Подсчёт форменных элементов крови

Определение количества форменных элементов в крови производят путём подсчёта в счётных камерах или вычисления по объёму столба эритроцитов.

Счётная камера представляет собой массивное предметное стекло с накле­енными на его поверхность стеклянными пластинками. На одной из пластинок выгравирована очень тонкая сетка для подсчёта форменных элементов крови, разделённая на квадраты. Прототипом счётных камер считается камера Тома — Цейсса, которая в своё время получила очень широкое распространение. В насто­ящее время охотнее пользуются камерой Бюркера с оригинальной сеткой, отличающейся от сетки Тома—Цейсса.

В Советском Союзе выпускаются несколько изменённые камеры Бюркера с сетками Тома—Цейсса, Тюрка или Бюркера. Новая советская камера состоит из толстого стекла, на поверхность которого наклеены параллельно друг другу три стеклянные пластинки, из которых средняя на 0,1 мм тоньше боковых. Поэтому если систему покрыть тонким покровным стеклом, над средней пла­стинкой образуется полое пространство высотой 0,1 мм. На поверхности этой среднеей пластинки выгравирована сетка.

Сетка Тома состоит из 16 больших квадратов, расположенных в 4 ряда, отделённых друг от друга тройными линиями; каждый из них, в свою очередь,разделён на 16 малых. Если учесть также малые квадраты, лежащие на тройных линиях, вся сетка включает ровно 400 малых квадратов. Каждая сторона малого квадрата равна 1/20 мм, высота—¹/10 , площадь—1/₄₀₀ кв. мм и объём— 1/₄₀₀₀ куб. мм. Число квадратиков, площадь и объём выгравированы на сво­бодной поверхности камеры.

Сетка Бюркера состоит из 9 основных квадратов, расположенных по 3-в трёх рядах и отделённых друг от друга тройными линиями. Все 9 квадратов двойными линиями разделены на большие квадраты, по 16 в каждом.

Пере­сечением двойных и тройных линий, отделяющих друг от друга основные и боль­шие квадраты, образуются малые квадратики, расположенные в 13 рядов, по 13 квадратиков в каждом ряду. Каждая сторона малого квадратика, как

и в сетке Тома, равна 1/20мм, площадь — 1/400 кв. мм и объём — 1/4000куб. мм. Сторона большого квадрата равна ⁴/₂₀ ^{= 1}/₅ мм. Площадь основного квадрата— 1 кв. мм, а площадь всей сетки (9 квадратов) — 9 кв. мм.

Сетка Тюрка с площадью 9 кв. мм разделена, как и сетка Бюркера, на 9 основных квадратов, расположенных в 3 ряда. Для подсчёта эритроцитов пользуются центральным квадратом, представляющим собой сетку Тома с её 400 малыми квадратами. Остальные 8 основных квадратов разделены, как в сетке Бюркера, на большие и малые квадраты такой же площади и объёма.

Зная площадь, на которой произведён подсчёт форменных элементов крови, высоту камеры и степень разведения крови, можно легко определить количество их в 1 куб. мм крови.

V Для взятия и разведения крови пользуются специальными пипетками, которые называют смесителями или меланжерами. Смеситель для эритроцитов представляет собой градуированный капилляр с делениями, в верхней части вытянутый в довольно объёмистую ампулу, которая с противоположного конца заканчивается тонкой пипеткой с меткой 101. Капилляр разделён нане­сёнными на его стенку чёрточками на 10 частей, из которых пятая помечена цифрой 0,5, десятая—1. Эти цифры показывают отношения между объёмами капилляра и ампулы. Если объём капилляра до метки 1 принять за единицу, то объём всей ампулы до единственной черты на пипетке в смесителе для эритроцитов будет равен 100 (в смесителе для лейкоцитов 10).

Для правильного подсчета эритроцитов необходимо точно взять опре­делённый объём крови, правильно развести её физиологическим раствором или жидкостью Гайема, правильно зарядить камеру, точно подсчитать все клетки, расположенные в 3—5 больших квадратах, и, наконец, высчитать их количество в 1 куб. мм неразведённой крови.

Техника исследования. Полученную путём укола каплю крови наби­рают в капилляр до метки 0,5 или 1 и насасывают затем до метки 101 жидкости Гайема* или физиологического раствора. Зажав концы смесителя пальцами и осторожно удерживая его в горизонтальном положении, размешивают жидкость в течение ¹/2 минуты до получения равномерной взвеси. Затем, удалив содержимое капилляра, выдувают одну небольшую каплю разведён­ной крови и, поместив её на сетку камеры, осторожно покрывают по­кровным стеклом. Чтобы получить-правильные результаты, необходи­мо так наложить покровное стекло, чтобы высота камеры была действи­тельно равна 0,1 мм. Для этого кончиками пальцев, плотно прижи­мая стекло к камере и слегка пе­редвигая, пришлифовывают его до совершенно плотного соприкосно-

вения. Появление ньютоновых ко­лец является показателем того, что камера заряжена правильно.

Ри Рис. 126. Камера Тома-Цейса.

Проверив таким образом толщину слоя, покрывающего сетку, камеру пере­носят под микроскоп и, выждав несколько минут, пока эритроциты осядут на дно, приступают к подсчёту.

Если камера заряжена правильно, эритроциты довольно равномерно распределяются по поверхности стенки, причём число их в отдельных квадрати­ках показывает сравнительно небольшие колебания. В тех же случаях, когда допу­щены какие-либо отступления от принятой методики, клетки ложатся слишком густо, кучками и при подсчёте, вследствие нерав­номерного их распределения, получаются слишком большие вариации в цифрах.

В камере Тома—Цейсса подсчёт начи­нают обыкновенно с маленького квадрати­ка, расположенного в левом верхнем углу большого, затем переходят по очереди от второго к третьему и четвёртому квадрату верхнего ряда.

Рис. 127. Схема подсчёта эритроцитов

Просчитав верхний ряд, приступают к подсчёту под ним располо­женного, но в обратном направлении, как показано на рисунке, т. е. справа налево. Меняя с каждым рядом направление, заканчивают подсчётом левого нижнего квад­ратика.

В камерах с сеткой Бюркера подсчёт эритроцитов производят в малых квадратах, отделяющих один ряд больших квадратов от другого, ниже распо­ложенного. Пересчитав все клетки одного ряда, переходят к другому; и т. д. Обычно ограничиваются подсчётом 5—6—8 рядов.

Чтобы избежать повторной записи одной и той же клетки, рекомендуют всегда придерживаться следующей методики. Пересчитав эритроциты, распо­ложенные в середине квадратика, присоединяют к полученной сумме клетки, прилегающие к верхней и левой линиям квадратика, а также расположенные в левых верхнем и нижнем его углах. Клетки, касающиеся правой линии, относятк следующему квадратику, вправо расположенному, прилегающие к нижней линии — к нижнему квадратику. Таким образом, совершенно не обращают внимания на то, куда, в какой квадратик больше выдаётся клетка, где располо­жена большая её часть. Важно лишь одно, какой линии она касается. Чем больше подсчитано квадратов, тем, конечно, надёжнее результаты исследо­вания. Чтобы получить правильные данные, следует пересчитать не менее 5 больших квадратов. Когда нужны лишь приблизительные данные, ограничи­ваются подсчётом 2—3 больших квадратов.

При вычислении определяют среднюю делением всех сосчитанных клеток на число квадратиков. Средняя показывает количество эритроцитов в 1/₄ ооо куб. мм разведённой крови. Умножив полученную среднюю на 4 000 и степень разведения (100 или 200), определяют содержание эритроцитов в 1 куб. мм крови. Если взять разведение 1 :200, то, чтобы получить результаты подсчёта, достаточно умножить количество клеток большого квадрата на 50 000; при разведении 1 : 100 результаты подсчёта определяют умножением на 25 000.

Количество эритроцитов в крови домашних животных показывает значи­тельные колебания, в зависимости от ряда не только постоянных (род живот­ного, пол, порода, возраст и т. д.), но и переменных факторов. Марек даёт следующие предельные цифры:

Вид животного	Количество Эритроцитов (в млн.)	Вид животного	Количество Эритроцитов (в млн.)
Лошади	7-9	Волы	5-6,5
В том числе:		Телята	5-8,5
Жеребцы	8-10	Овцы	8-11
Кобылы	6-7,5	Свиньи	5,5-8
Мерины	7,5-8	Собаки	5-8
Жеребята до 1г.	9	Кошки	9
КРС	5-7	Морские свинки (по Криницину)	4,7-6,7
Быки	6,5-7	Куры (по Зайцеву)	3-5
Коровы	5-6,5

Особенно большое клиническое значение придают уменьшению количества эритроцитов (олигоцитемия). Увеличение их числа (эритроцитоз) обнаружи­вают лишь в редких случаях.

Причиной эритроцитозов являются обычно сгущения крови вследствие потери большого количества воды. Они наблюдаются при сильных поносах, упорной рвоте, в момент образования экссудатов и транссудатов, при распро­странённых отёках, обильном потоотделении, в начальной стадии некоторых лихорадочных и инфекционных процессов. Особенно резкие эритроцитозы мы наблюдали при механических илеусах (непроходимости кишечника), когда число эритроцитов поднималось до 12— 14 млн., а процентное содержание гемо­глобина обычно превышало 100.

Различной степени олигоцитемии наблюдают при инфекционных заболева­ниях, связанных с распадом эритроцитов, адсорбировавших циркулирующие в крови токсины, например, при инфлуэнце, крупозной пневмонии, сапе. Более значительные изменения обнаруживают при вторичных анемиях, напри­мер, при оводовой болезни овец, гельминтозах кишечника, лёгочноглистной болезни. Резкие снижения количества эритроцитов часто наблюдают при ряде протозойных заболеваний — пироплазмозе, нутталлиозе, трипанозомозе. Особенно большое значение придают олигоцитемии в диагностике инфекцион­ной анемии лошадей, где она играет роль одного из наиболее ценных симптомов клинической картины.

Определение количества лейкоцитов. Для разведения крови пользуются растворами, гемолизирующими красные кровяные тельца. Обычно применяют 2% водный раствор уксусной кислоты, подкрашенный раствором метиленовой синьки или генциан-виолета. Разведение крови производят в смесителе для лейкоцитов. Набрав крови до метки 1, разбавляют её до метки 11 подкрашенным раствором уксусной кислоты и тщательно, с предосторожностями, как и при определении эритроцитов, перемешивают взвесь. Затем обычным способом заряжают камеру и, выждав 2—3 минуты, чтобы дать время лейкоцитам опу­ститься на дно камеры, производят подсчёт. В камере Тома—Цейсса подсчиты-ваются все расположенные на сетке клетки. В камере Бюркера ограничиваются подсчётом лейкоцитов, лежащих в 2 основных квадратах. Для более точных определений камеру после первого подсчёта заряжают ещё один-два раза, вновь пересчитывая каждый раз лейкоциты. Результаты выражают при этом средней арифметической из всех подсчётов. Вычисление делают по формуле:

где п — общее количество клеток, обнаруженных на поверхности всей сетки (400 квадратиков); у — степень разведения. Предельные цифры характеризуются также у всех домашних животных большими колебаниями, а именно:

Вид животного	Количество лейкоцитов в 1 куб. мм крови (в тыс.)	Вид животного	Количество лейкоцитов в 1 куб. мм крови (в тыс.)
Лошади Крупный рогатый скот Овцы Свиньи	7—11 7-9 9—10 11—16	Собаки Кошки Кролики Куры ....	9—10 5—15 6—8 23—35—45

Определение количества тромбоцитов. Подсчёт тромбоцитов производят в мазках крови, обработанных по Фонио. Чтобы избежать коагуляции пласти­нок в момент приготовления мазка, прокол кожи делают через нанесённую на её поверхность каплю 14% раствора сернокислой магнезии. Выступившая кровь сейчас же смешивается с раствором, что делает коагуляцию невозможной. Для приготовления мазка берут ребром шлифованного стекла немного смеси, наносят её на предметное стекло и размазывают обычным способом.

Приготовленные таким образом препараты быстро высушивают и фиксируют в растворе следующего состава: сулемы 0,1, ледяной уксусной кислоты— 6 капель, абсолютного спирта— 100 куб. см. Окраска—раствором Гимза в течение 1—2 часов. Очень красивые препараты получают при окраске мазков, фикси­рованных в метиловом спирте по Фрейфельду. При подсчёте тромбоцитов коли­чество их выражают числом, определяющим соотношение между пластинками и эритроцитами; оно показывает, сколько тромбоцитов приходится на 3 000 эритроцитов. Если одновременно произвести определение эритроцитов в счётной камере, то, сделав соответствующие пересчёты, результаты работы можно вывести в цифрах, показывающих количество кровяных пластинок в 1 куб. мм крови. При подсчётах пользуются счётным окошечком, вырезанным из кар­тона; суживая поле зрения, оно значительно облегчает исследование. В общем у здоровой лошади на 3 000 эритроцитов приходится в среднем 50 тромбоцитов, в 1 куб. мм их около 35 000.

Увеличение количества тромбоцитов (тромбоцитоз) обнаруживают при инфлуэнце лошадей, мыте, плеврите, гемоглобинемии, саркоматозных пора­жениях органов.

Уменьшение тромбоцитов, которому дают название тромбопении, установлено при инфекционной анемии лошадей, morbus maculosus, инфекционном бронхите.

Особенно важное клиническое значение тромбопении имеют в диагностике стахиботриотоксикоза лошадей. Как показывает опыт, при продолжительном скармливании корма, поражённого грибком Stachybotrys alternans, число тром­боцитов начинает снижаться ещё задолго до появления изменений со стороны белой крови. По мере развития заболевания количество их постепенно умень­шается. Незадолго до перехода болезни из скрытой в септическую форму,

клинически резко выраженную, число тромбоцитов па­дает до минимума (8—5—3 тромбоцитов на 3 тыс. эри­троцитов). Одновременно обнаруживают резкую лейко­пению, исключительно резкий лимфоцитоз, когда лим­фоциты вытесняют почти все другие формы (до 90% лимфоцитов), в лейкоцитарном профиле резкий аграну-лоцитоз, со стороны плазмы — полная ирретрактиль-ность кровяного сгустка.

Рис. 128. Счётное окошечко Фонно.

Строгая последовательность в развитии измененийсо стороны крови даёт возможность расценивать тромбопению, наравне с изменениями ретракции крови, вкачестве раннего симптома и использовать для выделения из общей массы тех лошадей, у которых болезненный процесс грозит перейти в септическую форму. Впрыскивание адреналина создаёт резкий тромбоцитоз, причём содержа­ние пластинок повышается раза в два против нормы.