2.2.2.2. Визначення швидкості дозрівання та добової продукції ретикулоцитів

Принцип методу. Якщо кількість ретикулоцитів у периферичній крові певний час не змінюється, можна вважати, що кількість ретикулоцитів, які надходять з кісткового мозку за одиницю часу, дорівнює кількості ретикулоцитів, які дозріли за той самий час.

Обладнання. Вата, скарифікатор, штатив з пробірками, імерсійне масло, мікроскоп, предметні та шліфовані скельця, віконечко Фоніо, рукавиці.

Реактиви

1. Спирт – 70 º розчин.

2. Дезрозчин.

3. Барвники. Залежно від того, яким методом будуть фарбуватися ретикулоцити, можна використовувати один з барвників, що використовуються для підрахунку ретикулоцитів.

Хід роботи

У силіконізованій пробірці змішують 0,1 мл цільної крові зі стерильним 3,8 % розчином натрій цитрату у співвідношенні 4:1. Суміш інкубують при +37 С протягом чотирьох годин. Ретикулоцити зафарбовують або в пробірці, або безпосередньо на предметному склі.

Кількість ретикулоцитів підраховують як до, так і після інкубації. Паралельно проводять підрахунок кількості еритроцитів у камері Горяєва.

Добову продукцію ретикулоцитів визначають за формулою:

ПР = (К – Д) × E × 6,

де ПР – продукція ретикулоцитів, у тис.; К – кількість ретикулоцитів до інкубації, %; Д – кількість ретикулоцитів після інкубації, %; Е – кількість еритроцитів, підрахованих у камері Горяєва, у тис.; 6 – коефіцієнт поправки на добу.

Швидкість дозрівання ретикулоцитів визначають за формулою:

д е ШдР – швидкість дозрівання ретикулоцитів, %; К – кількість ретикулоцитів до інкубації, %; Д – кількість ретикулоцитів після інкубації, %; а та в – кількість ретикулоцитів четвертої та п’ятої стадій дозрівання (рис. 2.22) до інкубації.

Рис. 2.22. Розподіл ретикулоцитів за стадіями зрілості (зліва направо: І–V стадії), за Гельмейером

Захворювання та стани, що супроводжуються зміною швидкості дозрівання та добової продукції ретикулоцитів:

Збільшення	Зменшення
Гемолітична анемія (до 300 %)	Апластичні і гіпопластичні анемії
Гостра нестача кисню (гіпоксія)	Променева хвороба та променева терапія
На 3–5 день після крововтрати (ретикулоцитарний криз), кількість ретикулоцитів підвищуватися в 3–6 разів	Аутоімунні захворювання системи кровотворення
В12-дефіцитні анемії на 5–9 день після початку лікування (ретикулоцитарний криз), кількість ретикулоцитів може підвищуватися до 200 %	Метастази новоутворень у кістки
На 3–12 день лікування препаратами заліза при залізодефіцитній анемії	Мікседема
Ретикулоцитарний криз внаслідок лікування препаратами фолієвої кислоти	Захворювання нирок
Малярія	Алкоголізм
Інші гемолітичні захворювання (поліцитемія, метастази раку в кістковий мозок)	Неліковані В12-дефіцитні анемії, фолієво дефіцитні анемії, залізодефіцитні анемії