Работа №1 Определение мочевой кислоты в биологических жидкостях

Принцип метода: Мочевая кислота (МК) окисляется при каталитическом действии фермента уриказы с образованием аллантоина, СО₂ и Н₂О₂. Возникшую перекись водорода, концентрация которой пропорциональна уровню МК, определяют по образованию окрашенных продуктов окисления 4-аминоантипирина в реакции, катализируемой пероксидазой.

Порядок выполнения работы:

Реактивы	Калибровочная проба	Опытная проба
Рабочий реагент (ферменты, хромогены, буфер)	1 мл	1 мл
Калибровочный раствор МК (500 мкмоль/л)	0,025 мл	-
Кровь (сыворотка, плазма) Моча (разведение 1:5 )	-	0,025 мл

Пробы перемешать, выдержать 10 минут при 37^о С и измерить оптическую плотность на ФЭКе против рабочего реагента ( длина волны 520-550 нм).

Расчет:

Содержание МК в сыворотке крови (плазме) рассчитывают по формуле:

Е_опыт

С = ------ × 500, где 500 – содержание МК в калибровочном растворе (мкмоль/л)

Е_калиб

Содержание МК в суточной моче рассчитывают по формуле:

Е_опыт ×500 ×5 × V

С = --------------------------,

Е_калиб × 1000

где 500 – содержание МК в калибровочном растворе (мкмоль/л)

5 - коэффициент разведения мочи

1000 – коэффициент прерасчета мкмоль в моль

V - суточный диурез (♂- 1,5 л, ♀ - 1,2 л, дети – 1 л)

Нормальные значения:

Экскреция мочевой кислоты: 1,6 – 3,54 ммоль/сут (270 – 600 мг/сут)

Концентрация в крови: ♂ - 0,24 – 0,50 ммоль/л

♀ - 0,16 – 0,44 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение определения мочевой кислоты и уратов в биологических жидкостях:

Гиперурикемия – повышение концентрации мочевой кислоты в крови

Гиперурикурия – увеличение выделения мочевой кислоты с мочой (урикозурия)

Гипоурикурия - уменьшение выделения мочевой кислоты с мочой

Возможные причины гиперурикемии:

Первичные гиперурикемии (обусловлены энзимодефектами): подагра, синдром Леш-Нихана

Вторичные гиперурикемии (обусловлены иными причинами): алиментарные (пищевые), нарушение экскреции мочевой кислоты при поражении почек, усиление катаболизма (распада) собственных нуклеопротеинов тканей

Возможные варианты изменения концентрации мочевой кислоты в крови и моче:

Гиперурикемия Гипоурикурия	Подагра (во время приступа) Поражение почек (острый и хронический нефрит)
Гиперурикемия Гиперурикурия	Избыточное потребление нуклеопротеинов с пищей (мясо, икра и др.) Катаболизм собственных нуклеопротеинов (лейкоз, лучевая болезнь, гемолиз, злокачественный рост, лечение цитолитиками и цитостатиками, артрит, диабет, голодание, аллергия, гипоксия и др.)
Гипоурикемия Гипоурикурия	Прием иодистого калия, хинина, атропина, прогрессирующая мышечная дистрофия

Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время.

1. Антибиотик азасерин – структурный аналог глутамина, является мощным ингибитором синтеза пуриновых нуклеотидов и применяется в химиотерапии опухолей. Зная происхождение атомов гетероциклического кольца пурина, определите, какие этапы метаболизма инозинмонофосфата (ИМФ) будут ингибированы при введении азасерина

2. Изучение регуляции синтеза пуриновых нуклеотидов в эксперименте показало, что избыток АМФ и ГМФ тормозит синтез ИМФ – предшественника этих нуклеотидов за счет ингибирования одного из ферментов. Каков механизм регуляции?

А. Конкурентное ингибирование

В. Фосфорилирование-дефосфорилирование

С. Аллостерическая регуляция по принципу обратной связи

Д. Частичный протеоліз

Е. Неконкурентное ингибирование

3. Непосредственным предшественником образования мочевой кислоты является

1. гипоксантин

2. ксантин

3. аденин

4. гуанин

5. инозиновая кислота

4. Источником NH₂-групп при синтезе ГМФ из инозиновой кислоты является

1. аспарагиновая кислота

2. глутамин

3. глутаминовая кислота

4. карбамоилфосфат

5. мочевина

5. Продуктами ксантиноксидазной реакции могут быть

1. аденин

2. мочевая кислота

3. мочевина

4. пероксид водорода

5. ацетон

6. Из инозиновой кислоты в организме могут синтезироваться

1. АМФ

2. ГМФ

3. ЦМФ

4. ТМФ

5. УМФ

7. Конечным продуктом распада пуриновых нуклеозидов у человека является

1. ксантин

2. гипоксантин

3. аллантоин

4. мочевая кислота

5. мочевина

8. Аденин входит в состав

1. ФАД

2. НАД⁺

3. КоА

4. ПФ

5. биотин

9. Веществами, из которых может образоваться мочевая кислота, являются

1. уридин

2. гуанозин

3. ксантин

4. гипоксантин

5. тимидин

10. Наибольшее количество атомов включается в пуриновое кольцо из молекулы

1. глутамина

2. аспартата

3. глицина

4. аргинина

5. аспарагина

Этапы проведения практического занятия.

№ п/п	Название этапа			Цель этапа	Время
1	2			3	4
Вводная часть занятия					5-10 %
1	Организация занятия	Мобилизовать внимание студентов на данное занятие			5
2	Определение темы, мотивации, цели, задач занятия	Раскрыть практическую значимость занятия в системе подготовки к профессиональной деятельности, сформировать мотив и, как следствие, активизировать познавательную деятельность студентов
Основная часть занятия					%
3	Контроль исходных знаний, умений и навыков		Проверка готовности студентов к занятию, выявление исходного уровня знаний, умений и навыков		5
4	Общие и индивидуальные задания на СРС в учебное время		Дифференцированное ориентирование студентов к предстоящей самостоятельной их работе		5
5	Управляемая СРС в учебное время Лабораторная работа		Овладение необходимыми общекультурными, профессиональными компетенциями, исходя из конкретных целей занятия		40
6	Реализация планируемой формы занятия (семинар)		Контроль результатов обучения и оценка с помощью дескрипторов		30
Заключительная часть занятия					5-10 %
7	Подведение итогов занятия		Оценка деятельности студентов, определение достижения цели занятия		5 мин
8	Общие и индивидуальные задания на СРС во внеучебное время		Указание на самоподготовку студентов, ее содержание и характер

Оценивание уровня сформированности компетенций обучающихся проводится по балльно – рейтинговой системе.

Модуль 4: Азотистый обмен.

Тема занятия №24:

«Обмен нуклеопротеидов и нуклеотидов»

Контрольная работа по модулю 4: Азотистый обмен.

Мотивация изучения темы.

Нарушения пуринового обмена проявляются гиперурикемией, которая может носить метаболический (первичный) или вторичный (опосредованный) характер. К метаболической гиперурикемии относят патологическое состояние, вызванное повышенной продукцией мочевой кислоты или снижением ее секреции. Увеличение продукции мочевой кислоты могут вызвать энзимодефекты, связанные с синтезом нуклеотидов, ускоренный гемолиз, серповидно-клеточная анемия и т.д. Вторичную (опосредованную) гиперурикемию вызывают некоторые заболевания крови, почек, отравления свинцом, молибденом, передозировка мочегонных препаратов, несахарный диабет. Гиперурикемия - основная причина подагры. Отложение уратов в почках приводит к почечной недостаточности, мочекаменной болезни. При лечении и предупреждении подагры используют аллопуринол - структурный аналог гипоксантина.

Общая цель: изучения темы направлено на формирование компетенций по ФГОС специальности 060105 Медико-профилактическое (ПК-31) через формирование знаний о механизмах нарушений и биохимических подходах к нарушениям пуринового обмена

Конкретные цели и задачи.

После изучения темы студент должен:

«Знать» основные метаболические причины нарушений пуринового обмена

«Уметь»

• Объяснить нарушения пуринового обмена на молекулярном уровне.

• Использовать знания о путях синтеза и распада нуклеотидов для понимания патогенеза заболеваний, связанных с нарушением их метаболизма.

• Интерпретировать механизм действия аллопуринола и ингибиторов синтеза пуриновых нуклеотидов.

• Уметь оценивать состояние пуринового обмена и интерпретировать его возможные нарушения на основе количественного определения мочевой кислоты в крови и моче для последующей работы, направленной на профилактику нарушений обмена нуклеотидов.

«Владеть»

Основными терминами и понятиями: Гиперурикемия; гипоурикемия, гиперурикурия, гипоурикурия, ксантинурия, Подагра; Синдром Леша-Нихана

Количественными характеристиками обмена пуринов:

• содержание мочевой кислоты в крови (0.12-0.46 ммоль/л).

• уровень экскреции мочевой кислоты с мочой (240-600 мг/сутки, 1.6-3.54 ммоль/ сутки).

Вопросы, изученные на предшествующих дисциплинах и необходимые для освоения темы.

Дисциплина «Органическая химия»: свойства солей мочевой кислоты (уратов);

Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:

1. Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.

   • Нарушение обмена пуриновых нуклеотидов: гиперурикемия

   • Нарушение обмена пуриновых нуклеотидов: подагра

   • Нарушение обмена пуриновых нуклеотидов: мочекаменная болезнь.

2. Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию (тесты).

1. Выберите один правильный ответ. Синтез пуриновых нуклеотидов замедляется при недостатке витамина:

а) аскорбиновой кислоты

б) пантотеновой кислоты

в) фолиевой кислоты

г) рибофлавина

д) тиамина

2. Выберите один правильный ответ. Конкурентным ингибитором ксантиноксидазы является:

а) аллопуринол

б) гипоксантин

в) метилурацил

г) гуанин

д) эритромицин

3. Выберите один правильный ответ. Значительное снижение активности фермента гипоксантин-гуанин-рибозилтрансферазы имеет место при:

а) синдроме Леш-Нихана

б) ксантинурии

в) оротацидурии

г) фенилкетонурии

д) алкаптонурии

4. Выберите один правильный ответ. Гиперурикемия – это повышение в крови:

а) мочевины

б) аммиака

в) мочевой кислоты

г) гипоксантина

д) аллопуринола

5. Выберите один правильный ответ. Выделение мочевой кислоты с мочой у здорового человека в норме составляет:

а) 1-2 г/сут

б) 270-600 мг/сут

в) 20-30 мг/сут

г) 20-35 г/сут

д) следы

3. Задания для подготовки к контрольной работе по модулю 4 «Азотистый обмен»

1. Механизмы пищеварения белков

• Принципы нормирования белка в питании. Азотистый баланс.

• Переваривание белков в ЖКТ.

• Характеристика основных компонентов пищеварительных соков (желудка, кишечника, поджелудочной железы). Механизмы регуляции секреции пищеварительных соков. Образование и секреция HCl. Ферментативный гидролиз белков в желудочно-кишечном тракте. Аминокислоты - конечные продукты переваривания белков, механизмы их всасывания

• «Гниение» белков в кишечнике. Роль УДФ-глюкуроновой кислоты и ФАФС в процессах обезвреживания и выведения продуктов «гниения» (фенол, индол, скатол, индоксил и др.).

• Нарушение переваривания и всасывания белков. Белковая недостаточность: причины, метаболические и клинические последствия, профилактика.