27. Методы определения количества и функциональной активности лимфоцитов.

Основные функции иммунной системы выполняют 2 класса лимфоидных клеток: Т- и В-лимфоциты.

Методы выявления Т-лимфоцитов основаны на выявлении поверхностных маркеров различных типов Т-лимфоцитов. Маркерами служат специфические антигены лимфоцитов и их рецепторы.

Для выявления Т-лимфоцитов применяются специфические сыворотки. К таким методам относятся

- цитотоксическая реакция,

- реакция иммунофлюоресценции,

- непрямой метод выявления антигенов Т-лимфоцитов с использованием белка А стафилококка,

- определение Т-лимфоцитов в ходе проведения теста с эритроцитами барана.

Методы определения В-лимфоцитов основаны на определении специфических антигенов В-лимфоцитов и их рецепторов.

Существуют следующие реакции выявления В-лимфоцитов:

- антитоксическая с антисывороткой против антигенов,

- с антиглобулиновой сывороткой,

- метод обнаружения иммуноглобулиновых рецепторов с использованием стафилококков, содержащих белок;

- метод иммунофлюоресценции с меченными антисыворотками.

Применение радиоизотопных методов позволило установить существование 2 популяций лимфоцитов: короткоживущих (продолжительность их жизни около 4 дней) и долгоживущих (до 170 дней).

В периферической крови Т- и В-лимфоциты распределяются следующим образом:

- В-лимфоциты – 25–30 %;

- Т-лимфоциты – 60 %;

- ни В-, ни Т-лимфоциты – до 10 %.

Лимфоциты обеспечивают специфическую основу иммунитета. При первичном иммунодефиците отмечается снижение В-лимфоцитов. Повышение числа В-лимфоцитов диагностического значения не имеет.

О функциональной активности Т- и В-лимфоцитов можно судить по ответу в реакции бластной трансформации лимфоцитов.

Бластная трансформация лимфоцитов – это переход клетки в митотический цикл после воздействия на нее активирующих факторов. Морфологически этот процесс сопровождается значительным увеличением размеров лимфоцита, увеличением его ядра, изменением ядерно-цитоплазменного соотношения. При этом бласттрансформированная клетка начинает пролиферировать, что можно зарегистрировать по скорости синтеза ДНК. Таким образом, один и тот же процесс – ответ лимфоцита на активирующее воздействие – можно регистрировать микроскопически, определяя процент бласттрансформированных клеток (тогда реакция называется реакцией бласттрансформации), или по включению меченых радиоактивным изотопом нуклеотидов, позволяющих оценить скорость синтеза ДНК (в этом случае реакция называется пролиферативным тестом).

Индукторами пролиферативной активности (или бласттрансформации лимфоцитов) могут быть:

- митогены растительного происхождения – фитогемагглютинин (ФГА), конканавалин А, митоген фитолакки (PWM), связывающиеся через определенные рецепторы лимфоцитов и способствующие их пролиферации. Эти митогены активируют преимущественно Т-лимфоциты, а митоген фитолакки – и Т- и В-лимфоциты,

- бактериальные полисахариды и липополисахариды (ЛПС), являющиеся тимуснезависимыми антигенами, стимулирующими пролиферацию В-лимфоцитов,

- специфические антигены, активирующие строго определенные клоны лимфоцитов соответственно Т-клеточному рецептору.

Перечисленные активаторы вносят в суспензию иммунокомпетентных клеток, инкубируют 3-10 суток и определяют уровень пролиферации клеток.

Регистрацию пролиферативной активности осуществляют по включению меченого тритием тимидина или др. методами.