Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Mikra_bilety.docx
Скачиваний:
1
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
495 Кб
Скачать
☆

In vivo.

Применяются два варианта постановки этой реакции. 1 - одну и ту же дозу сыворотки и различные дозы вируса (смотрят, в каком разведении вируса наступает нейтрализаующее действие сыворотки). 2 - одну и ту же дозу вируса и различные дозы сывороток (выявляет нарастание титра антител). ПОследовательность проведения реакции:

  • предварительный контакт вируссодержащего материала с соответствующей иммунной сывороткой;

  • введение смеси в чувствительную биологическую систему;

  • учет реакции.

Сыворотки получают от больных людей или берут диагностические сыворотки от иммунизированных животных. Антигены (вируссодержащие смеси) получают из материала от больных инфекцией или от зараженных органов. Биологический объект выбирают с учетом чувствительности.

Билет 34

1) Ферменты бактерий, их характеристика.

В основе всех метаболических реакций в бактериальной клетке лежит деятельность ферментов, которые принадлежат к 6 клас­сам:

  • оксиредуктазы (оксиление и восстановление, перенос электронов от донора к акцептору); цитохромы, НАД, НАДФ, ФАД.

  • трансферазы (перенос различных групп от донора к акцептору); ацетилтрансферазы, аминотрансферазы.

  • гидролазы (гидролитическое расщепление с участием воды); пептидгидролазы.

  • лигазы (соединение веществ с образование новой химической связи); пируваткарбоксилаза.

  • лиазы (негидролитический и неокислительный разрыв связей); пируватдекарбоксилаза.

  • изомеразы (внутримолекулярное перемещение различных групп); глюкозофосфатизомераза.

Ферменты, образу­емые бактериальной клеткой, могут локали­зоваться как внутри клетки — эндоферменты, так и выделяться в окружающую среду — экзоферменты.

Экзоферменты играют большую роль в обеспечении бактериальной клетки доступными для проникновения внутрь ис­точниками углерода и энергии. Большинство гидролаз является экзоферментами, которые, выделяясь в окружающую среду, расщепля­ют крупные молекулы пептидов, полисаха­ридов, липидов до мономеров и димеров, способных проникнуть внутрь клетки. Ряд экзоферментов, например гиалуронидаза, коллагеназа и другие, являются ферментами агрессии. Некоторые ферменты локализо­ваны в периплазматическом пространстве бактериальной клетки. Они участвуют в про­цессах переноса веществ в бактериальную клетку.

Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и — в некоторых слу­чаях — для видов. Поэтому определением спектра ферментативной активности поль­зуются при установлении таксономического положения бактерий. Наличие экзофермен­тов можно определить при помощи диффе­ренциально-диагностических сред, поэтому для идентификации бактерий разработаны специальные тест-системы, состоящие из набора дифференциально-диагностических сред.

2) Реакция непрямой гемагглютинации (рнга). Реакция обратной непрямой гемагглютинации (ронга). Реакция нейтрализации антител (рнат).

РНГА. В качестве антигенного диагностикума - эритроциты человека или барана, на которые адсорбируют растворимые антигены ьактерий, бактериальные токсины или гаптены микроорганизмов. Такие эритроциты (сенсибилизированные) приобретают новую специфичность сорбированных антигенов, а вместе с ней и способность агглютинироваться с сыворотками, содержащими антитела против этих антигенов.

Методика. Ставят реакцию на планшетах с 96 лунками. Исследуемую сыворотку предварительно инактивируют при 56С в течение 30 минут для уничтожения комплемента, затем готовят двукратные разведения (от 1:20) и разливают в лунки по 0.1 мл. К каждому разведению + 0.1 мл эритроцитарного диагностикума.

Контроли - сенсибилизированные эритроциты с физ. раствором; несенсибилизированные с физ. раствором, несенсибилизируемые с исследуемой сывороткой.

После двух часов инкубации в термостате при 37С или при комнатной температуре учитывают реакцию и определяют титр. Положительный результат - осадок эритроцитов имеет форму зонтика с зубчатыми краями и покрывает почти всю лунку. Отрицательный - эритроциты оседают в центре в виде компактного диска с ровными краями (пуговка).

РОНГА. Ставят с эритроцитарным диагностикумом, который представляет собой взвесь отмытых эритроцитов, нагруженных специфическими иммуноглобулинами.

Методика. Планшет с 96 лунками, в них размещают двукратные культуральные жидкости, начиная с 1:8 в объеме 0.1 мл, туда же добавляют 0.1 мл эритроцитарного диагностикума. Контроли: культуральная жидкость токсигенного штамма, культуральная жидкость нетоксигенного штамма, контроль эритроцитарного антительного диагностикума.

Учет опыта через 2 часа в термостате при 37С - СКОРОСТНОЙ ТЕСТ - визуально аналогично РНГА.

РНАТ. Разновидность РОНГА. Участвуют: культуральная жидкость, возможно содержащая токсин, конкретная антитоксическая сыворотка, эритроцитарный диагностикум.

Методика. Разводят двукратно культуральную жидкость с NaCl и разливают в лунки по 0.1 мл, туда же добавляют 2х0.1 мл антитоксической сыворотки и выдерживают при 37С 30 минут. Для выявления нейтрализации токсина вносят эритроцитарный диагностикум и инкубируют 2 часа. Контроли: культуральная жидкость токсигенного штамма, культуральная жидкость нетоксигенного штамма, контроль эритроцитарного антительного диагностикума, контроль конкретной антитоксической сыворотки (стандартная антитоксическая+эритроцитарный диагностикум).

Визуально положительная реакция - пуговка, отрицательная - зонтик. Происходит из-за того, что при совпадении культуральной жидкости и сыворотки токсин нейтрализуется -> гемагглютинации не будет (все антитела израсходовались на токсин); если жидкость и сыворотка не совпали -> антитела остались -> гемагглютинация.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]