- •Список литературы
- •2.0Бзор литературы
- •2.1. Общие представления по этологии пчел.
- •2.3. Некоторые аспекты микробиологического состояния пчелиной семьи.
- •Признаки болезни.
- •2.5. Микрофлора здоровой пчелиной семьи .
- •2.6. Почему болеют пчелы.
- •2.7. Хитозан и его значение
- •2.9. Основные этапы получения хитозана
- •2.8. Источники и способы получения хитозана
- •2.10. Основные источники хитозана Ракообразные
- •2.11. Пчела как потенциальный источник хитозана
- •3.Экспериментальная часть
- •3.1.Объекты и методы исследования.
- •3.1.1. Объекты исследования.
- •3.1.2. Методы исследования.
- •Отбор проб и смывов для микробиологического анализа.
- •Подготовка к анализу.
- •3.1.2.3. Идентификация микрофлоры.
- •3.1.2.3.2.Идентификация микроорганизмов.
- •3.1.2.4. Определение чувствительности микроорганизмов к бактерицидным веществам.
- •3.1.2.5.2. Методы получения хитозана. Щелочной гидролиз
- •1. Жесткий щелочной гидролиз
- •2. Мягкий щелочной гидролиз
- •3.1.2.8. Определение динамической вязкости
- •3.1.2.9. Кондуктометрическое определение степени деацетилирования хитозана
- •3.2. Результаты и обсуждение.
- •Изучение микрофлоры ульев здоровых пчелиных семей в зависимости от годичного цикла.
- •3.2.1. Изучение особенности годичного цикла жизни пчелиной семьи.
- •3.2.2. Происхождение и роль микрофлоры здоровой пчелиной семьи.
- •3.2.3.Микрофлора ульев здоровой пчелиной семьи.
- •3.2.4.Влияние гигиенических условий углекислого газа в гнезде на семьи пчел.
- •3.2.5. Защитные свойства внешних покровов пчел от микрофлоры.
- •3.2.6. Получение хитозана из подмора пчел.
- •3.2.6.1.Характеристика подмора пчел.
- •3.2.6.2 Депротеинирование
- •3.2.6.3. Деацетилирование
- •3.2.6.4. Ферментативный гидролиз хитозана
- •3.2.7.Технология переработки подмора пчел.
- •3.2.8.Технология введения пчелозана (хитозана) в зубные пасты.
- •3.2.9.Клинические испытания зубной пасты «Пчелка».
- •5. Список литературы.
3.2.2. Происхождение и роль микрофлоры здоровой пчелиной семьи.
О
Происхождение микрофлоры здоровых семей недостаточно изучена. Существует распространенное мнение о том , что она в основном заносится в пчелиные семьи из водоемов, луж, болот , сточных вод и отхожих мест.
Для изучения поставленного вопроса было микробиологически исследовано из пчелиных семей личинок 91 , куколок 90 , взрослых пчел 250 , трутней 70 , маток 14 , перги 58 проб , меда 9 , нектарников и пыльцы цветов / следующих медоносных растений: Caragana arborecpens (акация желтая) , Cucumis Meló (дыня), Cucumis sativus (огурцы), Dracocephalum moldavicum (земееголовик) , Echium vulgare (синяк) , Epilobium angustifolium (кипрей) ,
/ Fagoppyrum esculeiitum (гречиха) , Ilipendule Ulmaria (спирея), Helianthus / annuum ( под-солнечник), Melilotus of icinalis (донник желтый) , Phacelia \J tanacetifolia ( фацелия), Prumes Padus (черемуха) , Salix caprea ( ива бредина) , Siringa amurensis (сирень амурская), Taraxacum officinale (одуванчик), Tilia cordata (липа мелколистная) , Trifolium montanum ( клевер горный ), Trifolium pratense ( клевер красный ), Vicia cracca ( горошек мышиный ).
Кроме того были обследованы пчелы - сборщицы воды у поилок , луж , влажной почвы и отхожих мест . Исследования микрофлоры здоровых семей проводили в Пермской области. Исследованию подвергали покровы , среднюю и заднюю кишку пчел различного возраста и пола. Высевы производили согласно методам изложененым в предыдущей главе. Определение микроорганизмов проводили по H.A. Красильникову , Д. Берджи и отдельным оригинальным работам , посвященным описанию микрофлоры медоносный пчелы, по результатам сравнения имеющихся в коллекции и определенных ранее до вида микроорганизмов.
В связи с трудностью определения видовой принадлежности микроорганизмов , нами были использованы в качестве типовых штаммов того или иного рода культуры микроорганизмов , которые были выделены из
подобных источников и идентифицированы ранее. »
Результаты исследования представлены в таблице 14. Из таблицы видно , что 59 штаммов чистых культур микроорганизмов было выделено из нектарников и пыльцы медоносных растений . Кроме того 498 штаммов чистых культур микроорганизмов было выделено из кишечника пчел различного возраста и пола, перги и меда. Покровы пчел бедны микрофлорой. Было предположительно установлено , что эти микроорганизмы относятся к 62 биологическим видам. Среди них определено бактерий споровых 42 ( 8,4% О , неспоровых грамотрицательных 317 ( 63,7%) , неспоровых грамположительных - 124 (24,9%).
Наиболее часто выделяются из пчел различного возраста и пола, а также кормовых запасов пчелиных семей следующие микроорганизмы : Bacillus cereus , Pseudomonas flurescens , Pseudomonas herbicola , Chromobact. citrovorum, Chromobact. cloacae, Chromobact. coli apium , Chromobact. paracloacae, Chromobact. paratyphi, Chromobact. proteus vulgaris , Lactobacterium poliinis , Candida reucaufii, Candida sake.
Как видно из таблице 13., пости все часто выделяемые микроорганизмы более часто выделяют также и из растений. Эти сопоставления свидетельствуют о том , что микрофлора здоровых пчелиных семей имеет эпифитное происхождение. В течение лета вместе с нектаром и прыльцой последняя в больших количествах поступает в пчелиные семья. В сво
юочередь пчелы сборщицы , посещая цветы медоносных растений , переносят микрофлору с одних растений на другие. У пчел-сборщиц , отловленных на различных водопоях и отхожих местах не обнаружено наличие какой - либо иной микрофлоры , отличной от микрофлоры пчел-сборщиц нектара и пыльцы.
Эти исследования не исключают полностью заноса микрофлоры из этих источников , но они показывают, что роль их незначительна.
Исследование микрофлоры здоровых пчелиных семей в Пермской области показало , что она не является однородной , а изменяется в зависимости от состава микрофлоры цветов различных медоносных растений и различных географических условий.
Далее установлено, что осенью и зимой , когда занос микрофлоры в пчелиные семья из вне прекращается , в кишечнике взрослых пчел микрофлора значительно снижается в качественном отношении.
В частности в кишечнике зимующих пчел отсутствуют следующие виды бактерий : Pseudomonas herbica, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas liguefaciens, Micrococcus albatus , Micrococcus sulfureus, Chromobact. peoteus vulgaris, Chromobact. paracjli.
В количественном отношении микрофлора зимой также резко снижается. У зимующих пчел наиболее часто выделяются Chromobact. cjli apium, Chromobact. paratyphi alvei , реже Bacillus citrovorum, Chromobact. cloacae, Streptococcus lactis и некоторые споровые бактерии.
Как уже отмечалось 63,7% , т.е. две трети микроорганизмов составляют неспоровые грамотрицательные бактерии. Вместе с дрожжами и некоторыми другими бактериями они принимают большое участие в питании и обмене веществ медоносной пчелы.
Как , известно, организм медоносной пчелы не усваивает галактозу , маннит , сорбит, целлобиозу , рафинозу , фруктозу , сорбозу , дульцит , эритрит , инозит. Такие углеводы как лактоза , целлобиоза , мелибиоза, рамноза и манноза , не только не усваиваются , но и являются ядами для медоносных пчел.
Между тем в нектаре цветов растений и сладких падевых выделениях листьев растений часто содержатся непериваримые и "ядовитые" углеводы. Упомянутые бактерии , обладают ферментами специфически расщепляющие последний или же переводящие в усвояемые соединения. В частности большую роль в физиологии пищеварения пчел играют наиболее часто выделяемые Bacillus citrovorum, Bacillus cloacae. Эти бактерии расщепляют многие неусваиваемые пчелами углеводы , в частности лактозу.
Некоторые грамположительные бактерии усваивают аммонийные соли , синтезируют органические азотистые соединения и обогащают организм пчелы белками.
Такие микроорганизмы как : Chromobact. cloacae , Candida reukaufii принимают активное участие в молочнокислом брожении перги и ее консервировании.
Таблица
14.
Микрофлора
здоровых пчелиных семей. |
личи-нки |
Кукол-ка |
Пчела |
Тру-тень |
Матка |
Перга |
Мед |
Нектарни |
ожитель- |
|
|
|
|
|
|
|
ки |
ное |
|
|
|
|
|
|
|
|
видовое |
|
|
|
|
|
|
|
|
Название |
|
|
|
|
|
|
|
|
Микроор |
|
|
|
|
|
|
|
|
ганизмов |
|
|
|
|
|
|
|
|
BACILLUS |
|
1 |
2 |
|
|
|
|
3 |
Amarus |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
Corous |
1 |
2 |
7 |
1 |
2 |
3 |
2 |
6 |
coccoi- deus |
|
1 |
|
|
|
|
|
1 |
Filaris |
|
|
L 4 |
|
|
1 |
|
|
Idosus |
1 |
|
|
|
|
|
|
|
latera- sporus |
|
|
2 |
|
|
|
|
|
leptode- mis |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
mesen- tericus |
|
|
|
|
|
1 |
|
|
Platus |
1 |
|
|
|
|
|
|
|
Subtilus |
|
|
1 |
|
|
1 |
|
1 |
Thuringie nsis |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
vacuolo- sus |
|
|
|
|
|
|
3 |
|
CLOSTRIDIUM |
|
|
2 |
|
|
|
|
|
Ambicus |
|
|
2 |
|
|
|
|
|
fluoresces |
2 |
3 |
5 |
|
|
|
|
3 |
eriobo- tryae |
1 |
|
|
|
|
|
|
|
Herbicola |
1 |
1 |
12 |
|
|
2 |
|
8 |
liguefa- ciens |
|
1 |
|
|
|
|
|
|
Licuida |
|
1 |
1 |
|
|
|
|
|
salici- perda |
|
|
2 |
1 |
|
|
|
|
Trifolii |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
HYPHOMICROBIUM |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
cactici- dum |
|
|
7 |
|
|
|
|
|
citrovo- rum |
2 |
2 |
63 |
4 |
3 |
3 |
|
6 |
Cloacae |
4 |
2 |
1 |
|
1 |
1 |
|
2 |
Cjli Apium |
|
|
44 |
|
|
1 |
|
|
Guttatum |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
para- cloacae |
5 |
3 |
62 |
3 |
1 |
1 |
|
3 |
proteus + vulgaris |
|
1 |
41 |
1 |
3 |
|
|
|
CHROMOBACTERJFUM |
|
|
1 |
|
|
|
|
2 |
Erivanens e |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
prodigiosan |
|
1 |
1 |
|
|
|
|
|
stolona- tum |
|
|
1 |
|
|
1 |
|
2 |
/
PSEUDONOCARDIA |
|
|
|
|
|
|
|
2 |
Furkosum |
1 |
|
1 |
1 |
|
|
|
|
minuife- rula |
1 |
|
1 |
1 |
|
|
|
|
LACTOBACILLUS |
21 |
10 |
23 |
5 |
3 |
17 |
1 |
10 |
LojlAO —. STREPTOCOCCUS |
||||||||
Lactis |
|
|
3 |
|
|
|
|
|
MICROCOCCUS |
1 |
|
1 |
|
|
|
|
|
Albicans |
1 |
|
1 |
|
|
|
|
|
Albus |
1 |
|
1 |
|
|
|
|
|
Aquatilis |
|
|
|
|
|
1 |
|
|
Candidas |
1 |
|
2 |
|
1 |
1 |
|
|
Flavus |
|
|
|
|
1 |
|
|
|
Hauserli |
|
|
1 |
1 |
|
|
|
|
Luteus |
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ochrac-eus |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
Sulfareus |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
tetrag-tnus |
1 |
|
7 |
|
|
|
|
|
Viridus |
|
|
1 |
|
|
|
|
|
ACTINOMICES |
2 |
|
2 |
|
|
1 |
|
|
chromo- genes |
|
|
3 |
|
1 |
|
|
|
CANDIDA |
||||||||
Reucaufii |
|
|
1 |
|
|
1 |
|
6 |
Cake |
|
|
1 |
|
|
1 |
|
4 |
TIRULUPSIS |
||||||||
Stelita |
1 |
1 |
1 |
|
|
1 |
|
|
ZYGOSACCHAROMYCES |
1 |
|
|
|
|
|
5 |
|
ИТОГО |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
54 |
34 |
327 |
19 |
15 |
38 |
11 |
59 |
