Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Mikra_bilety.docx
Скачиваний:
1
Добавлен:
01.05.2025
Размер:
495 Кб
Скачать
☆

Билет 4

1) Основные методы исследования морфологии микроорганизмов. Простые и сложные методы окраски. Протравы и дифференцирующие вещества. Окраска по Граму.

Основные методы исследования морфологии микроорганизмов - это исследование нативных препаратов и исследование фиксированных окрашенных препаратов.

Нативные препараты = живые. Исследуются в форме "раздавленной" и "висячей" капель.

"Раздавленная" капля - капля микроорганизма в жидкости, нанесенная на предметное стекло и покрытая другим покровным стеклом.

"Висячая" капля - капля жидкости с микроорганизмом, нанесенная на покровное стекло и погруженная в лунку на специальном предметсом стекле.

Исследуются нативные препараты 5 способами микроскопии: микроскопия затемненного поля, темнопольная микроскопия, фазово-контрастная микроскопия, электронная микроскопия, люминисцентная (=флюоресцентная) микроскопия.

Микроскопия затемненного поля: заключается в микроскопировании препарата в поле не интенсивной освещенности, в результате получаются малоконтрастные изображения. Позволяет выявить движение микроорганизмов, микроскопировать простейшие и грибы.

Темнопольня микроскопия: препарат освещается косыми лучами, не попадающими в объектив, но отражающимися от микроорганизмов и частиц в поле зрения. Отраженный свет попадает в объектив и становятся видны котуры светящихся микроорганизмов (с неразличимыми внутренними структурами). Этот метод позволяет увеличить разрешающую способность микроскопа примерно в 10 раз. Позволяет изучать спирохет и выявлять подвижность микроорганизмов.

Фазово-контрастная микроскопия: универсальный метод изучения нативных препаратов. Для этого метода используют обычный микроскоп, фазово-контрастное устройство и специальные осветители. Используется для изучения некоторых анатомических структур и выявления подвижности микроорганизмов, изучения L-форм бактерий и микоплазм.

Электронная микроскопия: позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2 мкм). Используется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмикроскопических объектов.

Люминисцентная(флюоресцентная) микроскопия: основана на явлении фотолюминесценции. Люминесценция - свечение объектов после воздействия на них каких-либо источников энергии - световых/электронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесценция - свечение объекта под влиянием световых лучей.

Простые методы окраски - одноэтапные, с использованием 1го красителя. Препарат фиксируют в пламени горелки, проведя предметное стекло 3 раза через него, окрашивают бумажкой с красителем (добавляя на нее воду и оставляя на 3-5 мин), промывают, высушивают, микроскопируют в иммерсионной системе. Красители: фуксин, эозин, метиленовый синий, генцианвиолет.

Сложные методы окраски - осуществляются в несколько этапов, препарат красится несколькими красителями, используют протравы и дифференцирующие вещества.

Протравы - химические и физические вещества, повышающие окрашиваемость микроорганизмов. Уплотняют цитоплазму и делают окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку (раствор Люголя в методе Грама, HCl в методе Ожешко, фенол и высокая температура в методе Циля-Нильсена).

Дифференцирующие вещества - избирательно обесцвечивают один вид микроорганизмов или определенную анатомическую структуру (спирт в методе Грама, серная кислота в методе Циля-Нильсена и Ожешко).

Сложные методы окраски подразделяются на дифференциальные (позволяют отличить один вид микроорганизмов от другого - метод Грама и Циля-Нильсена) и методы, позволяющие выявить анатомические структуры микроорганизмов (споры - Ожешко, клеточную стенку - метод Пешкова, капсулы - метод Бурри-Гинса, зерна волютина - метод Нейссера).

Метод Грама: диффененциальный метод окраски, позволяет отличить Гр+ от Гр- микроорганизмов.

Красители: генцианвиолет и фуксин; протрава - раствор Люголя; дифференцирующее вещество - этиловый спирт.

Техника:

  • препарат фиксируют в пламени горелки;

  • окрашивают генцианвиолетом на фильтровальной бумажке (3-5мин);

  • добавляют раствор Люголя (1 мин);

  • промывают в спирте (30 сек);

  • промывают водой;

  • красят фуксином на фильтровальной бумажке (3-5 мин.);

  • промывают водой, сушат, микроскопируют в иммерсионной среде;

В поле зрения видны красные Гр- и синие Гр+ микроорганизмы.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]