

Оснащение: дезраствор, одноразовые перчатки, пипетки или дозаторы, капилляр, предметные стекла, ватные шарики, скарификаторы, карандаш, контейнер для окрашивания, микроскоп.

Реактивы: 3-5% водный раствор краски Романовского-Гимзы, буферная вода, 70% этиловый спирт.

Приготовление реактива:

1. Для приготовления 100 мл 3-5% раствора краски Романовского-Гимзы в мерную колбу на 100 мл наливают 3-5 мл маточного ее раствора и доливают буферной водой (pH 7.0-7.2).

2. Для приготовления 1 л буферной воды (pH 7,0) нужно в мерный цилиндр налить 63 мл раствора Na₂HPO₄, затем 37 мл раствора KH₂PO₄ и 900 мл дистиллированной воды.

Алгоритм действий:

1. Капиллярная кровь из пальца забирается в комплекте, тонкий мазок и толстая капля.

2. Две толстые капли наносятся на мокрый тонкий мазок (лучше капилляром), между которыми после высыхания подписывается карандашом фамилия и дата взятия.

3. Капли высушивают на воздухе в горизонтальном положении, оберегая их от насекомых, пыли, прямого солнечного света.

4. Затем, без предварительной фиксации, окрашивают 3-5% водным раствором краски Романовского-Гимзы в специальных контейнерах, в которых стекла помещаются вертикально, в течение 15-30 минут.

5. По окончании окраски, препараты тщательно промывают, подставляя контейнер под слабую струю воды, а затем просушивают в вертикальном положении.

6. После просушивания препарат исследуют под микроскопом с масляной иммерсией (объектив х90 или х100, окуляр х7).

7. Просматривают не менее 100 полей зрения и подсчитывают численность паразитов.