Вопрс 12.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

Отношение бактерий к окраске по Грамму определяется их способностью удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом. Это зависит от различий в химическом составе и в проницаемости клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также от соотношения РНК и ДНК в их цитоплазме В клеточной стенке грамположительных бактерий наиболее выражен муреиновый(мукопептидный слой), содержащий гликопептиды и тейхоевую кислоту. Пептидогликаны грамположительных бактерий структурно отличаются от грамотрицательных бактерий. Тейхоевые кислоты стабилизируют ионы магния на поверхности клеток. У грамположительных бактерий на поверхности клетки имеется комплекс протеин- рибонуклеат магния; соотношение РНК и ДНК в их цитоплазме составляет 8:1; у грамотрицательных бактерий это соотношение равно 1:1. Изоэлектрическая точка цитоплазмы у грамположительных бактерий находится при ph 2,0-3,0, у грамотрицательных -около 5,0. После обработки раствором йода, являющегося окислителем. Происходит сдвиг изоэлектрической точки в кислую сторону, выраженный у грамположительных бактерий в большей степени , чем у грамотрицательных. Кроме того, проницаемость клеточной стенки у грамположительных бактерий меньше, чем у грамотрицательных. Таким образом, у грамположительных бактерий создаются оптимальные условия для прочной фиксации красителя и резистентности к обесцвечиванию спиртом.

Окраска по Грамму имеет важное дифференциально-диагностическое значение и широко используется в микробиологии. К грамположительным бактерия относятся стафилококки, стрептококки,коринебактерии дифтерии,микобактерии туберкулеза и др., к грамотрицательным- гонококки , менингококки, кишечная палочка и др. Некоторые виды бактерий могут окрашиваться по Грамму вариабельно в зависимости от возраста, особенностей культивирования и других факторов, изменяющих структуру клеточной стенки.

Вопрос 13.

Перечислить виды микроорганизмов, окраску которых необходимо производить по способу Циля-Нильсена: метод окраски микроорганизмов для выявления кислотоустойчивых микобактерий (возбудителей туберкулёза, микобактериозов, лепры, актиномицетов и других кислотоустойчивых микроорганизмов.

Вопрос 14

Характеристика культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Эндо, указать последовательность дальнейшего исследования.

Среда Эндо: выпускается в виде порошка, который состоит из

• высушенного питательного агара с 1% лактозы

• индикатора - основного фуксина, обесцвеченного сульфитом Na Перед употреблением определенную навеску порошка вносят в дистиллированную воду, кипятят и разливают по чашкам Петри. Свежеприготовленная среда практически бесцветна.

При росте лактозоположительных бактерий их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бесцветные колонии.

Вопрос №15

С целью получения изолированных колоний произвели посев на среду Плоскирева, термостат 37 градусов/сутки.

СРЕДА ПЛОСКИРЕВА - дифференциально-диагностическая и селективная, способствует лучшему росту некоторых бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерий) и подавляет рост других (кишечная палочка и пр.). Содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Лактозоотрицательные колонии вырастают бесцветными, лактозоположительные - красными. На некоторых модификациях среды Плоскирева выявляется еще и способность сальмонелл выделять сероводород: выросшие колонии чернеют. Далее готовим мазок, окрашиваем по Грамму, микроскопирум (При дизентерии наблюдаем рост бесцветных колоний, при микроскопировании - грамотрицательные палочки, расположенные беспорядочно. Для постановки предварительного диагноза ставим реакцию агглютинации с типовыми сыворотками и смотрим результат.)