- •Список литературы
- •2.0Бзор литературы
- •2.1. Общие представления по этологии пчел.
- •2.3. Некоторые аспекты микробиологического состояния пчелиной семьи.
- •Признаки болезни.
- •2.5. Микрофлора здоровой пчелиной семьи .
- •2.6. Почему болеют пчелы.
- •2.7. Хитозан и его значение
- •2.9. Основные этапы получения хитозана
- •2.8. Источники и способы получения хитозана
- •2.10. Основные источники хитозана Ракообразные
- •2.11. Пчела как потенциальный источник хитозана
- •3.Экспериментальная часть
- •3.1.Объекты и методы исследования.
- •3.1.1. Объекты исследования.
- •3.1.2. Методы исследования.
- •Отбор проб и смывов для микробиологического анализа.
- •Подготовка к анализу.
- •3.1.2.3. Идентификация микрофлоры.
- •3.1.2.3.2.Идентификация микроорганизмов.
- •3.1.2.4. Определение чувствительности микроорганизмов к бактерицидным веществам.
- •3.1.2.5.2. Методы получения хитозана. Щелочной гидролиз
- •1. Жесткий щелочной гидролиз
- •2. Мягкий щелочной гидролиз
- •3.1.2.8. Определение динамической вязкости
- •3.1.2.9. Кондуктометрическое определение степени деацетилирования хитозана
- •3.2. Результаты и обсуждение.
- •Изучение микрофлоры ульев здоровых пчелиных семей в зависимости от годичного цикла.
- •3.2.1. Изучение особенности годичного цикла жизни пчелиной семьи.
- •3.2.2. Происхождение и роль микрофлоры здоровой пчелиной семьи.
- •3.2.3.Микрофлора ульев здоровой пчелиной семьи.
- •3.2.4.Влияние гигиенических условий углекислого газа в гнезде на семьи пчел.
- •3.2.5. Защитные свойства внешних покровов пчел от микрофлоры.
- •3.2.6. Получение хитозана из подмора пчел.
- •3.2.6.1.Характеристика подмора пчел.
- •3.2.6.2 Депротеинирование
- •3.2.6.3. Деацетилирование
- •3.2.6.4. Ферментативный гидролиз хитозана
- •3.2.7.Технология переработки подмора пчел.
- •3.2.8.Технология введения пчелозана (хитозана) в зубные пасты.
- •3.2.9.Клинические испытания зубной пасты «Пчелка».
- •5. Список литературы.
2.5. Микрофлора здоровой пчелиной семьи .
(видовые названия микроорганизмов даны согласно оригиналам)
О антибактериальных свойствах продуктов пчеловодства известно / многое. Однако, было бы целесообразно рассмотреть еще один аспект. Известно, что в пчелином улье поддерживается постоянная температура , равная 34-36° С. Несмотря на то , что эта температура чрезвычайно благоприятна для размножения микроорганизмов , улей остается относительно "стерильным". Но получены результаты наблюдений , свидетельствующие о наличии микроорганизмов в ульях. Так по данным Черепанова В.Т. (Черепанов В.Т.,1968) микрофлора гнезда здоровых семей состоит из различных 36 видов микроорганизмов: бактерий ( спорообра- зующих и неспорообразующих) , плесневых грибов , дрожжей , актиномицетов. Из условно патогенных микроорганизмов на ульях и сотах встречаются стрептококки (Strep, faecalis , Strep, faecium ) , E.coli , которые при определенных условиях могут быть причиной заболевания пчелиных семей (Камбуров В.А.,1963). Однако пчелиная семья при этом остается здоровой.
Наряду с выш^ сказанным , по интернету прошло сообщение о уникальном открытии свойств пчел. Это открытие натурального антибиотика , который в большом количестве содержится в пчелиных ульях , и предохраняет пчел от инфекционных заболеваний. Естественный антибиотик был выделен и изучен докторами Брайаном Денсером и Стюартом Принсом в Кардиффском университете. Исследователи обратили внимание на способность пчел противостоять инфекционным заболеваниям , переносимых клещами , паразитирующими на пчелах. Дальнейшее изучение этой проблемы показало наличие в ульях химических веществ , способных противостоять инфекции. Эти вещества были успешно выделены , и оказалось , что они являются продуктами обмена специфических бактерий , населяющих ульи. ("Кирилл и Мефодий" ,2001)
Микрофлора пчелиной семьи состоит из микрофлоры кишечника пчел , трутней, маток, личинок и куколок, корма.
В таблице 3. представлены основные виды микроорганизмов , выделенных из здоровых пчелиных семей и ее корма.
Вид |
Рабочие пчелы |
Трутни |
Матка |
Личинки |
Куколки |
Перга |
Мед |
Вас. apium |
+++ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
Вас. citrovo- rum |
+++ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
Вас. cloacae |
+++ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
Вас. para- cloacae |
+++ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
Hafnia alvei |
+++ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
Lactoba ct.pol- linis.syn Bact.plu ton |
+++ |
+ |
+ |
+++ |
+++ |
+++ |
- |
Ps. her- Bicola |
++ |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
Proteus vulgaris |
++ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
- |
Вас. cereus |
++ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
Примечание: +++ - вид встречается часто; ++ - вид распространен умеренно ; + - вид встречается редко.
Микрофлора рабочей пчелы. Различные отделы кишечника рабочих пчел различаются по количеству содержащихся в них бактерий. В медовом зобике находится небольшое количество бактерий , в среднем и заднем отделах кишечника их встречается гораздо больше. В мазках , сделанных из содержимого кишечника, преобладают палочки.
Грамположительные бактерии составляют 81% из числа выделенных культур. Доминирующими видами являются Вас. apium, Вас. citrovorum , Вас. cloacae, Вас. paracloacae, Hafiiia alvei, Ps. herbicola , Lactbact. pollinis. Другие виды , относящиеся к родам - Chromobacterium , Micrococcus, Bacillus, встречаются редко и играют второстепенную роль.Из кишечника пчел выделены фитопатогенные бактерии Вас. cacticidum , Вас. Ашу1оуошт.Виды рода Bacillus , доминирующие в кишечнике пчел , сбраживают моно- и дисахариды , восстанавливают нитраты , могут усваивать минеральный азот ( за исключением Вас. apium). Необходимо отметить , что большинство видов , обитающих в кишечнике пчел, не разлагают лактозу.
Вторая многочисленная группа микроорганизмов , входящих в микробную ассоциацию кишечника пчел , представлена дрожжами. Наиболее распространены дрожжи рода Candida , Torulopsis. Болыпенство из них сбраживает глюкозу и сахарозу , но не сбраживают и не усваивают лактозу.
Микрофлора кишечника пчел в Приморье несколько отличается от микрофлоры пчел Новосибирской области. В первой преобладают Вас. Cloacae , Вас. citrovorum, а во второй - Bac.apium , Ps. herbicola
Микрофлора трутней.
Видовой состав микрофлоры кишечника трутней беднее микрофлоры кишечника пчел. Доминирующим видом в микробной ассоциации кишечника является Lactobact. pollinis ( Вас. pluton ). Часто встречаются Вас. citrovorum, Вас. paracloacae , Hafnia alvti.,a также виды рода Pseudomonas - Ps. fluorescens, Ps.liquida, Ps. saliciperda ( последний вид относится к фитопатогенным бактериям). Грамположительные бактерии , обитающие в кишечнике трутней , энергично разлагают сахара , кроме лактозы.. Многие бактерии обладают протеолитическими ферментами и усваивают минеральный азот. В микрофлору кишечника трутней входят виды, специфические для кишечника пчел , и виды , которые характерны только для кишечника трутней. (Вас. liquefaciens , Ps. liquida , Pseudobact. fucosum). В микробной ассоциации кишечника трутней обнаружены Вас. apium, Ps. herbicola, пигментные
бактерии и дрожжи.
Микрофлора маток.
В кишечнике маток обитает еще меньшее колическтво видов бактерий , чем у рабочих пчел и трутней. В нем встречаются те же основные виды бактерий , что и в кишечнике пчел , а именно Lactobact. pollinis , Вас. cloacae. Виды рода Pseudomonas отсутствуют.
Микрофлора личинок.
Кишечник личинок одно-двухдневного возраста стерилен. Микрофлора формируется у личинок в трехдневном возрасте , т.е. с момента начала кормления их медо-перговой смесью.Преобладающим видом является Lactobact. pollinis ,на нее приходится половина всех выделенных культур. Широкое распространение этой бактерии соответствует pH , который не превышает 6,8 и высокая , до 17%, концентрация сахара в кишечнике личинок. Из других видов в кишечнике личинок встречаются Вас. cloacae, Вас. citrovorum ,Ps. herbicola. В кишечнике личинок дрожжи встречаются редкой представлены видами Candida sola ,Torulopsis stellata ,Scharomyces fructuum. Микрофлора кишечника личинок пчел Новосибирской области и Приморского края различна по видовому составу. В кишечнике личинок , взятых с пасек Новосибирской области , отсутствуют виды рода Pseudomonas , редко выделяются виды рода Lactobacterium , но встречаются виды рода Bacillus. Напротив , в кишечнике личинок , собранных на пасеках Приморского края , встречаются виды рода Pseudomonas и рода Lactobacterium, но отсутствуют виды рода Bacillus.
Микрофлора куколок.
У куколок те же самые виды бактерий , что в кишечнике личинок. Третью часть выделенных из куколок культур составляют Lactobact. pollinis. Грамотрицательные палочки встречаются редко и представлены Вас. Citrovorum, Вас. paracloacae, Вас. cloacae. Дрожжи не обнаружены в организме куколок.
Микрофлора перги.
Перга представляет сробой консервированную молочной кислотой смесь пыльцы растений с медом. Основным видом микрофлоры перги являются Lactobact. pollinis. На ее долю приходится около половины всех выделенных культур. Из видов рода Bacillus встречаются Вас. citrovorum, Вас. рагас1оасае.Род Pseudomonas представлен Pseudomonas представле
нPs.herbicola. В перге распространены виды рода Micrococcus. Микроорганизмы , разрушающие целлюлозу , малочисленны и представлены актиномицетами и плесневыми грибами. В перге распространены дрожжи , особенно виды рода Torulopsis и Candida. Большинство из них сбраживает сахара. Из споровых дрожжей чаще других встречается Zygosac-charomyces bailii Lindner. Изредко выделяются виды родов Saccharomyces и Hansenula.
Микрофлора меда.
Мед представляет собой нектар растений, в котором тростниковый сахар инвертирован на глюкозу и фруктозу. Зрелый мед содержит 20% воды. В такой среде , имеющей большое осматическое давление , могут существовать только строго специфические микроорганизмы. К ним относятся дрожжи Zygosacchoromyces bailii. Они могут вызывать сбраживания меда во время хранения при повышенном содержании влаги. Кроме того , в меду / встречаются дрожжи рода Torulopsis. Из бактерий выделены Lactobact. у> pollinis , Вас. Cereus и Вас. Va^uolosus.
Микрофлора цветов медоносных растений и мест водопоя пчел.
Для того , чтобы установить связь микрофлоры пчелиной семьи с микрофлорой внешней Среды ,исследована микрофлора кишечника пчел- сборщиц нектара, воды , цветов и мест водопоя пчел.
Микрофлора пчел-сборщиц нектара не отличалась от микрофлоры ульевых пчел. На цветах медоносных растений наиболее часто встречается Ps. herbicola. Она описана в литературе как типичная эпифитная бактерия .Кроме нее , не менее часто выделяются молочнокислые палочки Lactobact. pollinis , а из рода Bacillus - Вас. cvitfovorum. Из дрожжей на цветах обитают Candida reukaufii , Diddens et Lodder , которые описаны как нектарные дрожжи , Candida pulcherrima, Trichosporon fermentans.
Видовой состав микрофлоры кишечника пчел -сборщиц воды не отличался от видового состава микрофлоры кишечника пчел - сборщиц нектара и ульевых пчел. В нее входят Вас. apium , Вас. citrovorum , Hafnia alvei и другие обычные обитатели кишечника взрослых пчел. Бактерии , которые встречаются в местах водопоя , в кишечнике пчел не обнаружены. В кишечнике пчел- сборщиц нечистот не выделено типичных представителей микрофлоры теплокровных животных.
