3.2.6.2 Депротеинирование

В процессе переработки сырья необходимо наиболее полно удалять белковые вещества, т.к. при получении хитозана из хитина, содержащего остаточный белок, этот белок оказывает определенное влияние на качество получаемого продукта.

В исследовательской работе выделение белка и белковых веществ проводили различными способами. Водорастворимые белки удаляли водным эмульгированием, остальные белки удалялись на стадии щелочного гидролиза.

Гидролиз проводили так же различными методами:

Гидролиз в жестких условиях с применением концентрированного раствора щелочи (10%) позволял выделить основное количество белковых фракций. Щелочной гидролизат представлял собой густую «маслянистую» жидкость черно - коричневого цвета, из которой возможно осадить белковую часть титрованием разбавленными растворами НС1 (1% и 3%) в диапазоне рН = 4,4 - 4,6. Определение изоэлектрической точки осаждения белка проводилось на рН-метре. Белок осаждается в виде хлопьев, из которых с течением времени формируется плотный осадок. Хитин, полученный в жестких условиях, промывали большим количеством дистиллированной воды (около 2000мл) до рН = 7 и высушивали. Сухой хитин, при анализе в чашке Петри, имеет вид темно-коричневой массы со специфическим запахом. Хорошо просматриваются отдельные членики насекомого: голова треугольной формы размером 4-5 мм темно-коричневого цвета, грудь округлой формы размером в среднем 4 мм, ножки и крылья в виде слипшихся комочков и в виде отдельных раздробленных частей, а также отдельные сегменты брюшка.

Гидролиз в мягких условиях с применением разбавленного раствора ЫаОН (3%) позволил выделить белковые вещества лишь на 50% от общего их количества. Гидролиз проходил длительно при большой концентрации субстрата (20%). Гидролизат представлял жидкость коричневого цвета, из которой также хорошо выделяются белки титрованием разбавленными растворами НС1 (1% и 3%). Промытый и высушенный хитин анализировали в чашке Петри: масса темно- коричневого цвета, в которой хорошо различаются части тела насекомого - голова с хоботком, грудь с крылышками, целые брюшка с ножками и без. Встречаются неразрушенные целые пчелы размером до 10 мм.Ферментативный гидролиз - метод выделения белка из подмора, используется для получения белков высокого качества. Применения ферментов для депротеинирования подмора пчел позволяет достичь более мягких условий обработки пчелиного сырья. Получаемые белковые продукты практически не содержат солей натрия, присутствие которых неизбежно с применением кислотно-щелочных способов. Ферментативный гидролиз дает возможность проводить выделение белка наиболее щадящим способом и выделять неразрушенные белковые фракции. Подмор гидролизовали ферментным препаратом - трипсином. Гидролизат имел коричневую окраску, и из него так же выделяли белковую фракцию титрованием кислотой. Промытый и высушенный хитин имел такой же вид, как и хитин, полученный при гидролизе в мягких условиях.

Щелочная доочистка хитина использовалась как дополнительная стадия щелочного и ферментативного гидролиза, из-за неполной очистки хитина от белковых веществ на этих стадиях. Хитин гидролизовали 1 % раствором ЫаОН в присутствии 0,1% Ыа₂80₃ при концентрации субстрата 10%. Гидролизованный хитин, анализируемый в чашке Петри, представляет массу черно-коричневого цвета. Отчетливо просматриваются голова с хоботком, грудные части и отдельные сегменты брюшка, а также слипшиеся конгломераты.

Выходы хитинов при проведении депротеинирования подмора пчел тремя способами представлены в таблице 23

Методы депротеинирования из сухого подмора пчел	Выход %	хитина,	Методы депротеинирования из подмора пчел после С02 экстракции	Выход %	хитина,
	I Стадия	II стадия		I стадия	II стадия
Жесткий гидролиз	-	20-24	Жесткий гидролиз	-	12-17
Мягкий гидролиз	46	23	Мягкий гидролиз	22	16,5
Ферментативный гидролиз	40-41	21	Ферментативный гидролиз	35	17,6

В полученных образцах хитина определялись: влажность и

содержание золы . Результаты определений отражены в таблице 24

Таблица 24 Способ получения	Показатели хитина из сухого подмора		Показатели хитина из подмора после С02 - экстракции
	Влажность, %	Содержание золы, %		Влажность, %	Содержание золы, %
Жесткий гидролиз	8,0	2,45		8,2	2,08
Мягкий гидролиз	7,2	2,45		6Д	3,04
Ферментативный гидролиз	4,7	3,06		6,1	2,72