Количественное определение глюкозы

 Глюкоза при нагревании с ортотолуидиновым реактивом дает зеленую окраску, интенсивность которой пропорциональна концентрации глюкозы.

Реактивы: ортотолуидиновый реактив, стандартный раствор глюкозы 1 мг/мл, раствор глюкозы неизвестной концентрации.

Оборудование: Спектрофотометр, пипетки, водяная баня, штатив, пробирки.

Ход работы

К 0,2 мл стандартного раствора глюкозы и 0,2 мл раствора с неизвестной концентрацией добавить по 2 мл ортотолуидинового реактива. Пробирки со смесью поместить в кипящую водяную баню на 8 минут. Пробирки вынуть, охладить под струей водопроводной воды до комнатной температуры.

Оптическую плотность раствора измеряют при длине волн 590 – 650 нм. Расчет ведут по формуле:

Сх =	Ех	* Сст
	Ест

где:

  С_х – концентрация глюкозы в исследуемом растворе (мг/мл);

  С_ст – концентрация глюкозы в стандартном растворе (мг/мл);

  Е_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

  Е_ст – оптическая плотность стандарта.

ЛАБОРАТОРНАЯ   работа  4 

Химические свойства моносахаридов

 Реактивы: глицерин; 1 %–й раствор глюкозы; 1 %–й раствор фруктозы или 2 %–й раствор меда (основным компонентом меда является фруктоза); реактив Селиванова (0,05 г резорцина растворяют в 100 см³ 20 %–й соляной кислоты); 5 %–й раствор сульфата меди; 5 %–й раствор гидроксида натрия; 5 %–й раствор нитрата серебра (сохраняют в темном месте); 10 %–й раствор аммиака; дистиллированная вода.

Оборудование:  пробирки, водяная баня.

Ход работы

Задание 1. Качественная реакция на гликоли.

1. В четыре пронумерованные пробирки внесите по 10 капель воды, глицерина, растворов глюкозы и фруктозы (или раствора меда).

1. Добавьте в каждую пробирку по 2 капли раствора сульфата меди, затем по 5 капель раствора гидроксида натрия.

2. Содержимое пробирок тщательно перемешайте. Образуется ли осадок гидроксида меди (II)? Сделайте вывод о  структурной особенности глюкозы и фруктозы.

Задание 2. Качественная реакция на альдегидную группу.

1. Полученные в предыдущих опытах растворы, содержащие глюкозу и фруктозу, нагрейте на водяной бане. Раствор окрашивается сначала в желтый, а затем в оранжевый цвет. О чем это говорит?

2. В пробирку налейте 1 см³ раствора нитрата серебра и добавьте по каплям раствор аммиака. Вначале образуется серый осадок, который растворяется в избытке аммиака.

3. Полученный аммиачный раствор оксида серебра разделите на две пробирки и добавьте в одну 1 см³ раствора глюкозы, а во вторую 1 см³ раствора фруктозы (или раствора меда).

4. Пробирки поставьте в горячую (80 ^оС) воду на 5 – 10 минут. На стенках пробирок образуется зеркальный налет металлического серебра.

5. Запишите уравнения протекавших реакций, учитывая, что у фруктозы окисляется до карбоксильной группы концевая спиртовая группа, соседняя с карбонильной.

Задание 3. Качественная реакция на кетозы.

1. В две пробирки внесите по 1 см³ раствора Селиванова.

2. В одну пробирку добавьте 2 капли раствора глюкозы, а во вторую – 2 капли раствора фруктозы (или 4 капли раствора меда).

3.  Пробирки нагрейте на кипящей водяной бане. В пробирке с раствором фруктозы (или меда) появляется вишнево–красное окрашивание.

Оформление результатов

Оформите проведенные исследования в виде таблицы.

Сделайте выводы о структуре моносахаридов.

№ задания	Исследуемое вещество	Реагент	Условия проведения реакции	Наблюдаемое явление	Вывод

ЛАБОРАТОРНАЯ  работа  5

Гидролиз полисахаридов

 Реактивы: 1 %–й раствор сахарозы; 1,5 %–й крахмальный клейстер; фильтровальная бумага; 10 %–й раствор серной кислоты; 5 %–й раствор сульфата меди; 10 %–й раствор гидроксида натрия; концентрированная серная кислота.

Оборудование:  пробирки, водяная баня.

Ход работы

Задание  1. Гидролиз сахарозы.

1. В две пробирки поместите по 10 капель раствора сахарозы.

2. В одну пробирку добавьте 1 – 2 капли 10 %–го раствора серной кислоты.

3. Пробирку с подкисленным раствором сахарозы поставьте в почти кипящую водяную баню. Через 20 минут пробирку достаньте и охладите.

4. В обе пробирки прибавьте по 1 капле раствора сульфата меди и по каплям прибавляйте 10 %–й раствор гидроксида натрия до появления интенсивно–синей окраски, свидетельствующий о полной нейтрализации кислоты.

5. Нагрейте обе пробирки на водяной бане. В обеих ли пробирках появилась оранжево–желтая окраска?

Задание  2. Гидролиз крахмала.

1.  Поместите в пробирку 10 капель крахмального клейстера и добавьте 2 капли 10 %–го раствора серной кислоты.

2.  Поставьте пробирку в кипящую водяную баню. Через 30 минут пробирку выньте. Раствор стал прозрачным.

3.  К полученному раствору добавьте 1 каплю раствора сульфата меди и по каплям добавляйте 10 %–й раствор гидроксида натрия до появления интенсивно–синей окраски.

4.  Нагрейте пробирку на водяной бане. Появляется оранжево–желтая окраска.

Задание 3. Гидролиз целлюлозы.

При выполнении этого задания необходимо соблюдать особую осторожность!

1. Поместите в пробирку мелкоизмельченный кусочек фильтровальной бумаги и добавьте 1–3 капли (ОСТОРОЖНО!) концентрированной серной кислоты так, чтобы кислота смочила бумагу.

2. Смесь осторожно нагрейте (обычно достаточно тепла руки) до почти полного растворения целлюлозы.

3. К полученному раствору добавьте 10 капель воды, хорошо перемешайте и поместите пробирку в кипящую водяную баню на 30 минут.

4. По окончании реакции к небольшой порции раствора прибавьте 1 каплю раствора сульфата меди и по каплям добавляйте 10 %–й раствор гидроксида натрия до появления интенсивно–синей окраски.

5. Нагрейте пробирку на водяной бане. Появляется оранжево–желтая окраска.

Оформление результатов

Оформите проведенные исследования в виде таблицы. Сделайте выводы о структуре полисахаридов и продуктах его гидролиза.

№ задания	Исследуемое вещество	Наблюдаемое явление	Вывод

Лабораторная работа 6