Лабораторна робота № 19 Кількісне визначення глюкози в сечі за кольоровою реакцією з о-толуїдиновим реактивом

Мета: Опанувати метод кількісного визначення глюкози в сечі та за отриманими даними зробити клініко-діагностичний висновок (стор. 110).

Принцип методу: Глюкоза при нагріванні з о-толуїдиновим реактивом у розчині оцтової кислоти дає зелене забарвлення, інтенсивність якого пропорційна концентрації глюкози.

Прилади та матеріали: колориметр фотоелектричний концентраційний КФК-2МП, піпетки градуйовані на 2 мл, 1 мл, 0,1 мл, штатив для пробірок та піпеток, досліджувана сеча, калібратор глюкози (27,75 ммоль/л), о-толуїдиновий реактив (склад: о-толуїдин – 6 г, тіосечовина – 0,15 г, оцтова кислота – до 100 мл).

Хід визначення

Спочатку проводять якісну пробу на наявність глюкози (див. лабораторну роботу № 17 – реакція Тромера). У ви­падку позитивної якісної проби на глюкозу, перед проведенням досліду сечу розводять фізіологічним розчином в 2 – 10 разів. Ступінь розведення вказує викладач. Аналіз проводять відповідно до таблиці 19.

Всі приготовані розчини нагрівають на киплячій водяній бані 8 хвилин. Охолоджують під водопровідною водою. Фотометрують калібрувальну та досліджувані проби проти холостої проби за довжини хвилі 590 – 650 нм у кюветі товщиною 5 мм (розд. 2.1.2). Результат множать на ступінь розведення.

Розрахунок кількості глюкози в сечі виконують за формулою: ,

де – концентрація глюкози в досліджуваній пробі (ммоль/л); А – ступінь розведення сечі, Е_ст. – екстинкція калібрувальної проби; Е_досл. – екстинкція досліджуваної проби; – концентрація глюкози в калібрувальному розчині (27,75 ммоль/л).

Таблиця 19

Вміст робочих розчинів

Інгредієнти, мл	Проби
	Дослід-жувана	Каліб- рувальна	Холоста
Калібратор глюкози	–	0,03	–
Фізіологічний розчин	–	–	0,03
Розведена сеча	0,03	–	–
о-толуїдиновий реактив	1,30	1,30	1,30

Норма глюкози в сечі: не більше 1,11 ммоль/л.

Примітки:

1. При низькому вмісті глюкози готують калібрувальні розчини глюкози з концентраціями 5,55 ммоль/л і 16,65 ммоль/л. Для цього наявний у наборі калібратор розводять відповідною кількістю дистильованої води.

2. Наявність білка в сечі на кількісне визначення глюкози не впливає.

Лабораторна робота № 20 Кількісне визначення глюкози в сечі поляриметричним методом

Мета: Визначити вміст глюкози в сечі поляриметричним методом та зробити клініко-діагностичний висновок (стор. 110).

Теоретична частина: Глюкоза має властивість, як оптично-активна речовина, обертати площину поляризації вправо. За кутом обертання поляризованого проміню мож­ливо визначити кількість глюкози у сечі.

Прилади та матеріали: поляриметр, піпетки, фільтрувальний папір, досліджувана сеча.

Хід визначення

Сеча повинна бути прозорою, кислої реакції, звільнена від білка. Сечу підкислюють оцтовою кислотою, кип'ятять, охолоджують і фільтрують.

Встановлюють нульове положення у поляриметрі (розділ 2.3.). Трубку приладу заповнюють відфільтрованою сечею (без пухирів повітря), накривають шліфувальним скельцем, загвинчують щільно, насухо витирають і вміщують в поляриметр. При зміні кольору або інтенсивності освітлення частини поля зору обертанням диска зрівнюють поля і визначають кут відхилення поляризованого променю, що виражається в градусах шкали приладу. За довжини трубки 18,94 см кут відхилення в 1⁰ відповідає концентрації з масовою часткою глюкози 1 %, якщо довжина трубки 9,47 см, то отримані результати помножуються на 2, якщо довжина 4,73 см, то множать на 4.

Після закінчення роботи трубку і скло промивають дистильованою водою і висушують. Водопровідною водою промивати не можна, тому що утвориться каламутний наліт.

Користуючись цим методом, необхідно дотримуватися наступних рекомендацій:

1. Після заповнення трубки виміри проводять через 2 – 3 хвилини, тому що коливання часток рідини заважає дослідженню.

2. Не варто лишати на тривалий час заповнену сечею трубку, тому що при цьому утвориться помутніння.

Норма глюкози в сечі: 0 – 0,02 %.