Ход работы

1. Пронумеруйте 5 пробирок восковым карандашом.

2. Добавьте:

В 1-ю пробирку – 3 мл физиологического раствора;

Во 2-ю пробирку – 3 мл дистиллированной воды;

В 3-ю пробирку – 3 мл 0.1 % раствор НCl

В 4-ю пробирку - 3 мл 5% раствора аммиака.

В 5-ю пробирку – 5мл цитратной крови.

3. Во все 4 пробирки вносят пипеткой по 2 капли из 5-й пробирки.

4. Оставшуюся в 5-й пробирке кровь помещают на 1 час в морозильную камеру холодильника. Затем пробирку вынимают и оттаивают в стакане с горячей водой.

5.Рассматривая содержимое всех 5-ти пробирок, определяют наличие или отсутствие гемолиза в каждой пробирке.

6. Запишите результаты исследования в таблицу 14.

Таблица 14 - Результаты гемолиза

№/№	Содержимое пробирок	Наличие «+» или Отсутствие «-» гемолиза	Вид гемолиза
1	Физиологический раствор (3 мл)
2	Дистиллированная вода (3 мл)
3	0.1. % раствор НСl (3мл)
4	5% раствор аммиака (3мл).
5	Цитратная кровь

7. Объясните полученные результаты.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения

1. Понятие о гемолизе эритроцитов.

2. Виды гемолиза.

3. Причины осмотического гемолиза.

4. Причины химического гемолиза.

5. Как выглядит гемолизированная кровь?

6. Какие виды гемолиза могут быть в организме?

Лабораторная работа 3.9. Определение границ осмотической резистентности эритроцитов

Оборудование: 8 пробирок, штатив, восковой карандаш, растворы NaCl убывающей концентрации, кровь, микроскоп, предметные и покровные стекла.

Ход работы

1.Приготовление растворов поваренной соли NaCl различной концентрации. Возьмите 8 пробирок и пронумеруйте их восковым карандашом. В каждую пробирку налейте дистиллированную воду и 0,9% раствор NaCl в количествах, указанных в таблице 15.

Таблица15 - Получение раствора хлорида натрия разной концентрации

Номер пробирки	Раствор NaCl 0,9%, мл	Вода дистиллированная, мл	Полученная концентрация раствора NaCl, %	Степень гемолиза
1	-	-	0,9
2	4,5	0,5	0,8
3	4,0	1,0	0,7
4	3,5	1,5	0,6
5	3,0	2,0	0,5
6	2,5	2,5	0,4
7	2,0	3,0	0,3
8	1,5	3,5	0,2

Степень гемолиза: «–» - отсутствует; «+» - частичный, выражен слабо, «++» - частичный, выражен хорошо, «+++» - полный.

2. В каждой из 8 пробирок, находящихся в штативе, получится по 5 мл раствора NaCl разной концентрации: 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%.

3. Внесите в каждую пробирку по 5 капель крови.

Опыт 1.

На 4 предметных стекла поместите по капле раствора NaCl убывающей концентрации: 0,9%, 0,6%, 0,4%,0,2% с добавленной кровью. Накройте капли покровными стеклами и поместите препараты под окуляр микроскопа (большое увеличение). Изучите форму и размер эритроцитов в растворах разной концентрации.

Опыт 2.

Через 5-10 минут определите, в каких пробирках произошел гемолиз. Начало гемолиза выглядит как легкое порозовение раствора, а полный – по интенсивной алой окраске раствора. Полностью гемолизированная кровь прозрачна («лаковая кровь»), что указывает на предел максимальной резистентности эритроцитов. В норме минимальная осмотическая резистентность колеблется между 0,48-0,46%, максимальная – между 0,34-0,32%.

Оформление протокола.

1. Занесите данные таблицы 9 в рабочую тетрадь. Зарисуйте пробирки, отметьте гемолиз.

2. Постройте график кривой осмотической резистентности эритроцитов по полученным данным.

3. Сделайте вывод о механизмах наблюдаемого гемолиза в каждом конкретном случае.