Вопрос 26

Определение факторов патогенности стафилококков:

• Лецитовителлаза (лецитиназа) наличие лецитиназы при посеве культуры на желточно-солевой агар. Через сутки вокруг колоний появляются зоны помутнения с радужным ореолом.

• Плазмокоагулаза: выполняют посев культуры на цитратную плазму, после инкубации 18-24ч появляется студнеобразный сгусток коагулированной плазмы - коагулаза (+)

• Гемолизин - наличие зон бета- или альфа - гемолиза вокруг колоний на кровяном агаре.

Вопрос 27.

Учесть результаты опыта по определению фаготипа и фагогруппы штамма стафилококка.

Фаготипирование проводят с помощью набора типовых стафилофагов, устанавливая идентичность фаготипов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, подсушивают, а затем петлей наносят по капле каждого фага на 22 квадрата, предварительно намеченных карандашом на дне чашки Петри, Посевы инкубируют в термостате при 37С. Результаты оценивают на след. День по наличию лизиса культуры в квадратах.

Вопрос 28.

Указать последовательность определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных дисков и оценить результаты.

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри, после чего на его поверхность пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определённые дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37С до следующего дня. По диаметру задержки зон роста культуры стафилокока судят об ее чувствительности к соответствующим антибиотикам. При зоне задержки роста диаметром до 10 мм культура расценивается как малочувствительная, а свыше 10 мм- как высоко чувствительная. В том случае, если диски пропитаны разными концентрациями одного и того же антибиотика, можно установить наименьшую дозу препарата, к которой чувствительна исследуемая бактериальная культура.

Вопрос 29.

Рассчитать фагоцитарные показатели и дать оценку состоянию фагоцитарного звена иммунной защиты организма. Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток. ФАГОЦИТАРНЫЙ показатель-— число микробов, поглощенных одной фагоцитирующей клеткой. Количественную оценку фагоцитарной активности гранулоцитов и моноцитов проводят в цельной крови, в лейкоцитарной взвеси или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют частицы латекса диаметром 1.0 - 2.0 мкм, суспензию убитых нагреванием бактерий или дрожжеподобных грибов.

Фагоцитирующие клетки смешивают с объектами фагоцитоза и в соотношении 1:100 или 1:10 и инкубируют при 37° в течение ЗОмин при постоянном перемешивании. Затем пробирки центрифугируют и осадок ресуспензируют в капле сыворотки крови для приготовления мазка. В мазках, фиксированных краской Май- Грюнвальда и окрашенных по Романовскому- Гимзе, подсчитывают процент фагоцитирующих клеток - фагоцитарный показатель и среднее число частиц, поглощенных одной клеткой - фагоцитарное число. Норма: фаг. показатель 40-80% Фаг. число 1-5.