1. Методика определения группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками

Прежде чем приступить к работе по определению группы крови, не­обходимо ознакомиться с этикетками стандартных сывороток всех четы­рех групп. Затем провести макроскопическую оценку пригодности сыво­роток. На этикетках имеются следующие сведения:

• учреждение, в котором изготовлена сыворотка;

• групповая принадлежность сыворотки с обязательным указанием агглю­тининов,

• номер серии,

• титр агглютининов, он должен быть не менее 1:32,

• срок годности сыворотки (число, месяц, год),

• наличие цветных полос: у группы 0(I) - полос нет, у группы А(II) - две синие, у группы B(III) - три красные, у группы АВ(IV) - четыре желтые.

Стандартные сыворотки выпускаются с определенной цветной мар­кировкой: I(0) - бесцветная, II(А) - голубая, III(B) - красная, IV (АВ) - жел­тая. Использование красок не влияет на свойства сывороток (титр и срок годности).

Макроскопически сыворотки должны быть прозрачными, допускает­ся небольшая опалесценция. При наличии помутнения или хлопьев сыво­ротка считается не пригодной к определению группы крови. Срок годно­сти стандартной сыворотки равняется шести месяцам с момента ее расфа­совки. По истечении шести месяцев ее можно проверить и, если она не ут­ратила своих свойств, то на СПК срок годности продляется еще на два ме­сяца.

Определение группы крови проводят на специальных эмалирован­ных металлических пластинках со смачиваемой поверхностью, на которых вверху обозначены группы крови, а под ними размещены два ряда лунок для капель сывороток и крови. Слева имеется разметка серий сывороток. При отсутствии специальных пластин определение группы крови можно осуществлять на обычных фарфоровых тарелочках, на которых делается аналогичная разметка. На пластинках сверху необходимо написать фами­лию и инициалы больного, у которого определяется группа крови.

На сухую пластинку, под соответствующие обозначения групп кро­ви, наносят в лунки по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыво­ротки (титр 1:32) двух серий; капли второй серии сывороток располагают во второй ряд. Всего получается шесть капель. Сыворотку берут из каждой ампулы своей пипеткой и опускают ее в ту же ампулу с сывороткой. Ис­следуемую кровь, взятую из пальца или пробирки, размещают в виде крупной капли на пластинке справа. Из нее забирают каплю крови величи­ной в 10 раз меньшую (0,01 мл), чем капля сыворотки. Обычно это делают стеклянной палочкой, погружая ее в каплю исследуемой крови, а затем размещают эту маленькую каплю рядом с каплей стандартной сыворотки. Перемешивание капель крови с сывороткой производят отдельными для каждой капли стеклянными палочками. Можно перемешивать капли одной палочкой, но в этом случае необходимо, после перемешивания каждой ка­пли, промывать палочку в стакане с изотоническим раствором хлористого натрия и насухо вытирать.

После размешивания капель пластинку слегка покачивают, затем ос­тавляют в покое на одну - две минуты, потом снова покачивают. Через пять минут к капле смеси сывороток и эритроцитов, в которых произошла агглютинация, добавляется по одной капле изотонического раствора хло­ристого натрия для устранения псевдоагглютинации, после чего можно де­лать заключение о группе крови.

Если агглютинация произошла, то в каплях смеси сывороток и крови видны невооруженным глазом мелкие красные комочки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Иногда эти комочки сливаются в более крупные и выглядят в виде хлопьев неправильной формы, а сыво­ротка становится обесцвеченной.

Если в каплях агглютинация не произошла, то смесь сыворотки и крови остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнару­живаются агглютинатов. С помощью стандартных сывороток мы устанав­ливаем наличие или отсутствие в исследуемой крови агглютиногенов А и В. В результате такого исследования возможны четыре различных комби­нации положительных и отрицательных реакций (таблица 3):

1. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, то ис­следуемая кровь принадлежит к первой группе.

2. Наличие агглютинации с сыворотками первой и третьей групп свиде­тельствует о принадлежности исследуемой крови ко второй группе.

3. Проявление реакции агглютинации с сыворотками первой и второй групп свидетельствует о принадлежности крови к третьей группе.

4. Если сыворотки всех трех групп крови дали реакцию агглютинации (и она является специфической), то исследуемая кровь принадлежит к четвертой группе. В последнем случае, для исключения неспецифиче­ской агглютинации исследуемых эритроцитов, необходимо провести контрольное исследование со стандартной сывороткой четвертой группы, и только при получении отрицательного результата, можно утверждать, что исследуемая кровь принадлежит к четвертой группе.

Таблица 3. Определение группы крови при помощи стандартных сывороток

Результат реакции со стандартными сыворотками			Исследуемая кровь
0αβ(I)	Aβ(II)	Bα(III)	принадлежит к группе
- -	- -	- -	0(I)
+	-	+
+	-	+	A(II)
+	+	-
+	+	-	B(III)
+	+	+
+	+	+	AB(IV)

Примечание: Знаком (+) обозначена агглютинация, знаком (-) – ее отсутствие.

Результат определения группы крови записывается в правом верхнем углу лицевой страницы истории болезни с указанием даты и подписи вра­ча, производившего определение, или на этой же странице заполняется со­ответствующая строка.