87)Расскажите о параметре полярности Снайдера в хроматографии жидкость –жидкость

Снайдер ввел параметр полярности Р для распределительной хроматографии, который позволил количественно оценить полярность большинства растворителей (табл.6).

В основе классификации полярности подвижной фазы в хроматографии

жидкость-жидкость лежат экспериментально найденные значения констант

распределения в хроматографии газ-жидкость.

Значение фактора удерживания в зависимости от параметр полярности Р

можно найти, используя уравнение (35):

lg(k2/k1) = (P1– P2)/2.(35)

Чтобы получить оптимальное значение фактора удер значение фактора

удерживания пользуются обычно смесью растворителей. Полярность смесей

растворителей можно рассчитать по формуле

Рij= Рi Ni+Рj Nj

где Рi, Рj - параметры полярности соответствующего растворитея; Ni, Nj

-объемная доля компонента i,jсоответственно.

С увеличением параметра растворимости экстра­гента константы распределения органических веществ в общем увеличиваются. Однако наблю­даются исключения уменьшение Р₀ ( или K_D) с увеличением параметра , которые нельзя объяснить только экс­периментальными ошибками. Полагают, что рас­творимость увеличивается с приближением парамет­ров растворимости растворяемого (экстрагируемого) вещества и растворителя (экстрагента). Действитель­ное положение более сложно.

Экстрагента с одинаковыми параметрами раство­римости часто обладают разной экстрагирующей спо­собностью. Например, значения  для n-октилового спирта и четыреххлористого углерода одинаковы, но эти соединения ведут себя различно как экстрагента по отношению к одному и тому же веществу.

Если рассматривать группу родственных экстраги­руемых веществ, то можно заметить, что с увеличе­нием их параметров растворимости константы рас­пределения уменьшаются.

88) Как готовят сорбенты для современной хроматографии жидкость-жидкость?

В начальный период развития жидкостной хроматографии использовали сорбенты, приготовленные подобно сорбентам для газожидкостной. На частицы носителя механически наносили пленку неподвижной фазы с той или иной полярностью. К сожалению, колонки с такими сорбентами имели меняющиеся характеристики, и время их жизни было невелико.

При синтезе сорбентов для Высокоэффективной ЖХ химические взаимодействия предпочтительнее, чем физические. Поверхность силикагеля обрабатывают различными хлорсиланами. При этом гидроксильные группы на его поверхности вступают в реакцию с этими хлорсиланами. Полученные продукты называют химически модифицированными кремнеземами. Кол-во нанесенной неподвижной фазы возрастает от С2-3 до С18, т.е время удерживания возрастает приблизительно в 2 раза в ряду С2-С4-С8-С18

89) Как проводят заполнение колонки в современной жх?

Набивка колонки - очень ответственный процесс, от качества выполнения которого практически полностью зависит успех дальнейшего эксперимента. Основной опасностью при набивке являются неоднородности, которые могут образоваться по разным причинам и привести к размыванию пиков и, в конечном итоге, к неудовлетварительному результату хроматографии. Неоднородности могут образовываться от:

1) неравномерного заполнения колонки в результате слишком быстрого осаждения сорбента или неравномерности осаждающего потока;2) посторонних включений в сорбент (пузырьки воздуха, грязь, колонии микроорганизмов и т.д.);3) неоднородности размеров гранул сорбента.

Для недопущения неравномерного заполнения колонки необходимо заполнять колонку однородной, свежеприготовленной  суспензией постепенно добавляя новые порции суспензии до заполнения сорбентом требуемого объема колонки, после этого следует установить верхний адаптор не допуская образования пузырьков воздуха и пустить поток подвижной фазы для окончательного осаждения сорбента. Следует отметить, что для достижения нужного результата обязательным условием является чистота мембран и одинаковая проницаемость по всей площади.

Посторонние включения такие как грязь и колонии микроорганизмов образуются в результате неправильных условий хранения или неправильной регенерации сорбента и предупреждаются только полным соблюдением регламента или заменой сорбента. Пузырьки воздуха могут образовываться в двух случаях: при слишком интенсивном суспензировании или при неаккуратном вливании суспензии в колонку. В обоих случаях происходит расплескивание суспензии и таким образом происходит захват трудноотделимых пузырьков. Зачастую, в данном случае необходимо перенабивать колонку.

Неоднородноти размеров гранул встречаются при использовании сорбентов старых марок, экспериментальных сорбентов или использованных ранее сорбентов, в которых присутствует мелкодисперсная фракция разрушенных гранул. При всех приведенных случаях необходимо производить отмучивание (декантацию) суспензии.  Для этого разбавленную суспензию набухшего, промытого и переведенного в нужный буфер (см. ниже) сорбента заливают до­верху в мерный цилиндр, объем которого в 5—6 раз больше, чем объем упакованного влажного сорбента, и дают ему осесть до того момента, когда между слоем сорбента и мутной жидкостью над ним обозначится резкая граница. Гранулы смолы или сефадексов оседают относительно быстро — за несколько минут (в зависимости от их среднего размера), а целлюлоза — медленнее (за 10—30 мин). Жид­кость над осадком вместе со взвешенными в ней мелкими частицами отсасывают и отбрасывают. Снова дополняют цилиндр буфером, осторожно палочкой взмучивают осадок по всему объему цилиндра и повторяют описанную операцию до тех пор (3—5 раз), пока жид­кость над только что образовавшимся осадком не будет совершенно прозрачной. Затем выжидают еще некоторое время (до полного осе­дания слоя сорбента), измеряют его высоту линейкой и отсасывают буфер — на этот раз не полностью, а до такого уровня, чтобы слой жидкости составлял половину высоты осадка. Такое соотношение при взмучивании позволяет получить кашицу («slurry»), консистен­ция которой наиболее удобна для заливки в колонку.

В преперативной хроматографии (особенно ВЭЖХ) для забивки колонки используют гидравлические системы, позволяющие равномерно уплотнять сорбент и удерживать его в заданном объеме во время хроматографии. В этом случае, для достижения оптимального результата необходимо строго придерживаться руководства производителя по используемому при упаковке давлению на сорбент. В случае отклонений от заданных условий упаковки может произойти или пережатие сорбента (при превышении давления), или образовываться полотсти (при меньшем давлении).