Клинико-диагностическое значение

Снижение концентрации гемоглобина в крови является основным лабораторным симптомом анемии.

Повышение концентрации гемоглобина в крови наблюдается при эритроцитозах. Физиологическое увеличение содержания гемоглобина свойственно новорожденным.

С Х Е М А

Протоколирования полученных результатов по определению гемоглобина в крови

№№

Экстинция

Концентрация гемоглобина

Оценка результатов

КРЕДИТ 4

Занятие 8

Тема: Лабораторный практикум «Биохимические показатели в крови»

Цель: продемонстрировать клинико-диагностическую значимость методов определения биохимически показателей крови

Задачи обучения:

• Обучить методам исследования биохимических показателей крови

Основные вопросы темы:

1. Методика определения активности щелочной фосфатазы в плазме крови (ЩФ)

2. Методика определения активности аланинаминотрансферазы (АЛАТ) в плазме крови

3. Методика определения активности аспартатаминотрансферазы (АСАТ) в плазме крови

4. Методика определения содержания билирубина в плазме крови

5. Клинко-диагностическое значание определения активности ферментов и содержания метаболитов азотистого обмена в биологических жидкостях

6. Оформление протоколов исследования

7. Обсуждение полученных результатов

Методы обучения и преподавания: проведение биохимических методик, оформление протоколов, обсуждение полученных результатов (TBL)

Литература

1. Биохимия: Учебник для мед. вузов / под ред. Е.С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп., 4-е изд. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 2009,2008, 2007. - 768 с. : ил.

2. Биохимия с упражнениями и задачами : учеб. для вузов / ред. Е. С. Северин. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 384 с. : ил.

3. Березов Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин. - 3-е изд., стереотип. - М.: Медицина, 2008. - 704 с. : ил.

4. Николаев А.Я. Биологическая химия : учебник / А. Я. Николаев. - 3-е изд, перераб. и доп. - М. : Мед. информ. агентство, 2007. - 568 с.

5. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии : Учеб. пособие для вузов / Зубаиров, Д. М., Тимербаев В.Н., Давыдов В.С. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005.

6. Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001.

7. Шарманов Т.Ш., Плешкова С.М. Метаболические основы питания с курсом общей биохимии – Алматы, 1998

Контроль: качество выполнения методов исследования, оценка практических навыков работы на приборах

Оборудование и оснащение:

Оборудование: ФЭК АР – 101, ФЭК - 02, термостат ТСО 1/80, водяная баня, мойка ультразвуковая, рН-метр 150м, рН-метр С830Р, спектрофотометр, полуавтоматический/автоматический биохимический анализатор, весы лабораторные SPU 401,торсионные и аналитические весы, центрифуги, дистиллятор АДЭ – 5, компьютеры.

Оснащение: наборы химических реактивов для определения гемоглобина, билирубина, реактивы для определения лактатдегидрогеназы, лабораторная химическая посуда, штативы, компьютерные анимации, тестовые задания, ситуационные задачи.

ЩЕЛОЧНАЯ ФОСФАТАЗА

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ)КРОВИ УНИФИЦИРОВАННЫМ МЕТОДОМ

Принцип метода:

П- Нитрофенилфосфат + вода →→→→→→→п – Нитрофенол + фосфат

Количество оброзавшегося в единицу времени п – нитрофенола, пропорциональное активности фермента, определяется по оптической плотности образца при 405 нм.

Исследуемый материал:

Сыворатка или плазма крови.

Состав набора:

Реагент №1. Буфер,рН 10,4

Глициновый буфер, рН 10,4………………………………55 ммоль/л

Mg|Zn

Реагент №2. Гидроокись натрия

NaOH……………………………………………..200ммоль/л

Реагент №3. П- Нитрофенилфосфат

п- Нитрофенилфосфат…………………………………………27,0ммоль/л

Калибратор

п- Нитрофенилфосфат………………………………………50мкмоль/л

Аналитические характеристики набора:

Линейность…………………………………..до 20 мг/100 мл (1200мкмоль/л)

Значение коэффицента вариаций……………………………‹5 %

Время инкубаций………………………………….20- 25°С -10 мин

Чувствительность……………………………………40мкмоль/л

Стабильность окраски………………………..не менее 40 минут.

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:

Невскрытые реагенты стабильны в течение 12 месяцев при 2-8°С в темноте. Дата изготовления, серия и каталожный номер набора указаны на упаковке.

Рабочий реагент: смешайте реагент №1 и реагент №3 в соотношений 4 :1.Реагент стабилен не менне 10 дней при2-8°С в темноте или 3 месяца при -20°С .

Рабочий раствор реагента №2: содержимое флакона №2 разведите дистиллированной водой в 10 раз; раствор стабилен в плотно закрытом полиэтиленовом пакетике.

	Опытная проба мл	Контрольная (холостая) проба, мл
Рабочий реагент	0,5	0,5
Сыворотка или плазма крови	0,05	-

Пробы инкубируют при 37 °С точно 30 минут. После окончания инкубаций пробы охлаждают. После этого в опытную и контрольную пробы вносят по 5 мл рабочего раствора реагента №2, контрольную пробу добавляют 0,05 мл сыворотки и фотометрируют в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при длине волны 405 нм контрольной пробы.

Расчет активности производят по калибровочной кривой. Из основного калибровочного раствора готовят рабочие растворы. Как указана ниже*

№ пробы	Калиброатор	Рабочий раствор реагента№2.мл	Активность фермента нмоль
1	0,5	5,05	278
2	1,0	4,55	556
3	1,5	4,05	834
4	2,5	3,05	1390
5	3,5	2,05	1946

Нормальные величины: 278-830 нмоль (с.л)**1ед/л=16,67нмоль (с . л)

Внимание: 1. Храните рабочий реагент всегда плотно закрытом темноте 4°С. 2. При построении калибровочной кривой количества калибратора и реагента №2 могут быть пропорцтонально уменьшены.