4. Реакции на остатки гуанидина.

а) Реакция с α-нафтолом. Растворяют 0,005 г в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 2 мл свежеприготовленного 0,05% раствора α-нафтола в 10% растворе натрия гидроксида и 5 капель бромной воды; появляется малиновое окрашивание. (Растворяют 0,005 г в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 1 мл свежеприготовленного 0,5% раствора α-нафтола в 40% спирте. Затем охлаждают до 15⁰С и прибавляют 3 купли 5% гипобромида натрия; появляется фиолетово-красное окрашивание).

б) Реакция с окисленным раствором нитропруссида натрия. Растворяют 0,01 г стрептомицина сульфата в 1 мл дистиллированной воды и прибавляют 1 мл раствора окисленного натрия нитропруссида (смешивают равные объемы 10% раствора натрия нитропруссида, 10% калия гексацианоферрата (III) и 10% раствора нитрия гидроксида. Через 15-20 мин 1 мл полученного раствора доводят водой до объема 10 мл. Появляется красное окрашивание.

Канамицина моносульфат

1. Реакция с раствором хлорида бария.

Растворяют 0,02 г канамицина моносульфата в 2 мл дистиллированной воды. При добавлении раствора хлорида бария выпадает белый мелкокристаллический осадок.

2. Реакции на углеводы.

а) Реакция с реактивом Фелинга. Растворяют 0,01 г канамицина моносульфата в 3 мл дистиллированной воды, прибавляют 2 мл разбавленной кислоты хлористоводородной и 2-3 капли реактива Фелинга.

б) Реакция с аммиачным раствором серебра нитрата. Растворяют 0,01 г стрептомицина сульфата в 3 мл дистиллированной воды, прибавляют 2 мл разбавленной кислоты хлористоводородной и 1 мл аммиачного раствора серебра нитрата. При нагревании полученного раствора в кипящей водяной бане в течение 3 минут; на стенках пробирки появляется металлическое зеркало.

в) Реакция с реактивом Несслера. Растворяют 0,01 г стрептомицина сульфата в 3 мл дистиллированной воды, прибавляют 2 мл кислоты хлористоводородной разбавленной и 0,5 мл реактива Несслера. Появляется черный осадок металлической ртути.

3. Реакции на 5-аминофурфурол.

а) Реакция с орцином. 0,1 г препарата растворяют в 20 мл воды. К 2 мл раствора прибавляют 0,8 мл 20% спиртового раствора орцина, 10 мл концентрированной кислоты хлористоводородной, содержащей 0,06% железа (III) хлорида и помещают в кипящую водянию баню на 20 мин; появляется зеленое окрашивание.

б) Реакция с α-нафтолом. 0,1 г препарата растворяют в 20 мл воды. К 2 мл раствора прибавляют 0,8 – 1 мл 20% спиртового раствора α-нафтола, 10 мл концентрированной кислоты хлористоводородной, содержащей 0,06% железа (III) хлорида и помещают в кипящую водянию баню на 20 мин; появляется зеленое окрашивание.

Тетрациклин:

1. Реакция с концентрированной серной кислотой и раствором хлорида окисного железа.

Равномерно нанести 0,5 мл концентрированной серной кислоты на внутреннюю поверхность цилиндра емкостью 50 мл. На слой кислоты равномерно распределить 0,01 г тетрациклина. Появляется ярко-малиновое окрашивание, переходящее в красно-оранжевое. При добавлении примерно 10 мл дистиллированной воды окрашивание становится золотисто-желтым. Затем прибавляют по каплям 0,5 мл раствора хлорида окисного железа – появляется красно-коричневое окрашивание. Эффект реакции наблюдают на белом фоне.

2. Реакция с концентрированной серной кислотой.

К 0,001-0,002 г препарата прибавляют 2 мл концентрированной кислоты серной; появляется фиолетовая окраска.

3. Реакция образования ангидротетрациклина с концентрированной соляной кислотой.

Помещают 0,005-0,01 г тетрациклина в термостойкую пробирку, приливают 2 мл воды и 2 мл концентрированной соляной кислоты, перемешивают. Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 2-3 минуты. Появляется желтая окраска и зеленовато-желтое флюоресценция, наблюдаемая в УФ-свете.

4. Реакция изомеризации под действием натрия гидроксида.

0,01 г препарата растворяют в 2 мл 10% раствора натрия гидроксида; появляется коричнево-желтое окрашивание; нагревают в кипящей водяной бане в течение 1 – 2 мин – появляется синяя флюоресценция, наблюдаемая в УФ-свете.

5. Реакция со спиртовым раствором хлорида окисного железа.

Помещают 4 мл 0,25% раствора тетрациклина в цилиндр емкостью 50 мл, разбавляют дистиллированной водой до 25 мл, перемешивают и прибавляют 0,2 мл спиртового раствора хлорида окисного железа. Появляется коричневое окрашивание. Эффект реакции наблюдают в проходящем свете.

6. Реакция с диазореактивом.

Помещают 5 мл 0,25% раствора тетрациклина в пробирку и прибавляют 0,75 мл диазореактива. В течение 12-15 минут окрашивание раствора изменяется от желтого через ярко-оранжевое к красно-оранжевому.

Примечание: Приготовление диазореактива. 0,1 г стрептоцида растворяют при нагревании в 2 мл разведенной кислоты хлористоводородной и добавляют после охлаждения 2 мл 1% раствора нитрита натрия.

7. Реакция с аммиачным раствором нитрата меди.

Помещают 5 мл 25 % раствора тетрациклина в термостойкую пробирку и прибавляют 0,1 мл аммиачного раствора нитрата меди. Появляется опалесцирующее оливково-зеленое окрашивание. Пробирку погружают в кипящую водяную баню на 3-4 минуты. Оливково-зеленое окрашивание переходит в светло-коричневое.

Окситетрациклин:

1. Реакция с концентрированной серной кислотой.

Равномерно нанести 0,5 мл концентрированной серной кислоты на внутреннюю поверхность цилиндра емкостью 50 мл. На слой кислоты равномерно распределить 0,01 г окситетрациклина. Появляется огненно-красное окрашивание, переходящее постепенно в красно-оранжевое. При добавлении примерно 10 мл дистиллированной воды окрашивание становится золотисто-желтым. Эффект реакции наблюдают в проходящем свете.

2. Реакция с концентрированной серной кислотой.

К 0,001-0,002 г препарата прибавляют 2 мл концентрированной кислоты серной; появляется фиолетовая окраска.

3. Реакция образования ангидротетрациклина с концентрированной соляной кислотой.

Помещают 0,005-0,01 г тетрациклина в термостойкую пробирку, приливают 2 мл воды и 2 мл концентрированной соляной кислоты, перемешивают. Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 2-3 минуты. Появляется оранжево-красная окраска и зеленовато-желтая флюоресценция, наблюдаемая в УФ-свете.

4. Реакция изомеризации под действием натрия гидроксида.

0,01 г препарата растворяют в 2 мл 10% раствора натрия гидроксида; появляется коричнево-желтое окрашивание; нагревают в кипящей водяной бане в течение 1 – 2 мин – появляется синяя флюоресценция, наблюдаемая в УФ-свете.

5. Реакция со спиртовым раствором хлорида окисного железа.

Помещают 2 мл 0,25% раствора окситетрациклина гидрохлорида в цилиндр емкостью 50 мл, разбавляют дистиллированной водой до 25 мл, перемешивают и прибавляют пипеткой 0,2 мл спиртового раствора хлорида окисного железа. Раствор окрашивается в коричневый цвет. Эффект реакции наблюдают в проходящем свете.

6. Реакция с диазореактивом.

Помещают 5 мл 0,25% раствора тетрациклина в пробирку и прибавляют 0,5 мл диазореактива. Через 3-4 минуты появляется яркое желтое окрашивание с зеленоватым оттенком. Эффект реакции наблюдают на белом фоне и в проходящем свете.

7. Реакция с аммиачным раствором нитрата меди.

Помещают 5 мл 25 % раствора окситетрациклина гидрохлорида в термостойкую пробирку и прибавляют 0,1 мл аммиачного раствора нитрата меди. Появляется оливково-зеленое окрашивание. Пробирку погружают в кипящую водяную баню на 3-4 минуты. Оливково-зеленое окрашивание переходит в темно-коричневое.

Задание II. Выполнить количественное определение стрептомицина сульфата.

Около 0,1 г препарата (точная навеска) растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят до метки тем же растворителем. К 5 мл этого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл 0,2 М раствор гидроксида натрия и нагревают на водяной бане в течение 10 мин. Охлаждают во льду точно 5 мин, прибавляют 3 мл раствора железо-аммониевых квасцов и доводят водой до метки и перемешивают. Через 20 минут после прибавления железо-аммониевых квасцов измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 525 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют раствор приготовленный аналогичным образом, но без добавления испытуемого вещества. Рассчитывают содержание стрептомицина сульфата, используя величину поглощения .

Содержание стрептомицина сульфата рассчитывают по формуле:

где: А – оптическая плотность фотометрируемого раствора; V₁ и V₂ – объемы мерных колб, используемые для приготовления фотометрированного раствора, мл; V – объем аликвоты, взятый для приготовления фотометрируемого раствора, мл; а – навеска анализируемого вещества, г; l – толщина кюветы, см.

Содержание стрептомицина сульфата должно быть не менее 90,0%