3.5. Валидация метода мембранной фильтрации при контроле лекарственных средств, обладающих антимикробным действием

Фильтруют определенный объем исследуемого образца, используя для одного фильтра количество единиц (ампул, флаконов и т.д.), указанное в табл. 31.2. Фильтр промывают как минимум тремя порциями соответствующей жидкости по 100 мл каждая. В последнюю порцию жидкости для промывания вносят 1 мл приготовленной микробной взвеси тест-микроорганизмов: B.subtilis АТСС 6633 – для тиогликолевой среды; C.albicans NCTC 885-653 – для соево- казеинового бульона или жидкой среды Сабуро. Концентрация тест-штаммов – не более 100 КОЕ/мл. Фильтр помещают в колбу со 100 мл соответствующей питательной среды или добавляют среду в канистру замкнутой системы.

Посевы инкубируют при соответствующей температуре в течение не более 3-х сут для бактерий и 5 сут. для грибов.

Определяют наличие роста тест-микроорганизма при визуальном просмотре. При наличии роста считают, что антимикробное действие полностью инактивировано, и проводят испытание на стерильность, используя то же количество препарата, количество единиц (ампул, флаконов и т.п.), объем жидкости для промывания и те же питательные среды.

При отсутствии роста тест-микроорганизма считают, что антимикробное действие не инактивировано, и испытание повторяют, увеличивая объем жидкости для промывания фильтра. Однако общий объем жидкости, пропущенный через мембрану, не должен превышать 1000 мл.

3.6. Метод прямого посева

3.6.1. Пробоподготовка нефильтрующихся жидкостей

Асептически отбирают объем исследуемого образца (табл. 31.3), достаточный для посева на питательные среды. Слегка перемешивают среду сразу после посева, чтобы не вызвать сильную аэрацию. Далее проводят испытание, как указано в разделе 3.7.

3.6.2. Пробоподготовка лекарственных средств, нерастворимых в изопропилмиристате (ипм) (и12)

Растворы в маслах. В питательную среду предварительно добавляют 10 г/л твина-80 (П48) или другого эмульгатора в концентрации, не оказывающей антимикробного действия в условиях испытания.

Мази и кремы. Отбирают 20 образцов и разделяют их на 2 группы по 10 в каждой. Исследуемые образцы эмульгируют в разведении 1 : 10 с помощью подходящего эмульгатора в соответствующем стерильном растворителе, например, жидкости № 1. Полученную эмульсию вносят в питательную среду, не содержащую эмульгатора.

Если исследуемый образец обладает антимикробным действием в условиях испытания, его устраняют путем добавления подходящих инактиваторов (например, твина-80, количество которого указывают в частной фармакопейной статье) или увеличивают количество питательной среды.

Посевы образцов растворов в маслах ежедневно аккуратно перемешивают. Однако в том случае, когда тиогликолевая или аналогичная ей среда применяется для выявления анаэробных микроорганизмов, встряхивание или перемешивание должно быть сведено к минимуму для того, чтобы не нарушать анаэробных условий.

Если в состав лекарственного средства входят трудноэмульгируемые жиросодержащие продукты, допускается использование определенного эмульгатора соответствующей концентрации в стерильном растворителе с одновременным нагреванием образца до 40 ºС (в исключительных случаях – до 45 ºС) в течение не более 30 мин.