2. Подготовка к анализу.

Выявленные выше изложенным методом микроорганизмы с чашек Петри переносятся в пробирки со скошенным МПА для бактериальных культур и со скошенным СА для грибных культур в асептических условиях. Пробирки помещаются в термостат и выдерживаются при 37°С в течение времени , оптимального для каждой культуры. Чистые культуры микроорганизмов используются для последующих исследований по идентификации микроорганизмов.

3.1.2.3. Идентификация микрофлоры.

Идентификация бактериальной микрофлоры проводят на диагностических средах По результатам анализа роста , цветности , запаха , соответствующим химическим реакциям согласно определютелю бактерий Берджи осуществляют идентификацию (Хоулт Дж. ред. ,1998).

3.1.2.3.1. Питательные диагностические среды. Среда №1 Среда для выращивания бактерий.

Бактофок-МК 20,0 г.

Натрий хлорид 5,0 г.

Глюкоза 1,0 г.

Агар микробиологический 13,0г.

Вода дистиллированная 1000 см³

рН после стерилизации 7,3 ± 0,2

Все инградиенты растворяются в воде , прибавляют замоченный заранее агар , нагревают до полного его расплавления , фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Стерилизуют при температуре 121°С в течение 15 минут.

Среда №2 - Среда для выращивания грибов (Сабуро)

Бактофок-МК 10,0 г.

Глюкоза 40,0 г.

Агар микробиологический 13,0 г.

Вода дистиллированная 1000 см³

рН после стерилизации 5,6 ± 0,2

Все ингредиенты растворяют в воде , прибавляют замоченный заранее агар , нагревают до расплавления , фильтруют через ватно-марлевый фильтр.Стерилизуют при 12ГС в течение 15 минут. После стерилизациидобавляют 100 мг. Бенаилпенициллина и 100 мг. Тетрациклина ( либо перед стерилизацией - 50 мг. Левомицетина) на 1000 см³ среды.

Среда №3.- Среда обогащенная для бактерий сем.ЕЩегоЬайепасеае.

Бактофок- МК 20,0 г.

Натрий фосфат двузамещенный 7,5г.

Натрий фосфат однозамещенный 2,5 г.

Глюкоза 10,0 г.

Феноловый красный 0,08 г.

Малахитовый зеленый 0,015 г.

Вода дистиллированная 1000 см³

рН после стерилизации 7,3 ± 0,2

Питательную основу и соли растворяют в дистиллированной воде при нагревании , вносят глюкозу , прибавляют 8 см³ 1№ раствора фенолового красного и 3 см³ 0,5№ малахитового зеленого , устанавливают рН , кипятят 1 мин., фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Смтерилизуют при температуре 121° С в течение 15 минут.

Среда №4 - (агар Эндо сухой) - Среда для выделения бактерий сем.ЕМегоЬа^епасеае.

Панкриатический гидролизат 12,0 г.

рыбной муки

Дрожжевой экстракт импортный 1,0 г.

Натрий хлористый 3,4 г.

О-лактоза 10,0 г.

Сульфит натрия , безводный 0,8 г.

Динатрий фосфат 0,5 г.

Фуксин основной 0,2 г.

Агар микробиологический 10,0 г.

РН 7,4 ±0,2

Среда №5 - ( висмут-сульфит агар сухой) - Среда для выделения бактерий сем. ЕЩегоЬас1епасеае.

Панкриатический гидролизат кильки 16,6 г

.16,4 г.

6. г.

7. г. 2,24 г. 4,28 г.

1,32 г. 3,63 г. 0,017 г. 0,63 г. 2,6 г.

Агар микробиологический

Агароид

Д-глюкоза

висмут лимоннокислый Сульфит натрия безводный

Соль Мора

Динатрий фосфат обезвоженный Бриллиантовый зеленый Сода кальцинированная Натрий хлорид

РН 7,6 ± 0,2

Среда№6. - Среда для определения ферментации глюкозы.

20,0 г. 5,0 г. 40,0 г. 0,08 г. 1000 см³

рН после стерилизации 7,2 ± 0,2

Питательную основу и натрий хлорид растворяют в дистиллированной воде при нагревании , вносят глюкозу , прибавляют 8 см³ 1 % раствора фелового красного , устанавливают рН, кипятят 1 мин. , фильтруют и разливают в пробирки с поплавками по 4-5 см³. Стерилизуют при температуре 121°С в течение 15 мин. Затем как можно быстрее охлаждают среду.

Среда №7 - Среда для определения восстановления нитратов в нитриты.

Бактофок- МК 5,0 г.

Натрий хлорид 5,0 г.

Калий нитрат 1,5 г.

Вода дистиллированная 1000 см³.

Бактофок-МК Натрий хлорид Глюкоза

Феноловый красный Вода дистиллированная

рН после стерилизации 7,2 ± 0,2

Все инградиенты растворяют в воде при нагревании , устанавливают рН , кипятят 1 мин., фильтруют через бумажный фильтр и разливают в пробирки по 4-5 см³. Стерилизуют при температуре 121 °С в течение 15 минут.

Среда №8 - Среда для выращивания Ps. aeruginosa и Staphylococcus aureus.

Бактофок-МК 10,0 г.

Натрий хлорид 5,0 г.

Калий фосфат двузамещенный 2,5 г.

Глюкоза 2,5 г.

Вода дистиллированная 1000 см³

рН после стерилизации 7,3± 0,2

Питательную основу и соли растворяют в воде при нагревании , вносят глюкозу , устанавливают рН , кипятят 1 мин., фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют при температуре 121 °С в течение 15 мин.

Среда №9 - глицериновый агар выявления пиоцианина у Рб. Aeroginosa.

Бактофок -МК 20,0г.

Глицерин 10,0 г.

Магний хлорид безводный 1,4 г.

Калий сульфат безводный 10,0г.

Агар микробиологический 15,0 г.

Вода дистиллированная 1000 см³

рН после стерилизации 7,2 ± 0,2

Все ингредиенты , кроме глицерина , растворяют в воде и оставляют на 15 мин. Затем вносят глицерин , тщательно перемешивают , растворяют при нагревании , устанавливают рН, ькипятят 1 мин., добавляют замоченный заранее агар , нагревают до полного его расплавления , фильтруют через ватно- марлевый фильтр . Стерилизуют при температуре 121°С в течение 15 мин.

Среда №10 -Среда для идентификации Staphylococcus aureus.

Бактофок-МК 10,0 г.

Натрий хлорид 75,0 г.Маннит 10,0 г.

Феноловый красный 0,025 г.

Агар микробиологический 15,0 г.

Вода дистиллированная 1000 см³

Характерная морфология колоний

рН после стерилизации 7,4 ± 0,2

Все ингредиенты растворяют в воде , вносят 2,5 см³ 1% раствора фенолового красного , устанавливают рН , кипятят 1 мин. , прибавляют замоченный заранее агар , нагревают до полного расплавления , фильтруют. Стерилизуют под давлением при температуре 121°С в течение 15 минут.