Лабораторная работа №8 Тема «Обмен углеводов. Обмен липидов» (2 часа) Цели:

1. Ознакомление со структурой, функцией, принципами нормирования суточной потребности углеводов, липидов. Биохимическими механизмами их переваривания, всасывания и тканевого обмена гликогена, их нарушениями.

2. Сформировать знания о пентозофосфатном пути обмена моносахаридов, глюконеогенезе, уровнях и механизмах регуляции обмена углеводов.

3. Дать представления о возрастных и тканевых особенностях функционирования реакций пентозофосфатного шунта и глюконеогенеза, об их интеграции с липидным обменом, о номенклатуре и классификации ферментов катализирующих эти процессы и их коферментном составе, об уровнях и механизмах регуляции обмена углеводов и липидов.

4. готовностью использовать основные методы защиты от возможных последствий аварий, катастроф, стихийных бедствий (ОК-11) профиль подготовки: Физическая культура. Безопасность жизнедеятельности (очная форма обучения);

5. способностью использовать возможности образовательной среды для формирования универсальных видов учебной деятельности и обеспечения качества учебно-воспитательного процесса (ПК-5) профиль подготовки: Физическая культура. Безопасность жизнедеятельности (очная форма обучения).

Содержание.

Проведение качественного и количественного анализа по определению ПВК.

Обработка результатов анализа

Формулирование выводов

Работа с вопросами, тестами и расчетными задачами

Требования к умениям бакалавра.

Знать:

1. Биохимические механизмы переваривания, всасывания углеводов и липидов.

2. Распространенные ферментопатии пентозофосфатного шунта, глюконеогенеза,обмена фруктозы и жирных кислот.

3. Причины и молекулярные механизмы развития сахарного диабета, его диагностику и осложнения.

4. Изменение углеводного и липидного обмена при стрессовых реакциях в животной и растительной клетке.

Уметь:

Готовить образцы для анализа

Проводить качественный и количественный ферментативный анализ

Экстрагировать гликоген из ткани животного, осуществлять его ферментативный гидролиз и обнаружение.

Записывать ключевых реакции глюконеогенеза, окислителной стадии пентозофосфатного шунта, β-окисления.

Методика опыта и реактивы. а) кашица мышеч­ной ткани. Мышцы только что убитого кролика, крысы или лягушки нарезают ножницами на маленькие кусочки (на холоду). Кашицу готовят непосредственно перед употреблением, растирая нарезанные мышцы с неболь­шим количеством дистиллированной воды; б) фосфат­ный буфер рН 8,04. Готовят два раствора: I — рас­твор Na₂HP0₄.2H₂0 (11,876 г соли в 1 л); II — раствор КН₂Р0₄ (9,078 г соли в 1 л). Для получения бу­ферной системы (рН 8,04) смешивают 95 мл первого раствора с 5 мл второго; в) метафосфорная кислота, 5°1₀-ный раствор; г) гликоген или крахмал, 0,5°1₀-ный раствор; д) вазелиновое масло; е) гидрат окиси кальция (Са(ОН)г • Н₂0), в порошке; ж) сернокислая медь, 15%-ный раствор; з) серная кислота, концентрирован­ная; и) гваякол (монометиловый эфир пирокатехина), 0,2°/₀-ный спиртовой раствор; к) тиофен, 10—20 капель препарата растворяют в 100 мл этилового спирта.

В две пробирки вносят по 0,5 г свежеприготовленной мышечной кашицы и 3 мл фосфатного буфера (рН 8,04). Первая пробирка служит контрольной, вторая — опыт­ной. В контрольную пробирку для инактивации фермен­тов добавляют 2 мл 5%-ного раствора метафосфорной кислоты и 1 мл дистиллированной воды. Во вторую про­бирку вливают 1 мл 0,5%-ного раствора крахмала или гликогена, затем в обе пробирки добавляют по 1 мл вазелинового масла (для защиты реагирующих веществ от кислорода воздуха) и ставят на 1 ч в термостат при температуре 36,5—37° С. После часа инкубации пробир­ки вынимают из термостата и во второй инактивируют ферменты добавлением 2 мл 5%-ного раствора метафос­форной кислоты. Контрольную и опытную пробы филь­труют через бумагу в сухие пронумерованные пробирки. Для осаждения углеводов к фильтратам прибавляют по 0,5 г гидрата окиси кальция и 1 мл 15%-ного раствора сернокислой меди, потом пробирки ставят на 10—15 мин., время от времени взбалтывая, после чего снова фильт­руют.

С фильтратами проделывают реакции на молочную кислоту. Для этого в четыре пробирки наливают: в пер­вые две —по 10 капель фильтрата контрольной пробы, в третью и четвертую — по 10 капель опытной. Пробирки ставят в сосуд со снегом и осторожно (по стенке) добав­ляют в каждую из них по 30—40 капель концентрирован­ной серной кислоты, во вторую и четвертую приливают также по 1 капле раствора сернокислой меди. После этого все пробирки нагревают на кипящей водяной бане 2—3 мин. и быстро охлаждают. В первую и третью про­бирки наливают по 3—4 капли 0,2%-ного спиртового раствора гваякола, во вторую и четвертую — столько же спиртового раствора тиофена. Через несколько минут в третьей пробирке появляется красное окрашивание, в четвертой — вишнево-красное, которое усиливается при нагревании на водяной бане. В первой и второй пробир­ках может появиться розоватая окраска, обусловленная наличием следов молочной кислоты в мышечной ка­шице.