4. Определение отдельных видов бактерий

Испытание включает использование селективных и дифференциально-диагностических питательных сред, а также сред для предварительной инкубации посевов исследуемых образцов.

4.1. Энтеробактерии и подобные им грамотрицательные микроорганизмы

При выявлении бактерий семейства Enterobacteriaceae могут быть выделены другие подобные им виды микроорганизмов, например, бактерии рода Aeromonas и рода Pseudomonas.

4.1.1. Выделение бактерий

Для восстановления жизнеспособности микроорганизмов, поврежденных во время технологического процесса, используют предварительную инкубацию образца в жидкой питательной среде.

10,0 г или 10,0 мл исследуемого образца переносят в 100 мл лактозного бульона (среда № 11), перемешивают и инкубируют в течение, как правило, двух часов, но не более пяти. После инкубации перемешивают содержимое флакона (гомогенат А) и переносят 10 мл (количество, соответствующее 1 г или 1 мл образца) в 100 мл среды обогащения (бульон Мосселя, среда № 3). Посев инкубируют в течение 18-48 ч. При появлении роста делают пересев бактериологической петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда № 4), которую инкубируют при той же температуре в течение 18-24 ч.

При испытании микробиологической чистоты трансдермальных пластырей

10 пластырей помещают в 500 мл лактозного бульона (среда № 11), осторожно встряхивают, избегая вспенивания среды, в течение не менее 15 мин. 50 мл смыва пропускают через стерильный мембранный фильтр из нитрата целлюлозы с диаметром пор 0,45 мкм, который переносят в 100 мл среды обогащения (бульон Мосселя, среда № 3) и инкубируют в течение 18-24 ч. При наличии роста в жидкой среде пересевают петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда № 4), которую инкубируют при той же температуре в течение 18-24 ч для выделения энтеробактерий и других грамотрицательных микроорганизмов.

Появление на плотной среде колоний грамотрицательных палочек является свидетельством того, что исследуемый образец контаминирован вышеупомянутыми бактериями.

4.1.2. Количественное определение

Для посева используют три пробирки с 9 мл бульона Мосселя или среды № 3 в каждой. Гомогенат А в количестве 1 мл (соответствует 0,1 г образца) вносят в первую пробирку, тщательно перемешивают и переносят 1 мл (соответствует

0,01 г образца) во вторую пробирку, снова перемешивают и переносят 1 мл ^{(соответствует 0,001 г образца) в третью пробирку, меняя пипетку после каж}дого шага (рис. 32.1). Посевы инкубируют в течение 24-48 ч.

Рис. 32.1. Схема количественного определения энтеробактерий

В случае роста, для подтверждения наличия энтеробактерий делают пересев петлей на плотную среду (агар Мосселя, среда № 4) и инкубируют чашки Петри в течение 18-24 ч. Появление на плотной среде колоний грамотрицательных палочек является положительным тестом, отсутствие роста этих колоний – отрицательным тестом. Наиболее вероятное количество энтеробактерий и других грамотрицательных микроорганизмов в 1 г или 1 мл образца определяют по табл. 32.6.

Таблица 32.6

Определение количества энтеробактерий и

Соответствующее количество испытуемого образца			Наиболее вероятное количество бактерий в 1 г образца
0,1 г	0,01 г	0,001 г
1 мл гомогената 1	1 мл гомогената 1 в разведении 1:10	1 мл гомогената 1 в разведении 1:100
+	+	+	Более 103
+	+	–	От 102 до 103
+	–	–	От 101 до 102
–	–	–	Менее 101

других грамотрицательных бактерий в образце

Обозначения: (+) – положительный тест

(–) – отрицательный тест