Термические методы (наиболее распространенные):
Автоклавирование (паровой стерилизатор под давлением). "Золотой стандарт" для большинства сред. Обеспечивает температуру выше 100°C (обычно 121°C) и давление 1 атм. Время зависит от объема: 15-20 минут для небольших объемов (до 1 л), до 40 минут для больших.
Тиндализация (дробная стерилизация, текучим паром). Прогревание при 100°C (на кипящей водяной бане или в паровом стерилизаторе) по 30-60 минут в течение 3 дней подряд. Применяется для сред, разрушающихся при высоких температурах (желатин, среды с углеводами, молоко). В первый день погибают вегетативные формы, в последующие — прорастающие из спор.
Стерилизация кипячением. Применяется редко, только для некоторых термостабильных сред или инструментов.
Механические методы (фильтрация):
Через мембранные фильтры с размером пор 0.22-0.45 мкм. Применяется для стерилизации сред, содержащих термолабильные компоненты (витамины, антибиотики, сыворотку крови, мочевину). Жидкость пропускается через стерильный фильтр в асептических условиях.
Химическая стерилизация:
Добавление специальных стерилизующих химических агентов, которые затем удаляются или инактивируются (применяется редко для сред).
Комбинированные методы:
Компоненты, выдерживающие автоклавирование (вода, соли, агар), стерилизуют вместе. Термолабильные компоненты (растворы углеводов, витамины) стерилизуют отдельно фильтрацией и добавляют в остывшую среду перед использованием.
Бактериологический метод исследования. Цель. Этапы исследования на примере конкретного заболевания. Достоинства и недостатки метода.
Цель бактериологического метода заключается в выделении чистой культуры возбудителя заболевания из исследуемого материала путем посева на питательные среды, накопление чистой культуры и идентификация данной культуры до вида, на основании изучения ряда свойств: морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных, по наличию факторов патогенности, токсигенности и определение его чувствительности к антимикробным препаратам и бактериофагам.
Забор материала (фекалии больного)
Бактериоскопическое исследование – морфология (палочки), тинкториальные свойства (Гр-)
Выбор питательной среды для посева (МПА)
Посев материала на ППС с целью механического разобщения бактерий и получения отдельных колоний
Оценка количества выросших колоний
Определение свойств колоний – величина (4-5мм), цвет (прозрачные\мутно-сероватые), прозрачность (слегка мутные), форма (округлые, плоско-выпуклые, исчерченные), консистенция, край (неровный), структура (гиалиновая)
Микроскопия препаратов из колоний
Выбор подозрительной колонии
Посев на скошенный агар
Определение чистоты культуры – макроскопически и микроскопически в 10 полях зрения
Изучение морфологических и тинкториальных свойств
Изучение подвижности уколом в полужидкий агар (подвижные)
Изучение биохимических свойств (среды пестрого ряда) – сероводород не образует, образует индол, глюкозу лактозу маннит К+Г
Изучение АГ структуры – РА на стекле с иммунной сывороткой
Изучение факторов патогенности
Фаготипирование
Изучение чувствительности к антибиотикам
Заключение – выделена эшерихия коли
Достоинства
Высокая избирательность — важно для установления источника инфекционного процесса.
Высокая чувствительность — позволяет найти микроорганизмы в исследуемом материале, даже если они содержатся в незначительном количестве.
Возможность установить особенности выделенных микроорганизмов и правильно назначить терапию.
Недостатки
Длительность исследования — не менее 4–5 дней.
Невозможность использования в тех случаях, когда возбудители инфекции не растут на искусственных питательных средах (например, риккетсии, хламидии).
Высокие требования к забору материала и пробоподготовке.
Бактериологический метод исследования. Возможность его использования для диагностики инфекционных заболеваний различной этиологии в зависимости от природы возбудителя (бактериальная, риккетсиозная, спирохетозная)).
Сравнительная таблица применимости метода
Возбудитель |
Применимость бактериологического метода |
Особенности/Альтернативы |
Бактерии (стафилококк, кишечная палочка и др.) |
ВЫСОКАЯ - основной метод |
Стандартные питательные среды, 18-48 часов |
Анаэробные бактерии |
|
Требуются специальные методы и среды |
Микобактерии туберкулеза |
ВЫСОКАЯ, но длительно |
Плотные яичные среды, рост 3-8 недель |
Хламидии |
ОГРАНИЧЕННАЯ (только в клеточных культурах) |
Не растут на бесклеточных средах. Альтернатива: ПЦР, ИФА |
Риккетсии |
НЕ ПРИМЕНЯЕТСЯ в рутинной диагностике |
Опасен для персонала. Диагностика: серология, ПЦР |
Treponema pallidum |
НЕ ПРИМЕНЯЕТСЯ |
Не культивируется in vitro. Диагностика: микроскопия (темное поле), серология |
Borrelia |
ОГРАНИЧЕННАЯ (в специализированных лабораториях) |
Сложные среды (BSK). Чаще: ПЦР, серология |
Leptospira |
ПРИМЕНЯЕТСЯ (особенно ранняя диагностика) |
Специальные среды, длительный рост (до 4 недель) |
Биохимические свойства бактерий. Определение. Методы изучения и практическое использование в микробиологической диагностике инфекционных заболеваний (примеры).
Сахаролитические свойства клетки – способность ферментировать (разлагать) углеводы с выделением химической энергии.
Протеолитические свойства микроорганизмов – ферментация белков и пептона
Совокупность сахаролитических, протеолитических свойств бактерий называется биохимическими свойствами бактерий.
Свойства микроорганизмов выделять определенные ферменты используют для идентификации вида одноклеточных, так как это постоянный и неизменный признак, присущий только данной разновидности клеток.
ЗАПОМНИТЬ ВАЖНО: В бактериологии для дифференциации микроорганизмов по биохимическим свойствам значение часто имеют конечные продукты и результаты действия ферментов. В соответствии с этим существует микробиологическая (рабочая) классификация ферментов:
1. сахаролитические;
2. протеолитические;
3. аутолитические;
4. окислительно-восстановительные;
5. ферменты патогенности (вирулентности).
Определение сахаролитических свойств.
Среды Эндо, Левина, Плоскирева содержат лактозу и определенный индикатор. Эти среды позволяют отличить патогенные бактерии от кишечной палочки – E. coli. E.coli способна расщеплять лактозу, т.к. имеет фермент галактозидазу (КИШЕЧНАЯ ПАЛКА ЛАКТОЗОПОЗИТИВНАЯ). При расщеплении лактозы образуются кислые продукты, которые изменяют цвет индикатора. Поэтому E. coli образует на средах окрашенные колонии: на среде Эндо – красные колонии с металлическим блеском; на среде Левина – темно-синие колонии; на среде Плоскирева – красные колонии.
Среды Гисса содержат лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу и маннит и различные индикаторы. Если бактерии расщепляют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды, а если до кислоты и газа – наблюдают появление газообразных продуктов. В среду опускается поплавок, который при стерилизации заполняется средой. Исходный цвет среды – соломенно-желтый. При расщеплении углевода цвет среды становится красным. Если образуется газ, он накапливается в поплавке. Если углевод не расщепляется, цвет среды не изменяется.
Для определения протеолитических ферментов производят посев уколом исследуемой культуры в столбик мясо-пептонной желатины. При положительном результате наблюдается разжижение желатины.
В процессе ферментации пептонов микроорганизмы образуют индол, сероводород, аммиак. Для этого исследуемую культуру засевают на МПБ, между пробкой и горлышком укрепляют индикаторные бумажки.
На сероводород – индикаторная бумажка пропитана уксуснокислым свинцом (при выделении сероводорода она чернеет),
индол – индикаторная бумага пропитана раствором щавелевой кислоты (при выделении индола она краснеет),
аммиак – лакмусовая бумажка.
Биохимическая идентификация дает возможность различать практически идентичные виды бактерий, строение и внешний вид которых неотличимы друг от друга. Например, патогенные энтеробактерии насчитывают сотни видов, определить конкретного возбудителя заболевания можно только с помощью изучения биохимических свойств.
Спирохеты. Морфология, строение Биологические особенности спирохет. Основные виды, патогенные для человека (примеры заболеваний, вызываемых спирохетами).
Спирохеты – тонкие, подвижные, спирально загнутые бактерии длиной.
Клетки спирохет состоят из пpoтоплазатического цилиндра, покрытого ЦПМ,
Снаружи цитоплазматический цилиндр и фибриллы окружены клеточной стенкой.
Клеточные оболочки спирохеты представляют собой комплекс из двух образований: наружной оболочки, очень тонкой, эластичной и гибкой (покров) и лежащей под ней клеточной стенки цитоплазматического цилиндра. В поверхностном слое клеточной стенки цитоплазматического цилиндра обнаружены гликопептиды.
Внутри цитоплазмы расположены нуклеоид, образования типа мезосомы и различные гранулы.
Спирохеты, особенно трепонемы, в отличие от других бактерий плохо воспринимают анилиновые красители. Окрашивают краской Романовского-Гимза.
Кроме того, для выявления спирохет используют нативные препараты, которые микроскопируют в темнопольном или фазово-контрастном микроскопе.
Некоторые биологические особенности спирохет:
Грамотрицательны, хемоорганогетеротрофы.
Подвижны, размножаются поперечным делением.
Эндоспор не образуют, но некоторые представители образуют цисты.
Встречаются как аэробные виды, так и анаэробные и факультативно-анаэробные.
Спирохеты встречаются в почве, воде, других средах.
Медицинское значение среди спирохет имеют представители родов Treponema, Borrelia и Leptospira.
Трепонемы (род Treponema) представляют собой извитые бактерии, имеющие 8-12 мелких завитков и 3-4 фибриллы. У человека трепонемы вызывают сифилис (Т. pallidum) и фрамбезию (Т. pertenue)
Боррелии (род Borrelia) – это длинные извитые бактерии, имеющие 3-8 крупных завитков и 7-20 фибрилл. К боррелиям относятся возбудители клещевого боррелиоза (болезни Лайма) и ВОЗВРАТНОГО тифа (эпидемического и эндемического).
Лептоспиры (род Leptospira) – это извитые бактерии, имеющие мелкие частые завитки. Лептоспиры образуют вторичные завитки, в результате чего приобретают S- образную форму.
Патогенным представителем лептоспир является L. interrogans. При попадании в организм с водой или пищей этот возбудитель вызывает развитие лептоспироза, который сопровождается кровоизлияниями и желтухой.
Риккетсии, их биологические особенности. Методы культивирования. Примеры патогенных для человека видов риккетсий, основные заболевания, ими вызываемые.
семейству Rickettsiaceae, к которому относятся три рода, содержащие виды, патогенные для млекопитающих. К ним относятся:
Rickettsia;
Rochalimaea;
Coxiella.
Биологические свойства риккетсий:
представляют собой мелкие палочковидные бактерии;
являются облигатными внутриклеточными паразитами, биологически связаны с членистоногими (хозяева);
в зависимости от условий развития форма и размер риккетсий могут изменяться: клетки могут приобретать кокковидную, нитевидную или неправильную форму;
строение риккетсий соответствует структуре грамотрицательных бактерий;
они не образуют спор и капсул, неподвижны;
в мазках-отпечатках тканей риккетсии окрашивают по Романовскому-Гимзе (азур, эозин, метиленовая синь): при этом риккетсии окрашиваются в красный цвет, а инфицированные клетки – в синий цвет;
не растут на бесклеточных питательных средах, чем отличаются от большинства бактерий.
По своим свойствам риккетсии занимают промежуточное положение между бактериями и вирусами:
по строению, ферментной активности и чувствительности к антибиотикам близки к бактериям;
по способности существовать только как внутриклеточный паразит – к вирусам.
Для морфологии и ультраструктуры риккетсий характерны ряд особенностей, отличающие их от других прокариотов:
клеточные стенки имеют капсулообразный слизистый покров;
наличие в значительном количестве ненасыщенных жирных кислот (ННЖК) в составе мембраны, что нехарактерно для бактерий;
в состав нуклеоида входит кольцевая хромосома;
хотя все риккетсии – внутриклеточные, их метаболизм независим от обменных процессов, протекающих в клетке-хозяине;
Особенности культивирования риккетсий связаны с тем, что микроорганизмы – облигатные паразиты, не осуществляют рост ни на каких бесклеточных питательных средах.
Выращивание микроорганизмов с использованием методов культивирования осуществляют на переживающих (временно сохранена клеточная жизнеспособность) материалах в жидкой (!!) среде Мейтлендов.
Хорошо показал себя метод выращивания микробов на двенадцатидневном курином эмбрионе,
Успешно культивируют микробы в организме живых белых мышей
Микроорганизмы культивируют, инфицируя платяных вшей дисперсной взвесью активных микробов (метод Вейгля-Мосинга), а также выращивают на их личинках (Пшеничнов-Райхер).
К риккетсиям относят 29 видов (май 2017 г.) микроорганизмов, и в большей своей части они не патогенны для млекопитающих. К наиболее известным патогенным видам относятся R. prowazekii (возбудитель сыпного тифа), R. conorii (возбудитель марсельской лихорадки), R. sibirica (клещевой риккетсиоз), R. rickettsii (пятнистая лихорадка Скалистых гор).
Бактериофаги. Морфология, ультраструктура, свойства. Особенности взаимодействия вирулентного и умеренного фагов с бактериальной клеткой.
Бактериофаги – вирусы бактерий, способные специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и при выходе потомства вызывать лизис клетки
Морфология
Нитевидные\мелкие без отростка\с аналогом отростка\ с коротким отростком\с длинным отростком и не сокращающимся чехлом\с сокращающимся чехлом
Ультраструктура
Головка – содержит нуклеоид и капсид
Хвостовой отросток – состоит из белкового полого стержня. Заканчивается базальной пластинкой с 6 шипами и сократительного чехла, который крепится к воротничку
Свойства
Специфичность
Антигенность
Размножение только внутри клетки
Умеренные фаги – встраивают свою НК в геном бактерии и не вызывают ее лизис
Вирулентные фаги – проникают, размножаются, выходят и вызывают лизис
Адсорбция фага на клеточной стенке
Проникновение НК фага
Биосинтез компонентов
Сборка структурных компонентов
Сборка зрелых фагов
Выход с лизисом
Бактериофаги. Лизогенная культура. Лизогенная конверсия (примеры). Фаговары. Примеры практического использования фагов в медицине и генной инженерии
Лизогенная культура – культура бактерий, в ДНК которых встроена ДНК умеренных фагов
- монолизогенная – продукция 1 вида фагов
-полилизогенная
Лизогенная конверсия – изменение свойств микробов под влиянием профага
Профаг – ДНК фага, встроенная в бактериальную
Например, профаг придает дифтерийной палочке способность продуцировать экзотоксин.
Использование фагов
Фагодиагностика – высокая чувствительность бактерий к фагам позволяет отличить близкородственные виды
Санитарно-показательное значение – по присутствию фагов во внешней среде можно судить о наличии соответствующих бактерий
Индикация бактерий – с помощью нарастания титра фага
Фагопрофилактика – предупреждение бактериальных инфекций
Фаготерапия – использование фагов в лечебных целях
Генная инженерия – для картирования генома бактерий
История открытия вирусов. Биологические особенности вирусов. Морфология, ультраструктура. Основные принципы классификации. Этапы взаимодействия вируса с клеткой.
Работы Д.И. Ивановского
1892 год — Ивановский открыл вирус табачной мозаики.
Бейеринк дал название вирусу от латинского virus.
1917 год — канадский бактериолог Феликс д’Эрелль сообщил об открытии вируса возбудителя дизентерии, который он назвал бактериофагом.
Биологические особенности
Неклеточное строение
Размеры в нанометрах
Генет.инфа – ДНК/РНК
Нет внутриклеточных органоидов
Оболочки – капсид (белок) + суперкапсид (липид+белок)
Размножение дизъюнктивным способом
Культивирование в животных, куриных эмбрионах, культурах клеток
Облигатный внутриклеточный паразитизм
Морфология, ультраструктура
Форма может быть различной
Тип симметрии спиралевидный\кубический
Принципы классификации
По величине – мелкие, средние, крупные
По виду НК (по Балтимору)
По наличию суперкапсида
По тропности
Этапы взаимодействия вируса и клетки
Специфическая адсорбция на поверхности клетки хозяина
Проникновение в клетку (эндоцитоз\виропексис\через микроотверстия)
Транспорт вируса к ядру
Дезинтеграция, раздевание, освобождение НК от оболочки
Эклипс-фаза – синтез вирусной НК
Сборка вируса
Выход вируса из клетки
Методы культивирования вирусов. Характеристика. Достоинства и недостатки основных методов культивирования вирусов. Понятие о первичных и перевиваемых культурах клеток.
Заражение животных
+ открытие новых вирусов
Изучение особенностей патогенеза
Изучение эффективности препаратов
- нечувствительность к ряду вирусов
Контаминация посторонними вирусами
«Слепые» пассажи
Дорого
Сложно содержать животных
Способы в зависимости от тропности
-в мозг
-интраназально
-накожно, в\м
Заражение эмбрионов
+ доступность
Удобство
Нет проникновения МО
Чувствительность к большому количеству вирусов
Некоторые вирусы вызывают характерные изменения
- чувствительность не ко всем вирусам
Нет гарантии стерильности
Заражение культур клеток
+ заражение всех клеток
Любые вирусы
Непрерывный контроль
Простая техника
Стерильность
первичные – клетки этой культуры делятся один раз, поэтому каждый раз необходимо вновь получать культуру ткани; чаще всего используют эмбриональные ткани и опухолевые ткани взрослого человека;
б) полуперевиваемые – клетки делятся до 50 раз, сохраняя диплоидный набор хромосом; их можно перевивать несколько раз; используют диплоидные клетки человека (фибробласты человеческого эмбриона, диплоидные клетки легких человека);
в) перевиваемые – клетки культуры постоянно делятся в условиях in vitro (вне организма), поэтому их можно перевивать непрерывно; их готовят из линий клеток, которые хорошо размножаются в течение многих лет; чаще всего эти культуры получают из опухолевых клеток. Получено около 200 штаммов таких клеток: штамм L (из культуры мышиных фибробластов), штамм HeLa (из карциномы шейки матки), штамм Hep-3 (из лимфоидной карциномы) и т.д.
Индикация и идентификация вирусов при различных методах культивирования. Примеры использования в практике.
Заражение животных
1 - обнаружение у животных признаков инфекционного заболевания,
2 - регистрация их гибели,
3 - изучении характера патоморфологических и патогистологических изменений в тканях и органах
Вирус герпеса, Проводят внутримозговое заражение куриных эмбрионов или мышей-сосунков, у которых развивается энцефалит. Идентификация в РТН или РИФ.
Заражение куриных эмбрионов
1 - гибель эмбриона
2 - положительной РА на стекле с аллантоисной или амниотической жидкостью
3 – образования «бляшек» на хорион-аллантоисной оболочке
Вирус гриппа, РГА эритроцитами морской свинки или человека
Культуры клеток
1 - ЦПД,
2 - обнаружение внутриклеточных включений,
3 - положительная реакция гемадсорбции (РГАдс),
4 - феномен бляшкообразования,
5 - цветная реакция Солка
6 – РИФ
Выделение аденовирусов проводят в культуре клеток человека (Hep-2, HeLa).
Для идентификации вирусов используют РИФ, ИФА, РИА, РСК, РТГА, РН.
3 ЭТАП ИДЕНТИФИКАЦИЯ Изучаемые характеристики вирусов |
Антигенная структура вирусов (серогруппа, серотип) |
Антибиотики. Определение. История открытия. Классификация по спектру механизмам действия на микробов. Примеры.
Антибиотики – в-ва, избирательно угнетающие жизнедеятельность микроорганизмов. Обязательно «природное» происхождение, иначе будут называться синтетические ХТС
История
Мечников обратил внимание на возможность использования некоторых сапрофитных бактерий
Манессеин, Полотбеков – обнаружили что плесень способна подавлять рост бактерий
Флемминг – открытие пенициллина
Ермольева – получение пенициллина
Ваксман – открытие стрептомицина
Классификация
По механизму
Ингибиторы синтеза клеточной стенки – пенициллины (амоксициллин)
Ингибиторы функций ЦПМ – аминогликозиды
Антиметаболиты – сульфаниламиды
Ингибиторы синтеза НК – хинолоны
Ингибиторы синтеза белка – тетрациклины
По эффекту
Бактерицидный – пенициллины
Бактериостатический – тетрациклины
По спектру действия
а) широкого спектра – действуют на грам«+» и грам«-» микрофлору: тетрациклины, левомицетин, аминогликозиды, цефалоспорины
б) узкого спектра - действуют избирательно, преимущественно на: грам«+» миклофлору - биосинтетические пенициллины или грам«-» - полимиксины
Антибиотики. Определение. Антибиотикорезистентность микробов. Механизмы формирования. Пути преодоления. Осложнения при антибиотикотерапии.
Антибиотикорезистентность – устойчивость бактерий к антибиотикам
Механизмы формирования
Инактивация за счет ферментов – превращение АБ в неактивную форму
Изменение проницаемости клеточной стенки – пориновые каналы
Активное выведение – изменение в системе специфического транспорта АБ в бактериальную клетку
Модификация мишени
Формирование обходного пути метаболизма взамен заблокированного
Формирование биопленок
Пути преодоления
Получение новых АБ
Модификация существующих АБ
Ингибирование ферментов бактерий
Осложнения АБ-терапии
Токсическое действие
Дисбактериоз
Аллергия
Лекарственная устойчивость
Имунная супрессия (прямая и косвенная)
Эндотоксический шок
Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам. Преимущества и недостатки различных методов. Понятие о минимальной ингибирующей концентрации (МИК).
МИК - Это наименьшая концентрация антимикробного препарата, которая in vitro (в лабораторных условиях) полностью подавляет видимый рост тестируемого микроорганизма за определенный период инкубациий++
Методы определения
Метод серийных разведений
это количественный лабораторный метод, позволяющий точно определить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) антибиотика для конкретного микроорганизма.
Это референс-метод (золотой стандарт), с которым сравнивают другие, более простые методы (например, диско-диффузионный).
Принцип метода
Микроорганизм инокулируют (вносят) в серию пробирок или лунок планшета с жидкой питательной средой (бульоном), содержащей антибиотик в последовательно убывающих (как правило, в геометрической прогрессии, чаще всего в 2 раза) концентрациях. После инкубации визуально оценивают наличие или отсутствие роста (помутнения) в каждой пробирке. МИК определяется как наименьшая концентрация антибиотика, которая полностью предотвращает видимый рост микроорганизма.
Количественный, но сложный
Диско-диффузионный
Антибиотик, пропитывающий стандартный бумажный диск, диффундирует в плотную питательную среду (агар), равномерно засеянную тестируемым микроорганизмом. Вокруг диска создается градиент концентрации антибиотика (убывающая от диска к периферии). После инкубации в местах, где концентрация антибиотика достаточна для подавления роста данного микроба, образуется прозрачная круглая зона задержки роста (зонд ингибиции). Ее диаметр измеряется в миллиметрах и сравнивается со стандартными таблицами.
Чем больше диаметр зоны, тем выше чувствительность микроорганизма к данному антибиотику (и/или тем ниже его МИК).
Больше качественный, чем количественный. Простой и дешевый
Е-тест
На поверхность агара, засеянного тестируемым микроорганизмом, накладывается специальная полимерная полоска (стрип). На одной стороне полоски нанесена линейная, непрерывно возрастающая градиентная шкала концентраций конкретного антибиотика (например, от 0.016 до 256 мкг/мл). После инкубации вокруг полоски образуется эллипсоидная (овальная) зона задержки роста.
МИК определяется как точка пересечения края зоны ингибиции со шкалой концентраций на полоске. Эта концентрация и будет минимальной, подавляющей рост данного микроба.
И количественный и качественный, простой.
ПЦР
Асептика и антисептика. Определения. Примеры использования в микробиологической и клинической практике.
Асептика – система приемов по недопущению обсеменения микробами различных объектов.
основных принципов:
локализация микроорганизмов
изоляция микроорганизмов
стерилизация
дезинфекция
Для соблюдения асептических условий работы выполняются разнообразные мероприятия, обеспечивающие сохранение чистоты культуры используемых микроорганизмов и окружающих предметов. К таким мероприятиям относятся:
стерилизация используемых в работе принадлежностей, посуды, оборудования, материалов, питательных сред и растворов;
приемы асептической работы с микроорганизмами (использование специальной одежды, масок, перчаток; работа в боксированных помещениях; влажная уборка с применением дезинфицирующих средств; использование бактерицидных облучателей и т. д.);
обеспечение герметичности коммуникаций и оборудования и другие мероприятия;
асептические условия обеспечиваются также последовательностью выполнения дезинфекционных и стерилизационных мероприятий.
Антисептика – это комплекс профилактических мероприятий, направленных на торможение роста, подавление размножения и уничтожение микробов в ране, патологическом очаге, на коже.
Целью антисептики является предупреждение инфекционного процесса. Антисептика служит для обработки биологических тканей, в частности кожных покровов (руки медперсонала, операционное или инъекционное поля пациента).
Виды
Механическая (собственно хирургический метод) – удаление микроорганизмов с помощью каких-то механических методов.
Физическая – уничтожение микроорганизмов за счет физических явлений, например гигроскопический перевязочный материал / марля, ватно-марлевые тампоны; гипертонические растворы / за счет разницы давления (NaCl / фурацилин); адсорбенты, например активированный уголь или полифепан; лазер; УЗИ.
Химическая – используются следующие химические антисептические средства:
йод (1-5-10% спиртовой раствор, используется для обработки кожи вокруг раны);
раствор Люголя (I + KI, используется как водный, так и спиртовой раствор, обладает дезинфицирующими, антисептическими свойствами, лечит больных с заболеваниями щитовидной железы);
хлорамин (для дезинфекции посуды, мытья полов, 1-3% водный раствор);
- Биологическая
- Смешанная
Стерилизация и дезинфекция. Определение. Виды. Методы стерилизации и дезинфекции. Примеры использования в микробиологической и клинической практике.
Стерилизация (обеспложивание) – это полное уничтожение микроорганизмов в объектах, подвергающихся обработке. Методы стерилизации подразделяются на физические и химические.
К физическим методам относятся:
-тепловая стерилизация,
-лучевая стерилизация,
-стерилизация ультразвуком,
-ультрафильтрация.
Тепловая стерилизация основана на использовании высоких температур: стерилизация в пламени (прожигание, фламбирование), сухожаровая стерилизация, стерилизация перегретым паром под давлением - автоклавирование.
Прожигание является простым и надежным методом, однако имеет ограниченное применение.
Стерилизацию сухим жаром осуществляют в воздушных стерилизаторах (прежнее название – “сухожаровые шкафы или печи Пастера”). Стерилизуют лабораторную посуду и другие изделия из стекла, металлические инструменты, то есть объекты, которые не теряют своих качеств при высокой температуре. Режимы стерилизации: 160°С в течение 120 минут, 180°С - 40 минут.
Стерилизация паром под давлением - наиболее универсальный метод стерилизации. Проводится в автоклаве, представляющем собой герметически закрывающуюся емкость, в которую поступает перегретый пар. Автоклав снабжен датчиками контроля температуры и давления. Температура кипения воды возрастает при увеличении давления в камере: при 0,5 избыточных атмосфер температура пара составляет 111°С; при 1 избыточной атмосфере – 121°С, при 2-х атмосферах – 132 °С.
Наиболее часто используемый режим стерилизации в автоклаве -121°С (1 атм.) 40 минут. В автоклаве стерилизуют перевязочный материал, белье, коррозионно-устойчивые металлические инструменты, питательные среды, растворы.
Лучевая стерилизация осуществляется в специальных установках с помощью гамма-излучения. Инактивация микроорганизмов под действием гамма-лучей происходит в результате повреждения нуклеиновых кислот. Лучевая стерилизация позволяет обрабатывать сразу большое количество предметов (одноразовых шприцев, систем для переливания крови и т.д.).
Ультрафильтрация является широко используемым методом стерилизации растворов лекарственных препаратов. Жидкости пропускаются через мембранные фильтры с диаметром пор, через которые не проходят бактерии и вирусы.
Химическая стерилизация проводится с использованием газов: оксида этилена, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бромистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и паров формальдегида. Эти вещества являются алкилирующими агентами, их способность в присутствии воды инактивировать активные группы ферментов, других белков, ДНК и РНК приводит к гибели микроорганизмов. Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от 18 до 80°С в специальных камерах.
Дезинфекция (обеззараживание) – это процедура, направленная на уничтожение патогенных микроорганизмов, предусматривающая обработку объектов внешней среды, помещений, одежды, белья, инструментария и др.
Различают три основных метода дезинфекции:
- тепловая дезинфекция;
- УФ-облучение;
- химическая дезинфекция.
Тепловая дезинфекция. Температура 100°С в течение 5 минут убивает все вегетативные формы бактерий и большинство вирусов. При добавлении в воду 2% натрия гидрокарбоната погибают и споры.
Разновидностью тепловой дезинфекции является пастеризация – прогревание при температуре ниже 100ОС. При используемом обычно режиме (60-70°С в течение 20-30 минут) погибает большинство вегетативных форм бактерий, но сохраняются споры.
Ультрафиолетовое облучение (лучи с длиной волны 200-400 нм) производится с помощью специальных бактерицидных ламп (настенных, потолочных, передвижных и др.) для обеззараживания воздуха, и поверхностей в помещениях (операционных, перевязочных, микробиологических лабораториях), Действие ультрафиолетовых лучей приводит к разрушению ДНК микробов в результате образования тиминовых димеров.
Химическая дезинфекция проводится с помощью различных дезинфицирующих веществ.
Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций (прямые и косвенные). Их характеристика. Примеры.