3.1.2.4. Определение чувствительности микроорганизмов к бактерицидным веществам.

Чувствительность микроорганизмов к бактерицидным веществам определяется с помощью выпускаемых промышленностью бумажных дисков , которые пропитываются тем или иным бактерицидным веществом. Концентрация исследуемого вещества в дисках подбирается таким расчетом , чтобы диаметр задержки роста стандартных тест-организмов или исследуемых культур микроорганизмов ,к которым определяется чувствительность бактерицида, были 28-32 мм.

Исследуемые микроорганизмы выращивают на соответствующей плотной питательной среде. Готовят однородную суспензию клеток в стерильной водопроводной воде или физиологическом растворе. В 1 мл суспензии должно содержаться около 2 млрд. Клеток ( определяют по стандарту мутности). 1 мл суспензии вносят в пробирку с 20 мл стерильной расплавленной и остуженной до 40-45°С агаризованной средой , например МПА. Если микроорганизмы выращивались в жидкой питательной среде, в агар аносят соответствующий объем культуры.Содержимое пробирки быстро и тщательно перемешивают и выливают в стерильную чашку Петри. Когда Среда застывает , на ее поверхность помещают бумажные диски на равном растоянии друг от друга и на 1,5-2,0 см от края чашки. Чашки выдерживают при комнатной температуре для лучшей диффузии бактерицида в толщу агаровой среды, а затем 24 ч. При 30-32°С. Если исследуемые бактерии чувствительны к данным бактерицидам , то вокруг дисков образуются зоны отсутствия роста.(рис.5 ). Диаметр зоны измеряют миллиметровой линейкой. Зона более 30 мм свидетельствует о высокой чувствительности микроорганизма к агенту , а менее 12 мм - о слабой чувствительности.( Егоров Н.С. под ред. ,1983г.)

сравнению с ПВ. Подмор предоставлен компанией «Тенториум», г. Пермь.

С0₂ - экстракция - физико-химический метод выделения веществ из растительного сырья и подмора пчел. Метод основан на растворимости экстрагируемых веществ в жидком диоксиде углерода. Процесс экстракции представляет собой замкнутый цикл. Растворитель получают в цехе сухого льда в докритическом состоянии. Сырье погружают в батарею экстракторов, куда подают жидкий диоксид углерода. В виде мисцеллы диоксид углерода выводится из экстрактора в специальный сборник, где давление постепенно снижается до уровня атмосферного. Диоксид углерода переходит в газообразное состояние, вновь сжижается и под давлением его подают на экстракцию. Низкая температура (+31,4°С) и малое значение скрытой теплоты испарения (155, 4 кДж/кг) позволяют вести экстракцию с небольшими затратами тепла. Жидкая двуокись углерода не поддерживает жизнедеятельность микроорганизмов и, таким образом С0₂-экстракты самостерилизуются. В случае С0₂ - экстракции подмора пчел получают экстракт, содержащий воска, биологически активные вещества, витамины В, С, Б, Е, К, Р (А — каротины, Е-токоферолы), эфирные масла, красящие и дубильные вещества, гликозиды.

Ферментный препарат - протеиназа.

Для ферментативного гидролиза белковой части подмора использовали протеолитический фермент трипсин кристаллический СПОФА - Объединенные фармацевтические заводы, Прага - Чехословакия.

Оптимум рН 7,0 - 7,2, температурный оптимум - 40-50 °С

.Ферментный препарат - целловиридин.

Для ферментативного гидролиза хитозана был использован препарат целловиридин - промышленный ферментный препарат гидролаз на основе штамма Trichoderma viride.

Препарат ферментативный - Целловиридин Г20х ТУ 9291-010 00479563-99

Препарат обладает ß - глюказной активностью и способностью к гидролитическому расщеплению внутримолекулярный связей в ß - глюканах различного происхождения (Ильина A.B. 2001) Качественная характеристика ферментативного препарата представлена в таблице 12.

Таблица 12 Наименование показателей	Нормы			Фактически/ й результат
	Группы
	1	2	3	Порошок бежевого цвета
Внешний вид и цвет	Однородный порошок от светло- кремового до светло- коричневого
Целлюлолитическая активность (ЦлА), уд/г	2000 +-200	1000 +-100	200 +-20	2000
Массовая доля остатка после просеивания на сите из проволочной сетки № 067, % не более	5	5	5	0,23
Массовая доля влаги, %	3-15	3-15	3-15	4,7
Безвредность в тест-дозе (для препарата, применяемого в сельском хозяйстве)	Безвреден	безвреден	безвреден	безвреден

Гарантийный срок хранения - 1год

г

Активность СеНоутШп в20х

Хранение по ГОСТ 26142 при температуре от - 25 °С до + 25 °С. Ферментный препарат представляет собой смесь ферментов, обладающих различной активностью (таблица 13)

Таблица 13. Protein mg/g	266
CMC - ase (DNS)*	10325
b-Clucanase(DNS)	171125
Laminarinase(DNS)	526
Xylanase (Birch, DNS)	13949
Xylanase (Oat, DNS)	29237
Arabino- Xylanase (Wheat, DNS)	74510
Arabinase(DNS)	158
Mannanase (DNS)	3253 с
ß - Glucosidase	72
a -Galactosidase	34
Polygactouronase	9465
Acid protease (Haemoglobin)	34

* (DNS) - динитросалициловая кислота.