Визначення групи крові за допомогою стандартних сироваток

Реагенти:

1. Стандартні поліклональні (ізогемаглютинуючі) сироватки груп 0(І), А(ІІ), В(ІІІ) двох різних серій кожної групи і стандартна сироватка групи АВ(IV). Титр сироватки ( те максимальне її розведення, при якому може наступати реакція аглютинації) повинен бути не нижче 1:32, а для сироватки В (III) - не нижче 1:16. Для зручності стандартні сироватки різних груп підфарбовані у певний колір: 0(І) - безбарвна (сіра), А (II) - синя, В (III) - червона, АВ (IV) - яскраво-жовта. Вказані кольори групової приналежності співпадають з маркуванням етикеток крові та всіх препаратів крові.

2. 0,9% розчин NaCl.

Спеціальне устаткування, матеріали:

• Білі планшети або порцелянові (емальовані) тарілки.

• Скляні або пластмасові палички.

• Піпетки.

• Захисні рукавички.

Методика виконання:

Визначення проводять у приміщенні з достатнім освітленням при температурі від +15 до +25°С. Досліджують цільну кров, відмиті еритроцити, еритроцити в плазмі, сироватці або в 0,9% розчині натрію хлориду. Для дослідження не використовують пуповинну кров через можливість помилки, пов'язаної з потраплянням материнських еритроцитів. У хворих на анемію кров стабілізують гепарином.

• Площину маркірують, наносячи позначення зліва направо «О», «А», «В». Під відповідними позначками наносять по одній великій краплі (0,1мл) кожної сироватки двох серій;

• Поряд з кожною сироваткою наносять по одній маленькій краплі (0,01 мл) досліджуваного зразка крові дитини (еритроцитів), тобто у співвідношенні до сироватки 1:10;

• Змішують окремими скляними паличками кожну краплю крові (еритроцитів) з відповідною сироваткою;

• Змішавши всі краплі, пластину погойдують, потім на 1-2 хв. залишають у спокої і знову погойдують. Хоча аглютинація починається вже протягом перших 10-30 с., спостереження за ходом операції проводять не менше 5 хв., тому що можлива пізня аглютинація, наприклад, з еритроцитами групи А2;

• Через 3-4 хв. до крапель суміші сироватки з еритроцитами, де відбулась аглютинація, додають по 1 краплі (0,05 мл) 0,9% розчину NaCl і продовжують спостерігати до 5 хв. при періодичному погойдуванні пластини;

• У разі позитивної реакції в суміші з'являються видимі неозброєним оком дрібні червоні зернятка (аглютинати), що складаються зі склеєних еритроцитів, які можуть згруповуватись в більші пластівці. Сироватка стає безкольоровою;

• У разі негативної реакції рідина весь час (5 хв.) залишається рівномірно забарвленою і в ній не спостерігається зернистості (аглютинатів);

• Результати реакцій в обох краплях з сироватками однієї і тієї ж групи (двох різних серій) мають співпадати. В разі отримання аглютинації в усіх трьох парах крапель, проводять додаткове дослідження з сироваткою АВ (IV) для виключення неспецифічної аглютинації (так само, на протязі 5 хвилин).

Інтерпретація результатів:

В результаті досліджень можна отримати чотири різні комбінації позитивних та негативних реакцій*:

Група крові, що досліджується	Сироватка
	О (α, β)	А (β)	В (α)	АВ(без антитіл)
О	-	-	-	-
А	+	-	+	-
В	+	+	-	-
АВ	+	+	+	-
* (-) - відсутність аглютинації, (+) - наявність аглютинації.

• Якщо аглютинація відсутня в усіх краплях - кров О (І) групи.

• Наявність аглютинації в першій та третій краплях при відсутності в другій - кров А (II)групи.

• Наявність аглютинації в першій та другій краплях при відсутності в третій - кров В (III)групи.

• Наявність аглютинації в першій, другій та третій краплях і відсутність в контрольній краплі з сироваткою АВ (IV) - кров АВ (IV)групи.

Можливі помилки:

• Невірне співвідношення кількості крові та сироватки (в нормі 1:10).

• Замалий час спостереження за реакцією (в нормі не менше 5 хв).

• Висока температура повітря (в нормі не більше 25°С).

• Відсутність контрольної реакції з сироваткою групи АВ (IV).

• Використання вологих піпеток, пластинок, забруднених паличок.

• Використання недостатньо активної сироватки (стара сироватка).

• Визначення групи крові у дітей при різноманітних патологічних станах (аутоімунна анемія під час ГХН, гнійно-септичні стани, НЕК, лейкози). Визначення групи крові необхідно проводити в лабораторних умовах з використанням стандартних сироваток з високою активністю.

• При наявності в досліджуваній крові слабкого підтипу антигену А2, реакції аглютинації з сироватками груп О(І) і В(ІІІ) починається пізніше (в середньому на 3-4 хвилини). Для уточнення результатів доцільне проведення в спеціалізованій лабораторії додаткової реакції з анти-А реактивом (реактив містить тільки анти-А антитіла і виготовляється з насіння рослини Dolichosbitforis).