Обнаружение кетоновых тел с помощью диагностической полоски кетоФан

Ход работы. Полоски погружают в исследуемую мочу и немедленно вынимают. Примерно через 1 мин после погружения полоски дают оценку пробы на кетоновые тела. При наличии кетоновых тел цвет полосок меняется от ро­зово-фиолетового до фиолетового.

Клинико-диагностическое значение.

Чаще всего кетонурия наблюдается при диабете, что является критерием правильности подбора пищевого ре­жима: если количество вводимых жиров не соответствует количеству усваиваемых углеводов, то увеличивается выде­ление кетоновых тел.

При уменьшении введения углеводов (лечение без инсулина) при обычном количестве жиров начинает выде­ляться ацетон; при лечении инсулином уничтожение глюкозурии достигается лучшим усвоением углеводов и не со­провождается кетонурией.

Таким образом, обнаружение кетоновых тел в моче больных диабетом необходимо для регулирования диеты.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (по Ильке)

Мотивация. Знакомство с унифицированным методом количественного определения холестерина в сыворотке крови необходимо для диагностики и контроля за лечением ряда заболеваний (атеросклероза, механической желтухи, гипотиреоза, гипертиреоза, раковой кахексии, паренхима­тозной желтухи). Содержание холестерина в сыворотке крови в норме составляет 3,64-6,76 ммоль/л.

Реактивы. Реактив Либермана-Бурхарда.

Принцип. Холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот дает зеленое окрашивание раствора.

Ход работы. К 2,1 мл реактива Либермана-Бурхарда осторожно, очень медленно добавляют 0,1 мл негемолизованной сыворотки так, чтобы она стекла по стене пробирки. Пробирку при этом энергично встряхивают 10-12 раз и оставляют при комнатной температуре на 20 минут. Затем колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (длина волны 630-690 нм) в кювете с шириной слоя 5 мм против реактива Либермана-Бурхарда.

Расчет производят по калибровочной кривой.

Клинико-диагностическое значение.

С возрастом уровень холестерина нарастает. Увели­чение уровня ХС наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, при липидном нефрозе, при застойной желтухе. Снижение содержания холестерина отмечается при гипертиреозе, при острых инфекционных заболеваниях и ряде других заболеваний.

СХЕМА

протоколирования полученных результатов по определению холестерина в сыворотке крови

№№	Экстинция	Концентрация холестерина в ммоль/л	Оценка результата
1.

Занятие 5

Тема: Лабораторный практикум «Обмен белков и аминокислот»

Цель: продемонстрировать клинико-диагностическую значимость количественного определения метаболитов азотистого обмена в плазме крови и анализа желудочного сока.

Задачи обучения:

• Обучить методикам определения кислотности желудочного сока

• Обучить методикам определения активности трансаминаз в плазме крови

• Дать представление о клинко-диагностическом значании определения активности ферментов и содержания метаболитов азотистого обмена в биологических жидкостях

Основные вопросы темы:

1. Методика определения кислотности желудочного сока

2. Методика определения мочевины в плазме крови

3. Методика определения мочевой кислоты в плазме крови

4. Клинко-диагностическое значание определения содержания метаболитов азотистого обмена в биологических жидкостях

5. Оформление протоколов исследования

6. Обсуждение полученных результатов

Методы обучения и преподавания: проведение биохимических методик, оформление протоколов, обсуждение полученных результатов (TBL)

Литература

1. Биохимия: Учебник для мед. вузов / под ред. Е.С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп., 4-е изд. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 2009,2008, 2007. - 768 с. : ил.

2. Биохимия с упражнениями и задачами : учеб. для вузов / ред. Е. С. Северин. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 384 с. : ил.

3. Березов Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин. - 3-е изд., стереотип. . - М. : Медицина, 2008. - 704 с. : ил.

4. Николаев А.Я. Биологическая химия : учебник / А. Я. Николаев. - 3-е изд, перераб. и доп. - М. : Мед. информ. агентство, 2007. - 568 с.

5. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии : Учеб. пособие для вузов / Зубаиров, Д. М., Тимербаев В.Н., Давыдов В.С. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005.

6. Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001.

7. Шарманов Т.Ш., Плешкова С.М. Метаболические основы питания с курсом общей биохимии – Алматы, 1998

Контроль: качество выполнения методов исследования, оценка практических навыков работы на приборах

Оборудование и оснащение:

Оборудование: ФЭК АР – 101, ФЭК - 02, термостат ТСО 1/80, водяная баня, мойка ультразвуковая, рН-метр 150м, рН-метр С830Р, спектрофотометр, полуавтоматический/автоматический биохимический анализатор, весы лабораторные SPU 401,торсионные и аналитические весы, центрифуги, дистиллятор АДЭ – 5, компьютеры.

Оснащение: наборы химических реактивов для определения мочевина и мочевой кислоты в плазме крови, реактивы для определения кислотности желудочного сока, лабораторная химическая посуда, штативы, компьютерные анимации, тестовые задания, ситуационные задачи.

АНАЛИЗ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА

Желудочный сок представляет собой бесцветную жидкость с сильнокислой реакцией (рН 1,5-2,5). За сутки у человека отделяется около 1,5 л желудочного сока; в его состав входят вода, белки, ферменты (пепсин, гастриксин), муцин, соляная кислота, кислореагирующие фосфаты и ряд других веществ. Кислая реакция желудочного сока обус­ловлена присутствием соляной кислоты, кислореагирующих фосфатов, а при патологических процессах – молочной кис­лотой и летучими жирными кислотами. Совокупность всех кислореагирующих веществ желудочного сока обычно называют общей кислотностью. Соляную кислоту, связанную с белками и продуктами их переваривания, называют свя­занной соляной кислотой, а остающуюся в избытке соляную кислоту называют свободной соляной кислотой.

Натощак: общая кислотность в норме составляет 40-60 ммоль/л; свободная НСІ - 20-40 ммоль/л; связанная НСІ - 10-15 ммоль/л; кислотный остаток - до 10 ммоль/л.