Получение элективной культуры маслянокислых бактерий.

Маслянокислые бактерии вызывают процесс масляно-кислого брожения, который состоит в расщеплении сахара с образованием маслянойкислоты, углекислого газа и водорода.

Маслянокислые бактерии широко распространены в природе, имеют форму довольно длинных палочек, а спороносные клетки имеют форму веретена или булавовидную форму. Они являются строгими анаэробами, споры выдерживают нагревание при 100°С несколько минут, оптимальной температурой их развития 35-40°С. Отличительной характеристикой является наличие в клетках масляно-кислых бактерий крахмалоподобного вещества гранулезы, что служит для распознавания этих бактерий.

Получение элективной культуры масляно-кислых бактерий основано на высокой степени анаэробности, термостойкости их спор, способности развиваться при повышенной температуре и неблагоприятном действии вырабатываемой ими масляной кислоты на многие другие бактерии.

План занятия.

1. Ознакомиться с морфологическими и физиологическими признаками маслянокислых бактерий.

2. Поставить опыт для получения элективной культуры маслянокислых микроорганизмов.

3. Выявить накопление исследуемых микроорганизмов.

4. Промикроскопировать развившиеся бактерии.

Методические указания.

Занятие первое.

1. Нарезать мелкими кусочками сырой неочищенный картофель и насыпать в широкую высокую пробирку на 1/3 объема, добавить водопроводной воды на 2/3 объема. В пробирку добавить щепотку мела для нейтрализации масляной кислоты, выделяющейся при маслянокислом брожении.

2. На водяной бане при 80°С прогреть пробирки в течение 10-15 мин., при этом уничтожаются вегетативные клетки и нетермостойкие споры, а также удаляется воздух из среды.

3. Пробирку с закрытой пробкой поставить в термостат при 35°С.

Занятие второе.

4. По газообразованию (картофель всплывает вверх) определить наличие брожения в пробирке.

5. Наличие масляной кислоты установить по запаху (резкий запах сыра) и качественной реакцией. К 2 см 5 %-ного хлорного железа добавить 5 см сброженной жидкости и нагреть. Образующееся маслянокислое железо имеет коричневое окрашивание.

6. Провести микроскопирование сброженной среды, приготовив препараты «раздавленная капля» и окрашенный «простым» способом. В «раздавленной капле» установить подвижность микроорганизмов, в окрашенной «простым» способом - определить форму клеток, наличие спор и их расположение.

7. Для распознавания маслянокислых бактерий по наличию гранулезы под покровное стекло в препарате «раздавленная капля» выпустить 1-2 капли раствора Люголя. Под действием йода гранулеза окрасится в темно-синий цвет.

8. Сравнить морфологически признаки преобладающих в препарате бактерий с признаками маслянокислых бактерий. Отметить наличие других микроорганизмов.

9. Зарисовать спорообразующие маслянокислые бактерии.

3.3. Выделение элективной культуры группы целлюлозоразлагающих бактерий.

Целлюлоза – полисахарид, главный компонент клеточных стенок высших растений и водорослей, состоящий из цепочек β-D-глюкозы, объединенных в волокна таким образом, что гидрофильные группы защищены от внешних воздействий. Кроме того, волокна окружены воском и пектином, что придает им механическую прочность и химическую устойчивость.

Разлагать целлюлозу (клетчатку) в анаэробных и аэробных условиях способны бактерии, относящиеся к разным таксономическим группам: род Clostridium, ряд актиномицетов, миксобактерии , род Pseudomonas, род Cellulomonas, Ruminicocuss, Bacteroides, Butyrivibrio. Объединяющим эти организмы является способность синтезировать ферменты, расщепляющие целлюлозу.

Ферментативное разложение целлюлозы осуществляется с помощью целлюлазного комплекса, который может выделяться в окружающую среду или оставаться связанным с клеточной стеной (целлюлосомы).

Целлюлозоразлагающие бактерии играют огромную роль в природе, т.к. им мы обязаны разложением клетчатки, составляющей основную массу всех синтезируемых природных соединений.

План занятия.

1. Ознакомление с целлюлозоразлагающими микроорганизмами.

2. Постановка опыта по разложению целлюлозы.

3. Микроскопирование целлюлозоразлагающих микроорганизмов и их описание.