Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Mikra_bilety.docx
Скачиваний:
1
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
495 Кб
Скачать
☆

2) Реакция преципитации, кольцепреципитации. Преципитация в геле по Оухтерлони. Иммуноэлектрофорез.

Реакция преципитации - это осаждение растворимых антигенов (преиципитиногенов) специфическими антителами сыворотки в присутствии электролита (0.85% раствора NaCl).

Механизм реакции заключается в том, что полидетерминантные антигены, представляющие собой прозрачный коллоидный раствор, и двухвалентные антитела (преципитирующие антитела - IgG) образуют комплексы по типу решетки, в присутствии электролита снижается заряд, уменьшается растворимость и образовавшийся преципитат выпадает в осадок, видимый невооруженным взглядом.

Реакцию преципитации применяют для выявления антигенов по известной иммунной преципитирующей сыворотке или антител с использованием известных антигоенов-диагностикумов. На практике: преципитация в жидкой среде (кольцепреципитация, флокулляция) и полужидком геле (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлни, метод радиальной диффузии по Манчини, иммуноэлектрофорез).

Реакция кольцепреципитации. Проводят в жидкой среде с прозрачными растворами: диагностической преципитирующей сывороткой с высоким титром антител и коллоидным раствором антигена. При соответствии антигена и антитела на границе двух соединяемых растворов образуется нерастворимые преципитат в виде мутного кольца.

Методика. В узкие пробирки (диаметром не более 0.5 см) наливают 0.2-0.3 мл преципитирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20, затем в пробирки осторожно наливают 0.1-0.2 мл исследуемого преципитиногена (если нужен титр -берут в разных разведениях). Учет реакции через 1-5 мин. Контроли: положительный - к соответствующей сыворотке добавляют известный антиген -> мутное кольцо; отрицательный - содержимое пробирок должно оставаться прозрачным вследствие отсутствия специфической системы АГ-АТ.

Положительная реакция - непрозрачный преципитат в виде кольца.

Реакция нейтрализации в геле по Оухтерлони - метод двойной иммунодиффузии.

Методика. На поверхность плотной элективной среды помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической сывороткой, содержащей 500 МЕ/мл. По обеим сторонам от бумажной полоски засевают испытуемые штаммы бляшками диаметром 0.8-1см, там же проводят посев контрольный: токсигенной и нетоксигенной культур.

Результат учитывают через 24-48 часов инкубации при 37С. Если культура токсигенная, то между полоской бумаги и растущей культуры образуются белые линии преципитации в результате встречной диффузии антител-антитоксинов и продуцируемого культурой токсина. Образующиеся дугообразные линии должны совпадать с линией преципитата контрольной токсигенной культуры. У нетоксигенной культуры такие линии отсутствуют.

Метод иммуноэлетрофореза. Высокочувствительный специфический метод, позволяющий выявить и различить вещества-антигены, содержащиеся в многокомпонентной системе в низких концентрациях. Широко применяется как качественный метод для анализа белков в биологических жидкостях, а также для контроля чистоты биопрепаратов. На практике применяют комбинации: радиоиммуноэлектрофорез, иммуноблотинг и т.п. Электрофорез+преципитация в геле.

Методика. Гель 1-2%, выливают на стекло, застывает - > вырезают лунку для антигенов и продольные канавки для преципитирующей сыворотки. В лунку вносят антигены, помещают в электрофоретическу. камеру, подключают электроды. При электрофорезе отдельные компоненты (антигены) распределяются по оси миграфии в различных зонах.

В боковые канавки вносят преципитирующую сыворотку и проводят иммунодиффузию в течение 12-24 часов. Антитела и разделенные электрофорезом антигены диффундируют навстречу друг другу и образуют дуги преципитации. По их кривизне, числе и положению судят о составе исследуемой смеси антигенов.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]