Вопрос 30.

Учесть результат реакции связывания комплемента: реакция комплемента (РСК) ставиться в две фазы: в первой фазе антиген соединяют с исследуемой сывороткой, в которой предполагают наличие антител, и добавляют комплемент, инкубируют в термостате ЗОмин или 18-20 часов в холодильнике.

Вторая фаза: добавляют гемолитическую систему (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка). После инкубации в термостате в течение ЗОмин. учитывают результат.

Про положительной РСК антител сыворотки, соединившись с антигеном, образуют иммунный комплекс, который присоединяет к себе комплемент, и гемолиза не произойдет. Если реакция отрицательная (антитела в исследуемой сыворотке нет),комплемент остается свободным, и произойдет гемолиз.

РСК применяется для серологической диагностики сифилиса, гонореи, сыпного тифа и других заболеваний.

РСК можно применить и для определения антигела, например, вируса. В этом случае в качестве антител применяется диагностическая иммунная сыворотка. В качестве комплемента для РСК применяется сыворотка крови морской свинки. Гемолитическую сыворотку получают из крови кроликов, иммунизированных эритроцитами барана.

Вопрос 31.

Дать характеристику методике определения гиперчувствительности замедленного типа.

Гиперчувствительность замедленного типа. ГЧЗТ связана не с антителами, а с иммунными лимфоцитами - Т-эфекторами (Те). Это Т-зависимая аллергия. К данному типу аллергии относитися инфекционная аллергия. Наблюдается она при туберкулезе, бруцеллезе, туляремии, токсоплазмозе, грибковых заболеваниях. Аллергические пробы используют в диагностических целях. Аллергены, полученные из микробов, вводят внутрикожно или накожно. При наличии повышенной чувствительности к возбудителю через 24-48-72 часа развивается воспалительная реакция. Диагностические аллергические пробы применяются при туберкулезе (реакция Манту с туберкулином), при бруцеллезе, сибирской язве и др.

Контактная аллергия. Повышенная чувствительность аллергического характера к лекарственным препаратам связана с выработкой антител или иммунных лимфоцитов. Это явление существенно отличается от обычного усиления фармакологического действия лекарственного препарата.

Вопрос 32.

Из выросших изолированных колоний кишечной палочки отбирают те,которые агглютинируются диагностическими ОВ- сыворотками. Пересеивают их на скошенный агар, выделяют чистую культуру и затем определяют серовар в развернутой реакции агглютинации с живой культурой (В- агглютинация) и прогретой кипячением культурой (О- агглютинация). Учет производится по титру (т.е. положительному результату в виде склеивания и оседания на дно пробирки иммунных комплексов в виде хлопьев или зерен, видимых невооруженным глазом).

Вопрос 33.

При работе с растворимыми, мелкодисперсными антигенами применяют реакцию непрямой, или пассивной, гемаггпютинации (РПГА). Антиген предварительно адсорбируют на инертных монодисперсных частицах или клетках, например на эритроцитах, готовят эритроцитарный диагностикум. Такие нагруженные антигеном эритроциты склеиваются под действием иммунной сыворотки, содержащей антитела к данному антигену(РПГА). Реакция отличается высокой чувствительностью и позволяет выявлять сравнительно небольшие концентрации антител в исследуемых сыворотках. При необходимости обнаружения антигена в исследуемом материале эритроциты предварительно нагружают специфическими антителами и также ставят РПГА. При помощи РПГА определяют полные(бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этим методом, так как, соединяясь с антигеном, блокируют его,но не могут вызвать агрегации частиц в крупные конгломераты.

Рекцию используют либо для выявления специфических антител в сыворотке больного при серодиагностике, либо для идентификации неизвестного возбудителя или индикации его антигенов в исследуемом материале. Соответственно используют стандартные(коммерческие) эритроцитарные диагностикумы или суспензионные антитела, полученные путем сенсибилизации обработанных танином(танизированных) эритроцитов антителами. В лунках с пластмассовых пластин готовят поледовательные разведения сыворотки больного, ориентируясь на диагностический титр. Затем в каждукю лунку вносят одинаковый объем ^(0,05 мл) 3% суспензии нагруженных антигеном эритроцитов^ соответствующего эритроцитраного диагностикума. Через 2 часа инкубации при 37 градусах учитывают результат, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): отрицательный- осадок эритроцитов в виде компактного диска или колечка с ровными краями на дне лунки, положительный- характерный кружевной вид осадка эритроцитов, тонкая пленка с неровными краями. Серодиагностика шигелл. Применяется для ретроспективного обоснования диагноза дизентерии при стертых формах, а также для уточнения вида возбудителя. Ставят реакцию агглютинации по типу реакции Видаля и РПГА с эритроцитарным диагностикумами Флекнери и Зоне. Диагностическим титром при дизентерии,вызванной шигеллами Флекснера, считают разведение 1:200, а шигеллами Зонне- 1:100. *В тетради записалипо этой теме: для определения вида шигелл поставили реакцию агглютинации на стекле с видовыми сыворотками флекснери и зот. Выделена шигелла