- •Введение
- •Лекция 1 Технология ферментационных процессов – I
- •1.1. Устройство и основные конструкторские детали ферментеров и биореакторов
- •1.2. Обеспечение тепло- и массообмена
- •1.3. Системы аэрирования и перемешивания
- •1.4. Системы пеногашения, асептики и стерилизации
- •Дополнительная
- •Лекция 2 Технология ферментационных процессов – II
- •2.1. Твердофазная, жидкофазная и газофазная ферментация
- •2.2. Периодический способ культивирования
- •2.3. Промежуточные способы культивирования
- •2.4. Непрерывный способ культивирования
- •2.5. Принцип масштабирования технологических процессов
- •Дополнительная
- •3.2. Типы размножения микроорганизмов
- •3.3. Фазы роста культуры микроорганизмов
- •3.4. Периодический метод культивирования микроорганизмов
- •3.5. Непрерывный метод культивирования микроорганизмов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Методы выделения накопительных культур микроорганизмов
- •Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •4.2. Выращивание микроорганизмов глубинным методом и методом поверхностных культур
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 5 основные типы биотехнологических процессов – I
- •5.1. Производство биомассы
- •5.2. Производство спиртов и полиолов Производство этанола
- •Производство ацетона и бутанола
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 6 основные типы биотехнологических процессов – II
- •6.1. Производство вторичных метаболитов
- •6.2. Биотрансформация
- •6.3. Производство ферментов
- •Технологические процессы производства ферментных препаратов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 7 основные типы биотехнологических процессов – III
- •7.1. Производство аминокислот
- •Микробиологическое производство l-глутаминовой кислоты
- •Технология получения l-глутаминовой кислоты
- •Получение лимонной кислоты
- •Получение уксусной кислоты
- •Получение пропионовой кислоты
- •Получение глюконовой кислоты
- •Получение итаконовой кислоты
- •Получение яблочной кислоты
- •7.3. Производство витаминов
- •Получение каротиноидов (предшественников витамина а)
- •Получение витамина d
- •Получение витамина в2 (рибофлавина)
- •Получение витамина с
- •Получение витамина в12 (цианкобаламина)
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 8 Критерии оценки эффективности биотехнологических процессов
- •8.1. Скорость роста биомассы и время генерации
- •8.2. Общая продуктивность процесса
- •8.3. Скорость потребления субстрата
- •8.4. Скорость биосинтеза продукта
- •8.5. Экономические коэффициенты (коэффициенты выхода) и метаболические (трофические) коэффициенты
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 9 Иммобилизованные клетки и ферменты - I
- •9.1. Источники ферментов. Преимущества иммобилизованных ферментов
- •9.2. Характеристика носителей для иммобилизации ферментов
- •Органические носители
- •9.3. Физическая иммобилизация ферментов
- •Методы физической иммобилизации
- •3. Иммобилизация путем отделения фермента от остальной среды полупроницаемой перегородкой (мембраной)
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 10 Иммобилизованные клетки и ферменты - II
- •10.1. Химическая иммобилизация ферментов
- •Приёмы химической иммобилизации:
- •5. Модификация аминогрупп с образованием азометиновых связей
- •10.2. Сохранение стабильности иммобилизованных ферментов
- •10.3. Соиммобилизация
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Этапы истории
- •11.2. Основные характеристики клеток животных
- •11.3 Этапы культивирования клеток животных
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •12.2. Глубинное выращивание клеток в суспензированных культурах
- •12.3. Среды для выращивания клеток
- •Основной состав питательных сред
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Вопросы для самоконтроля
- •13.2. Поверхностное культивирование клеток растений
- •13.3. Культивирование клеток растений в глубинных условиях
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •14.2. Сохранение культур клеток растений
- •14.3. Использование методов генетической инженерии в фитобиотехнологии
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 15 Основы клеточной инженерии
- •15.1. Протопласты: определение, применение
- •15.2. Способы выделения протопластов
- •Стандартная методика получения протопластов (по Такебе) (из тканей листа Nicotiana tabacum)
- •15.3. Способы культивирования протопластов
- •15.4. Слияние протопластов (парасексуальная гибридизация)
- •15.5. Виды соматических гибридов
- •15.6. Гибридомная технология
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 16 Основы молекулярной биотехнологии - I
- •16.1. Традиционные методы селекции. Методы селециии микроорганизмов
- •Методы селекции
- •16.2. Принципы селекции микроорганизмов
- •16.3. Селекция продуцентов антибиотиков, органических кислот и ферментов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 17 Основы молекулярной биотехнологии - II
- •17.1. Генетическая инженерия, ее методы и задачи
- •17.2. Получение фрагментов чужеродной днк и их очистка
- •17.3. Конструирование рДнк и клонирование генов
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 18 Основы молекулярной биотехнологии - III
- •18.1. Амплификация
- •18.2. Экспрессия генов
- •18.3. Геномная библиотека
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
- •Лекция 19 организация, контроль и управление биотехнологическими процессами
- •19.1. Системы gmp, gap, glp
- •III раздел «Персонал»:
- •IV раздел «Здания и помещения»:
- •V раздел «Оборудование»:
- •VI раздел «Процесс производства»:
- •VIII раздел «Валидация»:
- •19.2. Социальные аспекты биотехнологии и биоинженерии. Контроль применения биотехнологических методов
- •19.3. Понятие о биоэтике и биобезопасности
- •Вопросы для самоконтроля
- •Список литературы Основная
- •Дополнительная
1.2. Обеспечение тепло- и массообмена
Теплообмен – перераспределение тепловой энергии между взаимодействующими фазами. Теплообмен является важной составной частью процессов, протекающих в биореакторе, т.к. жизнедеятельность и метаболическая активность биообъекта в зависят от температуры.
Теплообмен зависит от ламинарного и турбулентного движения теплоносителя; толщины и качества материала стенок биореактора; вязкости среды; скорости потока при полунепрерывном и непрерывном способах культивирования биообъектов; характера охлаждения биореактора.
Большинство биотехнологических процессов протекают при температуре 30 - 50 ºС (мезофильные условия). Поэтому всегда необходим отвод тепла, особенно в биореакторах, в которых выращивают аэробные клетки. Для отвода тепла используют рубашки аппаратов, змеевики, которые монтируют внутри биореактора, выносные теплообменники и др. Для поддержания теплового режима в ферментаторе используют артезианскую воду (12 - 15 ºС); смесь артезианской и оборотной воды, т.е. воды, которая прошла через ферментатор (18 - 20 ºС); «захоложенную» воду (10 ºС), получаемую на специальных установках.
Расчет и оптимизация системы теплообмена усложняется наличием в биореакторе контактирующих поверхностей: между клеткой и питательной средой; между средой и стенкой аппарата; между стенкой и охлаждающей жидкостью рубашки биореактора; между рубашкой и наружной средой и т.д.
Теплообмен
описывается уравнением:
,
где
Q
– теплота, переданная в единицу времени
от одной фазы другой (например, внутренний
объем биореактора – окружающая среда);
A
– площадь поверхности теплообмена;
∆T
– межфазная разность температур.
Коэффициент теплопередачи U соответствует количеству теплоты, которая передается в единицу времени через единичную поверхность при разности температур в 1ºС.
Повысить скорость передачи теплоты между внутренним объемом и системой теплообмена, т.е. увеличить эффективность работы этой системы, можно за счет: повышения коэффициента теплопередачи; увеличения поверхности теплообмена; увеличения разности температур.
Коррозия стенок биореактора или их загрязнение снижают коэффициент теплопередачи. Поэтому необходимо изготавливать аппараты из неподверженных коррозии материалов и его поддержания в чистоте.
Для регуляции теплообмена изменяют длину трубопровода, используют теплообменники пластинчатого типа или типа «труба в трубе» и др.
Массопередача – обмен веществом между различными фазами (например, перенос кислорода из газовой фазы в жидкую).
Так, при выращивании биообъекта в ферментаторе образуется сложная система массопереноса кислорода: газ – жидкость – твердое тело (т.е. биообъект). Эту систему можно разделить на три части: газ – жидкость, жидкость – жидкость и жидкость – твердое тело. В этих системах перемещение кислорода будет неравноценным и зависит от растворимости газа в жидкой фазе, мощности барботажа, размеров пузырьков, скорости вращения вала и формы мешалки, химического состава питательной среды, температуры, толщины невозмущаемых слоев жидкости вокруг газового пузырька и клетки и т.д. Исходя из этого необходим постоянный контроль за содержанием кислорода в среде.
Для эффективного переноса кислорода необходимо добиваться разности его концентрации в направлении от газового пузырька к клетке. С этой целью, учитывая низкую растворимость кислорода в воде и водных растворах, приходиться подавать его в биореактор в повышенных количествах. Следует добиваться, чтобы все аэробные клетки были насыщены кислородом.
Для микроорганизмов, например кишечной палочки, такая критическая концентрация растворенного кислорода составляет 0,0082 ммоль/л при 38ºС, для пеницилла – 0,022 ммоль/л при 24ºС, для дрожжей – 0,0037 ммоль/л при 20ºС. Причем общая потребность в кислороде достигает максимума в конце log-фазы и начале const-фазы. Это означает, что удельная скорость размножения клеток достигает своего пика раньше, чем скорость использования кислорода.
Скорость потребления кислорода биообъектом зависит от:
возраста культуры – размножающиеся клетки потребляют больше кислорода;
межклеточной адгезии – конгломераты клеток потребляют меньше кислорода, чем отдельные клетки;
скорости накопления биомассы клеток – чем она больше, тем скорость поглощения кислорода быстрее;
динамических изменений питательной среды – большая вязкость снижает поступление кислорода к клеткам;
качества источников питания – отношение количества потребляемого кислорода к количеству превращенной глюкозы всегда меньше, чем аналогичное соотношение при окислении углеводородов из нефти;
продуктов метаболизма – секретируемые белки снижают массопередачу кислорода;
пеногасителей – лаурилсульфат натрия, например, снижает коэффициент массопередачи кислорода.
Скорость переноса кислорода (QO2) рассчитывают на единицу объема реактора, исходя из отношения произведения плотности потока и площади поверхности раздела фаз (газ – жидкость) к объему жидкой фазы в биореакторе:
,
где
– объемный
коэффициент
массопередачи;
-
концентрация растворенного вещества
в жидкой фазе, находящейся в равновесии
с газовой фазой;
А
– площадь поверхности раздела фаз “газ
– жидкость”;
– объем жидкой фазы.
,
когда
кислород быстро усваивается клетками;
массообмен кислорода при этом максимален.
Объемный коэффициент массопередачи зависит от характеристики среды культивирования и аппарата. Он существенно меняется при внесении в среду биообъекта, обычно в сторону увеличения, что объясняется активным поглощением кислорода клетками – это способствует поступлению его новых порций в жидкость из газовой фазы.
В
биосистемах массообмен связан также
с выведением
углекислоты и транспортом различных
соединений через мембраны клеток.
Диоксид углерода может находиться в
среде в виде СО
;
НСО
;
Н2СО3
и СО2.
Растворимость диоксида углерода зависит
от рН жидкости;
он
транспортируется через границу раздела
фаз “газ – жидкость” только в растворенном
виде.
