Количественное определение креатинина в моче

Мотивация. Знакомство с унифицированным методом количественного определения креатинина в моче необхо­димо для диагностики ряда заболеваний (печени, почек, миопатиях, голодании). У здорового человека креатинин за сутки с мочой выделяется 4,4-17,7 ммоль/сут.

Реактивы. 10% раствор едкого натрия; насыщенный раствор пикриновой кислоты.

Принцип. В результате реакции креатинина и пикриновой кислоты в щелочной среде образуется окра­шенное соединение, интенсивность окраски которого пропо­рциональна концентрации креатинина.

Ход работы. Порядок выполнения работы со­гласно схеме.

Реактивы	Опытная проба	Контрольная проба
Моча	0,1	-
Дистиллированная вода	-	0,1
10% раствор едкого натрия	0,1	0,1
Пикриновая кислота насыщенная	0,15	0,15

Через 5 минут содержимое пробирок доливаем до 10 мл дистиллированной водой и перемешиваем. Фото-метрируем содержимое опытной пробы против контроля при длине волны 440 нм в кюветах с длиной оптического пути 10 мм.

По калибровочной кривой определяем содержание креатинина в 0,1 мл мочи, а затем производим пересчет ммоль/сутки, учитывая суточный диурез (1500 мл у мужчин и 1200 мл у женщин).

С = а _· 10 • СД,

где С - содержание креатинина в суточной моче;

а - содержание креатинина в 0,1 мл мочи по калибровочной кривой;

10 - коэффициент пересчета на 1 мл мочи;

СД - суточный диурез.

Клинико-диагностическое значение.

Количество эндогенного креатинина в моче повыша­ется при распаде белков, при лихорадочных состояниях и усиленной мышечной работе, недостаточности функции пе­чени. Определение креатинина в моче значительно расши­ряет возможности исследования функционального состояния почек.

СХЕМА

Протоколирования полученных результатов по определе­нию креатинина в моче

№№	Экстинция	Содержание креатинина в суточной моче	Оценка результатов
1.

Занятие 7

Тема: Лабораторный практикум «Показатели обмена железа»

Цель: продемонстрировать клинико-диагностическую значимость методов определения железа

Задачи обучения:

• Обучить методам исследования

Основные вопросы темы:

1. Методика определения содержания гемоглобина в крови

2. Методика определения содержания трансферина в плазме крови

3. Методика определения общей железосвязывающей способности сыворотки (ОЖСС)

4. Клинко-диагностическое значание определения активности ферментов и содержания метаболитов азотистого обмена в биологических жидкостях

5. Оформление протоколов исследования

6. Обсуждение полученных результатов

Методы обучения и преподавания: проведение биохимических методик, оформление протоколов, обсуждение полученных результатов (TBL)

Литература

1. Биохимия: Учебник для мед. вузов / под ред. Е.С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп., 4-е изд. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 2009,2008, 2007. - 768 с. : ил.

2. Биохимия с упражнениями и задачами : учеб. для вузов / ред. Е. С. Северин. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 384 с. : ил.

3. Березов Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин. - 3-е изд., стереотип. - М. : Медицина, 2008. - 704 с. : ил.

4. Николаев А.Я. Биологическая химия : учебник / А. Я. Николаев. - 3-е изд, перераб. и доп. - М. : Мед. информ. агентство, 2007. - 568 с.

5. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии : Учеб. пособие для вузов / Зубаиров, Д. М., Тимербаев В.Н., Давыдов В.С. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005.

6. Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001.

7. Шарманов Т.Ш., Плешкова С.М. Метаболические основы питания с курсом общей биохимии – Алматы, 1998

Контроль: качество выполнения методов исследования, оценка практических навыков работы на приборах

Оборудование и оснащение:

Оборудование: ФЭК АР – 101, ФЭК - 02, термостат ТСО 1/80, водяная баня, мойка ультразвуковая, рН-метр 150м, рН-метр С830Р, спектрофотометр, полуавтоматический/автоматический биохимический анализатор, весы лабораторные SPU 401,торсионные и аналитические весы, центрифуги, дистиллятор АДЭ – 5, компьютеры.

Оснащение: наборы химических реактивов для определения гемоглобина, билирубина, реактивы для определения лактатдегидрогеназы, лабораторная химическая посуда, штативы, компьютерные анимации, тестовые задания, ситуационные задачи.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ

Гемоглобин – основной белок эритроцитов, благодаря которому осуществляется главная функция крови – перенос кислорода. По химической природе он относится к хромопротеинам и имеет в своем составе белок (глобин) и железосодержащую простетическую группу (гем).

Мотивация. Знакомство с унифицированным методом определения гемоглобина в крови необходимо для диагностики и контроля за лечением ряда заболеваний (анемий, эритроцитозов).

Содержание гемоглобина в цельной крови составляет в норме 120 – 160 г/л (у мужчин 130 – 160 г/л, у женщин 120 – 140 г/л).

Реактивы. Трансформирующий раствор.

Принцип. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемоглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству гемоглобина.

Ход работы. 0,02 мл крови приливают к 5,0 мл трансформирующего раствора в пробирке и хорошо перемешивают. Через 10 минут измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостой пробы (трансформирующий раствор).

Расчет содержания гемоглобина производят по калибровочному графику.