Определение подгрупп а1 и а2

Такое определение может быть произведено только после того, как определена основная группа (А или АВ). Правда, иногда по слабости и медленности основной реакции можно предположить о наличии подгруппы А₂ или А₂В, но все же надежных методов для быстрого определения подгруппы «сразу» нет. Чтобы определить подгруппу, надо иметь специальную сыворотку. Наилучший способ ее получения - это абсорбирование сыворотки В эритроцитами подгруппы А₂, которые поглощают излишек а-агглютинина, необходимый для агглютинирования эритроцитов А₂. После центрифугирования сыворотка отсасывается и служит для определения подгрупп. Такая сыворотка называется анти-А₁, так как агглютинирует только эритроциты A₁. Отсутствие агглютинации означает, что кровь группы А или АВ принадлежит к подгруппе А₂ или соответственно А₂В. Этот способ следует считать наилучшим, но для него необходимо иметь точно установленного и проверенного донора подгруппы А₂.

Инструкция

работы с картами «DiaClon ABO/D+reverse grouping»

(Карты для определения группы крови по системам аво перекрестной реакцией и резус-фактора), каталожный номер 001234 с моноклональными антителами

В данных картах ДиаМед находится 6 микропробирок, заполненных гелем.

Состав:

- в первых трех микропробирках «А», «В» и «D» содержится гель с антисыворотками и они предназначены для определения антигенов А, В, и резус-фактора (D).

- ctl – контроль качества карт (всегда должен быть отрицательный, т.е. без агглютинации)

- в последних двух микропробирках «А₁» и «В» содержится нейтральный гель, в которые необходимо добавить стандартные эритроциты.

Предназначены для перекрестной реакции – определения естественных антител анти-А и анти-В.

Рис. 1 Карта ДиаМед

Работа с картами.

1. Включить центрифугу.

2. Подготовить отцентрифугированную кровь, без сгустка.

3. Промаркировать карту (ФИО пациента или номер пробирки с кровью).

4. Снять фольгу со всех микропробирок.

5. Пробы вносить пипеткой на край пробирки, не затрагивая гель.

6. Внести по 50 мкл (по 1 капле из пипетки фо флакончиках) стандартных эритроцитов (каталожный номер 003624) из флакончиков анти-А и анти-В в последние две микропробирки.

7. Внести по 50 мкл сыворотки или плазмы в эти же микропробирки.

8. Внести в простую пробирку на 5-10 мл (центрифужная, любая стеклянная, пластиковая) 500 мкл раствора ID-Diluent (каталожный номер 009260) и добавить 50 мкл цельной крови (или 25 мкл эритроцитарной массы). Это рабочая суспензия.

9. Рабочую суспензию по 12,5 мкл внести в первые 4 микропробирки.

10. Карты поставить в центрифугу, уравновесить, если есть необходимость (например, одна карта), нажать на «старт».

11. Центрифугирование длится 10 мин и после автоматического отключения необходимо оценить степень агглютинации в геле.

Интерпретация результатов.

При наличии антигена А, В, D на эритроцитах на поверхности геля образуются агглютинаты, т.к. не проходят через гель из-за большого размера (положительный результат).

При отсутствии антигена в исследуемом образце эритроциты не образуют агглютинатов с антисывороткой, при центрифугировании легко проходят через гель и оседают на дне.

На рис. 1 в нижних ячейках обозначена степень агглютинации от 1 до 4. В основном данные ячейки заполняются «+» или «-»в связи с тем, что степень агглютинации в клинике не важна.

I группа	II группа	II группа	IV группа
Отсутствуют антигены А и В, присутствуют естественные антитела анти-А и анти-В. В первых двух микропробирких «А» и «В» агглютинаты на дне микропробирки. В последних двух микропробирках анти А1 и анти В агглютинаты остаются на поверхности геля	Есть антиген А, отсутствует антиген В, естественные антитела анти-А отсутствую, анти-В присутствуют. В микропробирке «А» агглютинаты наверху, в «В» - внизу. В последних анти А1 – внизу, анти-В - наверху	Есть антиген В, отсутствует антиген А, естественные антитела анти-А присутствую, анти-В отсутствуют. В микропробирке «А» агглютинаты внизу, в «В» - наверху. В последних анти А1 – наверху, анти-В - внизу	Есть антиген А и антиген В, естественные антитела анти-А и анти-В отсутствуют. В первых микропробирках «А» и «В» агглютинаты наверху. В последних микропробирках анти А1 и анти-В - агглютинаты внизу

А В D ctl A₁ B А В D ctl A₁ B А В D ctl A₁ B А В D ctl A₁ B

- - + - + + -+ - + - - + - + + - + - + + + - - -

Рис. 1. Степень агглютинации