Глава 28 биохимические методы, создание условий культивирования

А

Количество колоний в секторах

Количесво

бактерий в 1 мл мочи

I

II

III

1-6

-

-

-

(102)Менее 1000

8-20

-

-

-

(3*102) 3000

20-30

-

-

-

(5*102) 5000

30-60

-

-

-

(103) 10000

70-80

-

-

-

(5*103) 50000

100-150

5-10

-

-

(104) 100000

не сосчитать

20-30

-

-

(5*104) 500000

не сосчитать

40-60

-

-

(105) 1 000000

не сосчитать

100-140

10-20

-

(5*105) 5 000000

не сосчитать

не сосчитать

30-40

-

(106) 10 000000

не сосчитать

не сосчитать

60-80

единичные колонии

(107) 100 000000

локализация

возбудитель

примечание

Обострение хронического

бронхита

Вирусы

H. influenzae

особенно у курильщиков

Внебольничная пневмония

S.pneumoniae, H. influenzae

Moraxella (Branhamella) catarrhalis

Mуcoplasma pneumoniae

в возрасте от 5 до 25 лет чаще, чем в других возрастных группах

Грамотрицательные бактерии

Грибы рода Candida

возрастает роль для пожилых пациентов

Госпитальная пневмония

K.pneumoniae, Enterobacter spp., E.coli,

Pseudomonas spp., S.aureus

интубированные больные

Аспирационная пневмония

Анаэробы ротовой полости в чистом виде

или в сочетании с грамотрицательными

бактериями

Атипичная пневмония

Mycoplasma pneumoniae

Ch. pneumoniae, Ch. psitacci Legionella pneumophila,

вирусы

Пневмония у больных с иммунодефицитами

Pneumocystis carinii,

микобактерии, Nocаrdia spp.,

грибы, цитомегаловирусы

считаются маркёрами ВИЧ-инфекции

Тип клеток и их количество

оценка

Нейтрофиллы

<10

0

10-25

+1

>25

+2

Присутствие слизи

+1

Эпителиальные клетки

10-25

-1

>25

-2

Биоматериал

Правила взятия материала

Условия

транспортировки

и хранения

Микроскопический метод исследования

Отделяемое из уретры

(мужчины)

Взятие материала

проводится не ранее

2-3 часов

после мочеиспускания

Пробоподготовка: пациент слегка массирует уретру скользящими движениями от основания пениса к его

головке; область наружного отверстия уретры

очищается с помощью стерильного марлевого тампона (крайнюю плоть отвести назад).

Отбор материала: осторожно ввести инструмент в

наружное отверстие мочеиспускательного канала

(на глубину 1-2 см); слегка нажимая на переднюю

стенку уретры собрать материал.

Каждое стекло:

маркируется,

помещается в контейнер

для транспортировки; сопровождется

направлением

помещенным в

полиэтиленовый пакет.

При необходимости

хранения материала

более 24 часов после высушивания каждый

образец отдельно

фиксируют 96⁰

этиловым спиртом в

течение 3 минут. В направлении должно быть

указание на

проведенную

фиксацию препарата.

Отделяемое из уретры

(женщины)

Взятие материала

проводится не ранее

2-3 часов после

мочеиспускания

Пробоподготовка: наружное отверстие уретры очистить

с помощью стерильного тампона; при отсутствии

свободных выделений провести легкий массаж уретры.

Отбор материала: ввести инструмент в наружное

отверстие мочеиспускательного канала (на глубину 0,5-

2 см); слегка нажимая на переднюю стенку уретры

собрать материал.

Отделяемое из

цервикального канала

Пробоподготовка: ввести гинекологическое зеркало;

очистить наружное отверстие цервикального канала от выделений при помощи стерильного тампона.

Отбор материала: ввести инструмент в цервикальный

канал (на глубину 2 см) и вращая его, собрать

материал.

У беременных для исследования собираются свободно истекающие выделения из цервикального канала.

Отделяемое из

влагалища

(девочки

препубертатного возраста)

Отбор материала: при наличии выделений используется стерильный тампон. При отсутствии выделений ложка Фолькмана. Инструмент осторожно вводится через гименальное отверстие и материал берется из преддверия влагалища.

Культуральный метод исследования

Отделяемое из уретры

(мужчины)

См. Микроскопический метод исследования

Материал

доставляется на

исследование не

позднее 2-х часов.

Допускается

хранение при

комнатной

температуре

в течение

24-х часов при

использовании

транспортных сред.

Содержимое

предстательной железы

Отбор материала: получение материала рекомендуется проводить после мочеиспускания;

провести ректальный массаж предстательной

железы; материал для исследования собрать

из наружного отверстия уретры.

Отделяемое из уретры

(женщины)

См. Микроскопический метод исследования

Отделяемое из

цервикального канала

См. Микроскопический метод исследования

Отдел.из влагалища(дев)

См. Микроскопический метод исследования

Свойства

стафилококки

микрококки

Размеры клеток

до 1 мкм

0,5 – 2 мкм

Окраска колоний

от золотистого до белого

от белого до розово-красного, оранжевого

Ферментация глюкозы в

анаэробных условиях

+

-

Гемолиз

+

-

-

Окисление глицерина

+

-

микроорганизм

Плазмокоагуляция

Ферментация маннита

Гемолиз

Лецитиназа

Лизоцимная активность

Определение

ДНКазы

аэробно

анаэробно

S. aureus

+

+

+

+

+

+

+

S.epidermidis

-

+ -

-

-

-

-

-

S.saprophyticus

-

+ -

-

-

-

-

-

№ варианта

Наличие

Фермента

ция маннита

(анаэробно)

Принадлеж

ность

штамма

к виду

пигмента

лецити

назы

коагулазы

ДНК-азы

1

+

+

+

Да

2

-

+

+

Да

3

+

-

+

Да

4

-

-

+

?

4а

-

-

+

+

Да

4б

-

-

+

-

Нет

4в

-

-

+

+

Да

4г

-

-

+

-

Нет

5

-

-

-

Нет

6

-

+

-

Нет

7

+

-

-

Нет

8

+

+

-

?

8а

+

+

-

+

Да

8б

+

+

-

-

Нет

8в

+

+

-

+

Да

8г

+

+

-

-

Нет

Группа

Устойчивость к новобиоцину

Фосфатаза

Окисление маннита

S. epidermidis

-

+

-

S. saprophyticus

+

-

+

Штаммы (АТСС) микроорганизмов

Рост

Гидролиз гиппурата натрия

Enterococcus faecalis ATCC 29212

обильный

-

S.agalactiae ATCC 4768

обильный

+

S.pyogenes ATCC 19615

обильный

-

Свойства

Групповая принадлежность

А

(S.pyogenes)

В

(S.agalactiae)

C и G

Вид гемолиза на кровяном

агаре

β

β,α

β

Гидролиз гиппурата натрия

-

+

-

CAMP тест

-

+

-

Наличие PYR

+

-

-

Чувствительность к

бацитрацину

+

-

-

Инфекции

Возрастная группа

Штаммы

Инвазивные:

Менингит, эпиглоттит, пневмония, септический артрит, остеомиелит, целлюлит, бактериемия

90%-дети до 4 лет;10% -

дети старшего возраста и взрослые

90% - тип b

10%- нетипируемые

1% - типы е и f

сепсис

Новорожденные, роженицы

>90% - нетипируемые

Неинвазивные:

средний отит, синусит,

конъюктивит, обострение

хронического бронхита

Дети и взрослые

>90% - нетипируемые

Вид

Потребность

Оксидаза

O

бразование кислоты из

Х и

V фак­торах

CO₂

Каталаза

ОNPG

Гемолиз*

глюкозы

сахарозы

лактозы

маннозы

Н. influenzae

x,v

+

+

+

-

_

-

-

+

-

-

-

Н. influenzae биовар aegypticus

x,v

-

+

+

-

-

+

-

-

-

H.haemolyticus

x,v

-

+

+

+

+

+

-

-

-

H.parainfluenzae

V

-

+

-

+

+

-

+

+

-

+

H.parahaemolyticus

V

+

+

+

-

+

+

+

-

-

H.aphrophilus

h

+

-

-

+

-

+

+

+

+

H.paraphrophilus

V

+

-

+

+

-

+

+

+

+

H.segnis

V

-

+

-

-

+

-

-

W

W

-

-

H. ducreyi

X

-

-

-

-

-

-

-

-

-

Биотип

Индол

Уреаза

Орнитиндекарбоксилаза

Н. influenzae I

+

+

+

Н influenzae II

+

+

-

Н. influenzae III

-

+

-

Н. influenzae IV

-

+

+

Н. influenzae V

+

-

+

Н. influenzae VI

-

-

+

Н. influenzae VII

+

-

-

Н influenzae VIII

-

-

-

Наименование

Рост на агаре

Морфология клеток

(окраска по Граму)

каталаза

оксидаза

Β-галактозидаза

уреаза

без крови

Шоколад. агар

Н. influenzae

-

+¹

Грамотрицательные

мелкие палочки

+

-

-

+

N. meningitidis

-

+

Грамотрицательные

бобовидные диплококки

+

+

-

-

Neisseria spр.

+

+

Грамотрицательные

крупные кокки

+

+

-

-

Branhamella

+

+

Грамотрицательные

крупные кокки

+

+

-

-

Moraxella

-

+

Грамотрицательные кокко-бациллы

+

+

-

-

Acinetobacter

+

+

Грамотрицательные кокко-бациллы

+

-

-

+,-

S. pneumoniae

-

+²

Грамположительные диплококки

-

-

+

-

расщепление

Редукция нитратов

пиразин- амида

цистина

глю- козы

маль- тозы

саха- розы

крах- мала

моче- вины

C. accolens

В

-

+

-

В

НД

-

+

C. afermentans

+

-

-

-

-

НД

-

-

C. amycolatum

+

-

+

В

В

НД

В

В

C. argentoratense

+

-

+

-

-

НД

-

-

C. aurimucosum

+

-

+

+

+

НД

-

-

C. auris

+

-

-

-

-

НД

-

-

C. bovis

-

-

+

-

-

-

В

-

C. confusum

+

-

(+)

-

-

НД

-

+

C. coyleae

+

-

(+)

-

-

-

-

-

CDC group F-1

+

-

+

+

+

-

+

В

CDC group G

+

-

+

В

В

-

-

В

C. diphtheriae gravis

-

+

+

+

-

+

-

+

C. diphtheriae intermedius

-

+

+

+

-

-

-

+

C. diphtheriae mitis

-

+

+

+

-

-

-

+

C. diphtheriae belfanti

-

+

+

+

-

-

-

-

C. durum

+

-

+

+

+

НД

В

+

C. falsenii

(+)

-

(+)

В

-

НД

(+)

-

C. freneyi

+

-

+

+

+

НД

-

В

C. glucuronolyticum

+

-

+

В

+

НД

В

В

C. imitans

(+)

-

+

+

(+)

НД

-

В

C. jeikeium

+

-

+

В

-

-

-

-

C. kroppenstedtii

+

-

+

В

+

НД

-

-

C. lipophiloflavum

+

-

-

-

-

НД

-

-

C. macginleyi

-

-

+

-

+

-

-

+

C. matruchotii

+

-

+

+

+

НД

-

+

C. minutissimum

+

-

+

+

В

НД

-

-

C. mucifaciens

+

-

+

-

В

НД

-

-

C. “nigricans”

В

-

+

+

(+)

НД

-

-

C. propinquum

В

-

-

-

-

НД

-

+

C. pseudodiphtheriticum

+

-

-

-

-

-

+

+

C. pseudotuberculosis

-

+

+

+

-

-

+

В

C. riegelii

В

-

-

(+)

-

НД

+

-

C. sanguinis

+

-

(+)

-

-

НД

-

-

C. singulare

+

-

+

+

+

НД

+

-

C. simulans

В

-

+

-

+

НД

-

+

C. striatum

+

-

+

В

В

-

-

+

C. sundsvallense

В

-

+

+

+

НД

+

-

C. thomssenii

+

-

+

+

+

НД

+

-

C. ulcerans

-

+

+

+

-

+

+

-

C. urealyticum

+

-

-

-

-

-

+

-

C. xerosis

+

-

+

+

+

-

-

+

Тест или субстрат

Escherichia

Shigella

Salmonella

Citrobacter

Klebsiella

Enterobacter

Hafnia

Serratia

Proteus

Yersinia

Edwardsiella

Erwinia

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

Комбиниро-ванная среда

Сероводород

-

-

+,-

+,-

-

-

-

-

+,-

-

+

-,+

Лактоза

+,-

-

-,+

х

+

+

-,+

-,+

-

-

-

х

Глюкоза (газ)

+,-

-

+,-

+

+

+

+,-

-,+

+,-

-

+

-

Мочевина

-

-

-

х

-

(+),-

-

х

+,-

+,(+)

-

-

Минимальный дифференцирующий ряд

Мочевина

(по Преусу/Кристенсену)

-

-

-

х

(+),+

(+),-

-

х

+,-

+

-

-

Подвижность

+,-

-

+,-

+

-

+

х

+

+,-

-

+

+

Индол

+,-

-,+

-

-,+

-,+

-

-

-

+,-

х

+

-

Фенилаланиндезаминаза

-

-

-

-

-

-

-

-

+

-

-

х

Цитрат Симонса

-

-

+,-

+

+

+

х

+

х

-

-

+

Ацетат натрия

+,(+)

-

х

х

+

+

-,(+)

х

х

х

х

х

Лизиндекарбоксилаза

+,-

-

+,-

-

+

-,+

+

+

-

-

+

-

Орнитиндекарбоксила-за

х

-,+

+

х

-

+

+

+

-,+

х

+

-

Среда Кларка

реакция с метиловым красным

+

+

+

+

-,+

-

+

х

+

+

+

-

реакция Фогеса-Проскауэра

-

-

-

-

+,-

-

+

х

+

+

+

-

Сорбит

х

х

+

+

+

+

-

+

-,+

х

-

х

Тест или субстрат

Escherichia

Shigella

Salmonella

Citrobacter

Edwardsiella

Klebsiella

Enterobacter

Hafnia

Serratia

Proteus

Yersinia

Erwinia

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

Цитрат Симонса

-

-

+,-

+

-

+

+

х ¹,+ ²

+

х

-

+

Мочевина

-

-

-

х

-

(+),+

(+),-

-

х

+,-

+

-

Малонат натрия

-

-

-,+

-,+

-

+

+,-

х

-

-

-

х

Фенилаланиндезаминаза

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

-

х

Сероводород

-

-

+,-

+,-

+

-

-

-

-

+,-

-

+

Подвижность

+,-

-

+,-

+

+

-

+

х ¹,+ ²

+

+,-

-¹,+ ²

+,-

Индол

+,-

-,+

-

-,+

+

-,+

-

-

-

+,-

-

-

Р-я с метиловым красным

+

+

+

+

+

-,+

-

+ ¹,- ²

+ ¹

+

+

-

реакция Фогеса-Проскауэра

-

-

-

-

-

+,-

+

х ¹,+ ²

х ¹

-

-

х

Лизиндекарбоксилаза

+,-

-

+,-

-

+

+

-,+

+

+

-

-

-

Аргининдигидролаза

х

-,+

(+),+

х

-

-

+,-

-

-

-

-

-

Орнитиндекарбоксилаза

х

-,+

-

х

+

-

+

+

+

-,+

х

-

Глютаминовая кислота

+

+

-

-

-

-

-

-

-

+

-

-

Желатин

-

-

-,(+)

-

-

-

-,(+)

-

+

х

-

+

КСN

-

-

-,(+)

+

-

+

+

+

+

+

-

х

Ацетат натрия

+,(+)

-

х

х

х

+

+

-,(+)

х

х

х

х

Цитрат Кристенсена

х

-

+

+

+

+

+

+

+

х

.

.

Целлобиоза

-

-

х

х

-

+

+

х

х

х

+

х

Газообразование из глюкозы

+,-

-,+

+,-

+

+

+

+

х

х

х

-

-

Адонит

-,+

-

-

-

-

+

х

-

х

-,+

х

-

Арабиноза

х

х

+

+

-

+

+

+

-

-

х

+

Глицерин

+

х

+

+

.

+

-,+

+

+

+

.

х

Дульцит

х

х

+,-

х

-

-,+

х

-

-

-

-

-

Инозит

-,+

-

х

-,+

-

+

-,+

-

х

-,+

х

Ксилоза

х

х

х

+

.

+

+

+

х

+,-

х

х

Лактоза

х

-(+)

-,+

х

-

+

+

х

-,+

-

-

х

Мальтоза

х

х

+

+

.

+

+

+

+

+,-

+

+

Маннит

+

+,-

+

+

-

+

+

+

+

-,+

+

+

Рамноза

х

х

х

+

-

+

+

+

-

х

+,-

+

Раффиноза

х

х

-,+

х

-

+

+

-

-

-

-

Салицин

х

-

-

х

-

+

х

х

+

х

+,-

х

Сахароза

х

-

-

+

-

+

+

х

+

х

-,+

х

Сорбит

х

х

+

+

-

+

+

-

+

-,+

х

х

Тест или субстрат

Вид

Ps. aeruginosa

Ps. fluorescens

Ps. putida

Цитохромоксидаза

+

+

+

Пигмент пиоцианин

+

-

-

Флуоресценция

+

+

+

Глюкоза

+

+

+

Рост на ацетамидном агаре

+

-

+

Рост при 5⁰С

-

+

-

Рост при 42⁰С

+

-

-

Желатиназа

+

+

-

Признак

L. mono

cytogenes

L. ivano

vii

L. seeli

geri

L. inno

cua

L. welshi

meri

L. gra

yi

Ферментация маннита

Ферментация ксилозы

Ферментация рамнозы

-

-

+

-

+

-

-

+

-

-

-

+/-

-

+

+/-

+

-

+/-

Бета-гемолиз

+

+

+

-

-

-

САМР-тест - усиление

гемолиза около штриха:

Rhodococcus egui

Staphylococcus aureus

-/+

+

+

-

-

+

-

-

-

-

-/+

-

Гидролизлецитина без угля

Гидролиз лецитина с углем

-

+

+

+

-

-

-

-

-

-

-

-

Патогенность для человека

Высокая

Низкая

Отсутствует

микроорганизмы

На рисовом агаре 25°С

капсула

(индийские чернила)

уреаза

рост при 25°С с циклогексимидом

рост при 37°С

псевдогифы

гифы

бластоконидии вдоль гифы

артроконидии

Candida spp

+

некоторые

+

0

0

0 ^V

V

+

Torulopsis spp.

0

0

0

0

0

0

+

Rhodoturola spp.

0 ^R

0

0

V

+

0 ^V

+ ^V

Cryptococcus spp.

0 ^R

0

0

+

+

0

V

Saccharomyces spp.

V

0

0

0

0

0

+

Geotrihum spp.

0

+

0

+

0

0

0

плохо

Trichosporon spp.

+

+

+

+

0

+ ^V

+ ^V

+ ^V

организм

Морфологические свойства

колоний на рисовом агаре

при 25°С в течение 24-48 часов

Рост в бульоне Сабуро

при 25-30°С до 5 дней

рост при 25°С с циклогексимидом

проростковая проба

уреазный тест

ферментация

глюкоза

мальтоза

сахароза

лактоза

трегалоза

C. albicans

псевдогифы с терминальны

ми хламидиоспорами; класте

ры бластоконидий на септе

не образуют пленку

на поверхности

+

+

0

+

+

0

0

+^V

C. tropicalis

бластоконидии вдоль

псевдогифы

скудный пле

ночный

рост с пузырь

ками

0

0

0

+

+

+^V

0

+^V

C. parapsilosis

бластоконидии вдоль

закруглений псевдогифы; многократные разветвления с искривлением псевдогиф

не образуют пленку

на поверхности

0

0

0

+

0

0

0

0

C. lusitaniae

короткие цепочки с удлинен

ными бластоконидиями

вдоль закруглений севдогифы

не образуют пленку

на поверхности

0

0

0

+

0

V

0

V

C. guilliermondii

довольно короткие,

мелкие псевдогифы;

кластеры бластоконидий

на септе

не образуют пленку

на поверхности

+

0

0

+

0

+^W

0

+^W

C. krusei

псевдогифы с многократно ветвящимися удлиненными бластоконидиями

хороший

поверхностный

рост на

поверхности

бульона

0

0

+^V

+

0

0

0

0