Количественное определение общего билирубина в сыворотке крови

Билирубин – желто-красный пигмент; представляет собой линейный тетрапиррол. Большая часть его в организме образуется в ретикулоэндотелиальной системе печени и селезенке при распаде гемоглобина, миоглобина, цитохромов.

Мотивация. Знакомство с унифицированным методом определения билирубина в сыворотке крови необходимо для диагностики и контроля за лечением ряда заболеваний (гемолитических анемий, печени и т.д.).

Содержание общего билирубина в сыворотке крови в норме составляет 8,55 – 20,52 мкмоль/л; свободного (неконгъюгированного) – 5-15 мкмоль/л; связанного (конъюгированного) – 2-5 мкмоль/л.

Реактивы. Кофеиновый реактив; физиологический раствор; диазосмесь; 30% раствор едкого натрия.

Принцип. Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт в присутствие щелочи окрашен в зеленый цвет.

Ход работы. Порядок выполнения работы согласно схеме:

Реактивы	Контроль	Опыт
Сыворотка	0,5	0,5
Кофеиновый реактив	1,75	1,75
Физиологический раствор	0,25	-
Диазосмесь	-	0,25

20 минут при комнатной температуре

30% раствор едкого натрия

4 капли

4 капли

Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перемешивают и колориметрируют на фотоэлектроколориметре при длине волны 670 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной 5 мм против контрольной пробы. Расчет содержания общего билирубина производят по калибровочному графику.

Клинико-диагностическое значение

Повышение уровня билирубина в крови выше 27 – 34 мкмоль/л сопровождается появлением желтухи.

Желтуха при гемолитической анемии обусловлена повышением уровня свободного бирирубина. Желтуха при паренхиматозных повреждениях печени сопровождается повышением уровня связанного билирубина. Механическая желтуха сопровождается повышением содержания билирубина в основном за счет связанного билирубина.

С Х Е М А

Протоколирования полученных результатов по определению общего билирубина в сыворотке крови

№№	Экстинция	Концентрация общего билирубина в мкмоль/л	Оценка результатов
1.

Занятие 9

Тема: Лабораторный практикум: «Показатели коагуляционного гемостаза»

Цель: продемонстрировать клинико-диагностическую значимость показателей коагулограммы.

Задачи обучения:

Обучить методам исследования показателей коагулограммы и интерпретации скрининговых тестов гемостаза

Основные вопросы темы:

1.Время кровотечения.

2.Количество тромбоцитов

3.АЧТВ

4.Протромбиновое время (по Квику)

5.Тромбиновое время и /или фибриноген

Методы обучения и преподавания: проведение биохимических методик, оформление протоколов, обсуждение полученных результатов (TBL)

Литература

1. Биохимия: Учебник для мед. вузов / под ред. Е.С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп., 4-е изд. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 2009,2008, 2007. - 768 с. : ил.

2. Биохимия с упражнениями и задачами : учеб. для вузов / ред. Е. С. Северин. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 384 с. : ил.

3. Березов Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин. - 3-е изд., стереотип. - М.: Медицина, 2008. - 704 с. : ил.

4. Николаев А.Я. Биологическая химия : учебник / А. Я. Николаев. - 3-е изд, перераб. и доп. - М. : Мед. информ. агентство, 2007. - 568 с.

5. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии : Учеб. пособие для вузов / Зубаиров, Д. М., Тимербаев В.Н., Давыдов В.С. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005.

6. Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001.

7. Шарманов Т.Ш., Плешкова С.М. Метаболические основы питания с курсом общей биохимии – Алматы, 1998

Контроль: протокол исследования

Оборудование и оснащение:

Оборудование: ФЭК АР – 101, ФЭК - 02, термостат ТСО 1/80, водяная баня, мойка ультразвуковая, рН-метр 150м, рН-метр С830Р, спектрофотометр, полуавтоматический/автоматический биохимический анализатор, весы лабораторные SPU 401,торсионные и аналитические весы, центрифуги, дистиллятор АДЭ – 5, компьютеры.

Оснащение: наборы химических реактивов, лабораторная химическая посуда, штативы, компьютерные анимации, тестовые задания, ситуационные задачи.