Искусственная вагина для получения спермы от хряка По виЖу

Состоит:

1. резиновый цилиндр (укороченный или с вкладышем)

2. патрубок с отверстием для заливания воды

3. резиновая камера

4. два резиновых кольца (по одному с каждой стороны)

5. эбонитовый краник с резиновой муфтой (краника два соединенных между собой резиновой трубкой, первый открыт, второй закрыт)

6. резиновая муфта для закрепления спермоприемника с отверстием (для выхода воздуха по мере наполнения спермоприемника)

7. спермоприемник (емкость объемом не более 500 мл)

8. пластмассовый фильтр (марля в 4 слоя)

Искусственная вагина для жеребца образца 1952 года.

Состоит:

1. алюминиевый цилиндр

а) патрубок

б) пробка с клапаном для выхода излишек воды

в) скоба (ручка)

2. резиновая муфта

3. резиновая камера

4. резиновые кольца (3 больших, 2 малых)

5. спермоприемник

Порядок сборки искусственной вагины

1. осмотр деталей на целосность.

2. присоединение резиновой камеры к корпусу:

а) ровно без перекосов

б) не сильно натягивать

в) гладкой поверхностью во внутрь

г) диаметр камеры должен быть одинаков на всем протяжении вагины

3. укрепление резиновой камеры кольцами (первое кольцо крепется отступя 0,5 см от края вагины)

4. отрегулировать и присоединить краник (должен быть герметичен, легко вращаться)

В таком виде искусственная вагина храниться в шкафу до применения или до тех пор, пока какая-нибудь деталь не выйдет из строя. Для каждого производителя должно быть две вагины, для получения спермы готовят обе.

Подготовка искусственной вагины к получению спермы

1. вымыт в горячем содовом растворе

2. ополоснуть в проточной воде

3. стерелизация или обеззараживание:

Кипячение 15-20 мин, автоклавирование 0,3-0,5 Ат, 105⁰С, 20 мин.

4. заполняют полость искусственной вагины водой. К моменту получения спермы температура вагины должна быть 40-41⁰

5. смазывание поверхности резиновой камеры стерильным вазелином, задняя треть камеры не смазывается.

6. присоединение подготовленного спермоприемника (кипячение, автоклавирование, спиртом – для жеребца).

В холодное время года в межстенное пространство спермоприемника наливается вода температурой 25-30⁰С, для того чтобы предотвратить температурный шок. Перед присоединением спермоприемник ополаскивают изотоническим раствором.

7. нагнетание воздуха. Давление в искусственной вагине должно быть 40-60 мм 144Т ст. воздух нагнетают качком, компрессором, шарами ричартсона. После нагнетания воздуха камера должна смыкаться, но не выступать за края вагины. В искусственную вагину для жеребца воздух не нагнетают.

8. измерение температуры. Перед получением спермы температура в вагине должна быть в пределах 40-42⁰С.

Семинар № 10

Тема «\Оценка качества спермы»

Цель занятия: изучить методы оценки качества спермы от сельскохозяйственных животных, овладеть методикой получения спермы.

Материалы и оборудование: разобранные искусственные вагины всех видов сельскохозяйственных животных, спермоприемники и утеплители к ним, растворы натрия гидрокарбоната, натрия хлорида, термометры, вазелин стерильный, водяная баня, шары Ричардсона, мерный цилиндр, микроскоп, красители, предметные и покровные стекла, сливные чаши, спирт, дистиллированная вода.

1. Визуальная оценка качества спермы

а) Объем эякулята.

Определяют сразу после получения спермы у быка и барана. После фильтрации спермы с целью освобождения секрета придаточных половых желез у хряка – куперовых, у жеребца – пузырьковидной.

У жеребца – 50-100 мл до 600 мл.

У хряка – 200-400 мл до 1 литра.

У быка – 4-5 мл до 15 мл.

У барана – 1-2 мл

У козла – до 3,5 мл.

У кобеля – от 2 до 18 мл.

б) Цвет спермы.

Сперму осматривают при хорошем освещении. У быка, барана, козла – белого цвета с желтоватым оттенком, хряка, жеребца – молочно-белая с сероватым оттенком.

в) Запах спермы.

У здорового производителя сперма обычно имеет слабо специфический запах или без запаха. У барана допускается запах жиропота, у быка – парного молока.

г) Консистенция.

Зависит главным образом от насыщенности ее спермиями. У барана – сметанообразная, у быка – сливкообразная или похожа на молоко, сперма хряка, жеребца – водянистая.

д) Наличие примеси.

Не допускается к использованию сперма с механическим мусором, с примесью крови – красноватого оттенка, с примесью гноя – зеленоватого оттенка, с примесью мочи – желтоватого оттенка, при наличии белых хлопьев – при воспалении придаточных половых желез.

2. Микроскопическая оценка качества спермы.

а) Оценка по густоте и подвижности.

Обязательное условие при оценки это соблюдение температурного режима. Температура столика Морозова к моменту получения спермы должна быть 45⁰С. В зависимости от количества спермиев в 1 мл спермы – сперма делится на – густую (Г), среднюю (С), редкую (Р).

Техника оценки спермы по густоте. Капля спермы наносится на предметное стекло и покрывается покровным. Рассматривается под микроскопом с увеличением 120.

Если пространство между спермиями практически отсутствует, сперма оценивается как густая. В густой сперме содержится свыше 1 млрд спермиев в 1 мл спермы.

Если в поле зрения микроскопа имеются промежутки меньше длины спермиев – средняя (концентрация от 200млн до 1 млрд в 1 мл).

Если промежутки между спермиями больше длины спермиев – редкая (соответствует концентрации менее 200млн в 1 мл).

Отсутствие спермиев в поле зрения - аспермия (А). Наличие одиночных спермиев – олигоспермия (О).

К использованию допускается сперма быков, хряков, жеребцов густая и средняя, баранов только густая.

Подвижность спермиев оценивается по 10 бальной шкале глазомерно.

Подвижность зависит от количества спермиев имеющих прямолинейно – поступательное движение.

Если из 10 наблюдаемых в поле зрения спермиев все 10 имеют прямолинейно – поступательное движение, сперма по активности оценивается в 10 баллов или 100%. Если 9 из 10 – то 9 баллов или 90%

Сперма содержащая спермии с манежными движениями обозначается – М, с колебательными – К, с неподвижными спермиями – Н – некроспермия. Если менее 10% спермиев имеет прямолинейно – поступательное движение сперма обозначается – Е – единичной.

К использованию допускается сперма баранов, быков активностью 8 баллов, хряков 7 баллов, жеребцов 6 баллов.

б) Определение % живых и мертвых спермиев.

Принцип основан на том, что при смешивании спермы с 5% раствором эозина приготовленном на 3% растворе цитрата натрия, живые спермии не окрашиваются, а мертвые и ослабленные окрашиваются в розовый цвет в связи с нарушением проницаемости липопротеиновой оболочки.

На предметное стекло наносят каплю спермы и каплю раствора эозина. Смешивают капли и делают тонкий мазок. После просушивания просматривают под микроскопом с увеличением в 300-400 раз и подсчитывают подрят 500спермиев. Одновременно фиксируя живых спермиев. Процент живых спермиев вычисляется по формуле:

П = Ж х 100

500

П – процент живых спермиев

Ж – число живых

100 – коэффициент перевода в проценты

500 – общее число сосчитанных спермиев.

Для жеребцов методика аналогична. Только используют краситель кангурет (на 100мл 7 % раствора глюкозы 1г красителя).

в) Определение патологических форм.

Подсчет патологических форм спермиев проводят для того, чтобы определить, нет ли у самца заболеваний половых органов и, в первую очередь, заболеваний семенников и их придатков.

Полученную сперму разбавляют 0,9% раствором хлорида натрия. Сперму баранов в 20-30раз, быков – в 10-15 раз, густую сперму хряка и жеребца в 2-3 раза. На предметное стекло наносится капля спермы и делается тонкий мазок, после просушивания мазок фиксируют 1-2 мин 96% спиртом и окрашивают через фильтровальную бумагу любым из красителей (фуксин, миозин, метиленовая синь). После чего мазок промывают водой и сушат на воздухе. Просохший мазок смотрят под микроскопом, под увеличением в 600 раз, подсчитывая не менее 500 спермиев фиксируя их качество, а затем вычисляют процентное содержание патологических форм. К числу патформ относят: гигантских, карликовых, с гигантской головкой, закрученными хвостами, двумя головками, и тд.

К использованию допускается сперма барана содержащая не более 14. хряка 20, жеребца 25, быка 18% патологических спермиев.

г) Оценка спермы по редукции метиленового синего.

Метод основан на использовании спермиями кислорода синьки, то есть при недостатке кислорода спермии способны обесцвечивать метиленовый синий.

На предметное стекло наносят каплю, спермы и каплю метиленовой синьки. Стеклянной трубочкой, с диаметром 0,8-1 мм и высотой 4-5 см, смешивают и набирают столбик высотой 2 см, наблюдают на фоне белого листа бумаги, фиксируя время обесцвечивания синьки. Чем интенсивней поглощается кислород, тем скорее наступает обесцвечивание синьки, тем лучше качество спермы.

Качество спермы	Бык	Баран
Хорошее	5-10 мин	3-7 мин
Среднее	11-30 мин	8-12 мин
Плохое	31 мин и выше	13 мин и выше

д) Определение концентрации спермы при помощи оптических стандартов.

Стандарты представляют собой стеклянные запаянные пробирки одинакового диаметра имитирующие сперму хряка и жеребца разной концентрации 10, 50, 100, 200, 300, 500 спермиев в 1 мл. Сперму наливают в пустую пробирку такого же диаметра, и предварительно встряхнув стандарты подбирают подходящую концентрацию. Она может быть промежуточной между двумя стандартами.

е) Подсчет в счетной камере Горяева.

В эритроцитарный смеситель набирают сперму быка до деления 1 и сперму барана до деления 0,5. Сперму хряка и жеребца набирают в лейкоцитарный смеситель до метки 0,5. После этого в них набирают 3% раствор хлорида натрия до деления 101 в эритроцитарный смеситель и до деления 11 в лейкоцитарный смеситель. Встряхиваем 2-3 мин, затем удаляем первые 3-4 капли, заправляем обе сетки камеры Горяева. Подсчет ведут в 5 больших или в 80 маленьких квадратах расположенных по диаганале. Концентрация спермиев выраженной в млрд/мл вычисляется по формуле:

быка барана хряка жеребца

С = n/200 C = n/100 C = n/1000, где

n – число подсчитанных спермиев.