Тема 3. Физиология микроорганизмов

Лабораторная работа № 3: «Качественный анализ микрофлоры пищевых продуктов всех групп»

Знание состава микрофлоры изучаемого продукта позволяет выявить их возможное влияние на его качество в процессе хранения, транспортировки, реализации и разработать способы борьбы с м.о. – возбудителями порчи.

Для выявления систематического положения м.о. (семейство, род, вид) и изучения их свойств необходимо выделить их в виде чистых культур, а затем идентифицировать их по справочникам-определителям.

Чистой культурой считается масса клеток, полученных как потомство одной клетки.

Чистые культуры используются в технологии производства многих пищевых продуктов и знание их свойств дает возможность увеличения выхода продукта.

Существуют несколько способов выделения чистых культур, они отличаются по приемам изолирования отдельных клеток.

1. Разбавление смеси культур до степени, когда в 1капле содержится 1 клетка. Посев 1 капли даст возможность вырасти потомство из 1 клетки.

2. Метод пластинчатых культур Коха (чашечный метод или метод истощающего посева).

3.1 Определение состава микрофлоры исследуемого объекта путем выделения чистых культур микроорганизмов

Метод пластинчатых культур Коха (метод истощающего посева).

Используется плотная питательная среда (агаризованная). Среда предварительно расплавляется и разливается по чашкам Петри, а затем в нее вносятся последовательно убывающие количества исследуемого объекта с находящимися в нем микроорганизмами.

При последующим выращивании посевов клетки размножаются и образуют колонии (каждая клетка образует отдельную колонию), каждая из которых является чистой культурой исходной клетки. Из колонии м.о. высеваются в пробирки со стерильной питательной средой, что и является завершающим этапом выделения чистых культур.

Идентификация – определение систематического положения м.о., выделенных в чистые культуры

Для идентификации необходимо изучить морфологические, культуральные и физиологические признаки.

Идентификация плесеней проводиться по морфологическим и физиологическим признакам.

Морфологические признаки изучаются под микроскопом в препаратах живых и мертвых м.о.

Культуральные признаки устанавливаются по характеру роста культуры изучаемого м.о. на плотных и жидких питательных средах.

Физиологические признаки, обусловленные наличием ферментов в клетках, устанавливаются при посеве в специальные среды, в состав которых входят те вещества, воздействие на которые выявляются у изучаемого микроба.

По определителю («ключу») устанавливают видовое название м.о. исходя из полученных морфологических, культуральных и физиологических признаков.

Выделение чистой культуры бактерий, преобладающих в исследуемом объекте и изучении их свойств

(Задание выполняется на четырех занятиях)

Занятие первое.

Посев микроорганизмов для выделения чистых культур по методу Коха.

План занятия:

1. Ознакомиться с условиями выращивания микроорганизмов и приготовлением питательных сред.

2. Ознакомиться с методами стерилизации питательных сред, посуды и других объектов.

3. Уяснить понятие «чистая культура» и ознакомиться с методами ее выделения.

4. Провести посев микроорганизмов с продукта (или с другого объекта) на МПА в чашки Петри.

Методические указания:

1. Исследуемый материал жидкой и полужидкой консистенции берется для посева в натуральном виде. Если он твердый, то некоторое количество его (натурального или растительного) переносится в колбу со стерильной водой и взбалтывается. Для посева используется полученный смыв микробов, или «болтушка». Количество исходного материала и воды можно взять произвольно.

2. При посеве необходимо соблюдать правила асептики, т.е. правила предосторожности против заражения исследуемого материала, стерильной питательной среды и чашек Петри (изнутри) посторонними микроорганизмами (из воздуха, с рук, соседних предметов).