Определение количества мафАнМ.

Отбор проб. Исследуемую рыбу и крупные экземпляры нерыбных объектов морского промысла отбирают в количестве не более 3 шт. От каждого экземпляра из нескольких мест вырезают кусочки с кожей и мышцами, не затрагивая кишечник (за исключением отбора проб на определение наличия парагемолитических вибрионов), площадью около 4 см2, толщиной 4–5 мм. Эти кусочки помещают во взвешенный стакан; вновь взвешивают и по разности весов устанавливают массу отобранной пробы. Пробу измельчают и заливают стерильной жидкостью так, чтобы получить конечное разведение 1 : 10.

Подготовленную пробу тщательно перемешивают, взвесь отстаивают в течение 5 мин. Надосадочную жидкость используют для приготовления последующих разведений. Для этого 1 мл из исходного разведения (10–1) переносят в пробирку с 9 мл стерильного раствора для дальнейшего разведения, не прикасаясь к поверхности жидкости в этой пробирке, перемешивают новой стерильной пипеткой, и содержимое в количестве 1 мл переносят в следующую пробирку. В результате исследуемый продукт оказывается разведенным в 10, 100 и более раз. Степень разведения навески для высева на плотные питательные среды выбирают так, чтобы общее количество колоний, выросших на чашке, колебалось в пределах от 30 до 300.

Посев проводят по следующей методике: из двух последних разведений в чашки Петри вносят по 1 мл разведенного материала, заливают 15 мл расплавленного и охлажденного до температуры +50_С агара, перемешивают (из каждого разведения делают одновременно посев в 2–3 чашки). После застывания МПА чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат при температуре +30_С на 72 ч.

В некоторых случаях допускается предварительный учет колоний через 48 ч с последующим подсчетом через 72 ч. Количество микроорганизмов в 1 г (1 мл) продукта определяют по формуле

К = а*b*с

где K — количество микроорганизмов в 1 г, КОЕ/г; а — среднее арифметическое число колоний в чашке; b — степень разведения; с — масса, объем, поверхность (г, мл).

Индикация бактерий группы кишечных палочек.

Метод основан на способности бактерий группы кишечных палочек сбраживать в среде Кесслера лактозу с образованием кислоты и газа. Бактерии группы кишечных палочек (БГКП) — это аэробные и факультативно_анаэробные, грамотрицательные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре +37_С в течение 24 ч (бродильная проба), не обладающие окислительной способностью.

Для индикации БГКП в исследуемом материале 10 г продукта и 10 мл исходного разведения продукта помещают во флаконы со 100 и 50 мл питательной среды соответственно. По 1 и 0,1 мл и так далее исходного разведения продукта вносят в про_

бирки с 5 мл питательной среды.

По действующим нормативам обязательно засевается то количество продукта, в котором нормируется отсутствие бактерий группы кишечных палочек. Допускается засевать 1 г продукта в 10 мл питательной среды.

Для индикации БГКП в смывной жидкости с оборудования и рук тампоны или марлевые салфетки погружают в пробирки с 5 мл среды Кесслера. Посевы помещают в термостат при температуре +37_С на 24 ч, затем из пробирок и колб с признаками роста бактерий делают посев на плотную дифференциальную среду Эндо.

Через сутки после инкубирования в термостате проводят учет. При наличии на среде Эндо колоний (розовых, красных с металлическим блеском и без него), характерных для БГКП, проводят их изучение. Из изолированных колоний готовят препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии грамотрицательных палочек без спор делают заключение о присутствии БГКП. Для уточнения при обнаружении грамотрицательных, не образующих спор палочек надо провести оксидазный тест: часть колонии со среды Эндо наносят штрихом на фильтровальную бумагу, предварительно смоченную реактивом для определения цитохромоксидазы. Оксидазный тест у кишечной палочки отрицательный, и индикаторная бумага не должна изменять цвет, если бумага синеет — оксидазный тест положительный.