- •Волгоградский государственный медицинский университет
- •Волгоград, 2013
- •Учёт успеваемости и посещаемости
- •Тематический план проведения занятий по разделу «Общая микробиология»
- •Часть I морфология микроорганизмов
- •Устройство и требования, предъявляемые к работе в микробиологической лаборатории
- •Устройство микробиологической лаборатории
- •Уровень опасности работ с микробами и категории лабораторий
- •Требования к работе с микроорганизмами I и IV групп патогенности
- •Основные помещения микробиологической лаборатории
- •Требования, предъявляемые к работе в бактериологической лаборатории
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Аппаратура для выращивания микроорганизмов, стерилизации и других микробиологических исследований
- •Микроскопы и методы микроскопии
- •Контрольные вопросы
- •Морфология и структура бактерий Программ трех занятий
- •С пособы окраски
- •Позитивные
- •Самостоятельная работа студента
- •Методика окраски по Граму
- •Методика окраски по Нейссеру
- •Метод Бурри-Гинса (выявление капсулы)
- •Методика окраски по Бурри-Гинсу
- •На практическом занятии
- •Контрольные вопросы
- •Часть II физиология микроорганизмов
- •Питательные среды. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Требования к питательным средам
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Методические указания Работа 1
- •Работа 3
- •Бактериологический метод исследования
- •Техника посева и пересева
- •Изучение бактериальных колоний
- •Выделение чистой культуры бактерий аэробов
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Методы культивирования анаэробных микробов
- •1. Физические методы:
- •2. Химические методы:
- •3. Биологические методы:
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии по теме: «Бактериологический анализ, культивирование анаэробов»
- •Ферментативные свойства бактерий
- •Среды для определения сахаролитических свойств
- •Cамостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Контрольные вопросы
- •Основные противоэпидемические мероприятия в лаборатории Стерилизация
- •Физические методы
- •Механические методы
- •Химические методы
- •Контроль стерилизации
- •Биологический контроль
- •Внутренний контроль качества микробиологических исследований
- •Контроль температурных режимов инкубации
- •Контроль качества стерилизации и дезинфекции
- •Химический контроль
- •Термический контроль
- •Контроль качества дистиллированной воды
- •Центральное стерилизационное отделение
- •Классификация антисептиков по механизму действия
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Демонстрация опыта действия солнечного света на бактерии (опыт Бухнера).
- •Оформление альбома:
- •Санитарная микробиология воды Общие вопросы
- •Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Санитарно-гигиенические показатели и нормативы качества питьевой воды
- •Санитарная микробиология воздуха Общие вопросы
- •Санитарная микробиология предметов обихода и медицинского оборудования Общие вопросы
- •Санитарно-микробиологическое исследование
- •Посевы на стерильность хирургического инструмента
- •Бактериологический контроль эффективности обработки кожи операционного поля и рук хирургов
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Микрофлора тела человека
- •Микрофлора кожи
- •Микрофлора уха
- •Микрофлора конъюнктивы
- •Микрофлора дыхательных путей
- •Микрофлора полости рта
- •Микрофлора желудочно-кишечного тракта
- •Микрофлора мочеполовой системы
- •Значение нормальной микрофлоры
- •Понятие «дисбактериоз». Условия развития
- •Вопросы для обсуждения
- •Микрофлора кожи Посев волоса и «отпечатков» с губ и пальцев рук на мпа
- •Микрофлора носа и зева Посев отделяемого из носа на кровяной агар
- •Микрофлора кишечника Посев кала на среду Эндо
- •Миклофлора зубного налета
- •Оформление протокола
- •Тема: «Генетика бактерий»
- •Механизмы рекомбинаций
- •Самостоятельная работа студентов на практическом занятии
- •Опыт «Конъюгация 2»: передача плазмидного признака рези-стентности к тетрациклину (r Тc).
- •Опыт по определению колициногенности.
- •Диагностика фенилкетонурии.
- •Инфекция
- •Самостоятельная работа студентов на практическом занятии
- •Контрольные вопросы
- •Классификация химиотерапевтических препаратов
- •Механизмы антимикробного действия
- •Основные осложнения при химиотерапии
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных индикаторных дисков
- •Микрофлора человека и санитарная бактериология
- •Список литературы
Посевы на стерильность хирургического инструмента
«5.1. Хирургический инструментарии с помощью стерильного пинцета извлекают из бикса или мягкой упаковки и целиком погружают в пробирки с питательными средами. Как исключение, в отдельных случаях, если простерилизованные инструменты в одной упаковке крупных размеров (иглодержатели, ранорасширители и т. д.), производят смыв с поверхности инструмента стерильной салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом растворе или стерильной водопроводной воде, и погружают салфетку в пробирку с тиогликолевой средой Аналогичные смывы с других инструментов засевают в пробирки со средой Хоттингера и Сабуро».
«5.2. Методика посева на стерильность игл и шприцов.
Для контроля отбирают шприцы малой емкости (1,0 мл или 2,0 мл в условиях бактериологического бокса, с соблюдением правил асептики погружают в пробирки с питательными средами отдельно цилиндр, поршень, иглы.
При необходимости контроля шприцев большей емкости (10,0-20,0 мл и более) исследование стерильности производят методом смыва, при этом стерильной салфеткой, смоченной в стерильном физиологическом растворе или в стерильной водопроводной воде, протирают с помощью пинцета внутренние части шприца и погружают салфетку в питательную среду».
Контроль стерильности систем переливания крови многоразового использования, зондов, катетеров, резиновых перчаток и других изделий проводят путем полного погружения мелких изделий или небольших отрезанных кусочков (1-2 см) в питательные среды.
Посев на стерильность хирургического шовного материала (кетгут, шелк). Подготовленный к работе кетгут в операционном блоке хранят в спиртовом растворе йода. Из раствора моток кетгута перекладывают стерильным пинцетом в стерильный 10% раствор гипосульфита натрия и выдерживают в нем в течение 24 часов при комнатной температуре, затем перекладывают в пробирки с 20,0-30,0 мл стерильной дистиллированной воды, также выдерживают в течение 24 часов при комнатной температуре.
Подготовленный к работе шелк хранят в спиртовом растворе, поэтому перед посевом шелк (лавсан) помещают на 24 часа в стерильную дистиллированную воду при комнатной температуре.
Непосредственно перед посевом кетгут (шелк) извлекают стерильным пинцетом и перекладывают в стерильную чашку Петри, затем его разрезают ножницами на мелкие кусочки длиной 1-2 см. Кетгут при этом раздергивают для лучшего прорастания микроорганизмов.
Посев и кетгута, и шелка производится одинаково – в 2 пробирки с тиогликолевой средой, 2 пробирки со средой Хоттингера, помещая в каждую пробирку по 4-5 кусочков исследуемого материала.
«6. Учет результатов. Материал считается стерильным при отсутствии роста во всех посевах. Материал не стерилен при росте микрофлоры».
Бактериологический контроль эффективности обработки кожи операционного поля и рук хирургов
Смывы с кожи операционного поля и рук хирургов производят стерильными марлевыми салфетками размерами 5x5 см2, смоченными в стерильном физиологическом растворе. Марлевой салфеткой тщательно протирают ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. После забора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки с водой или физиологическим раствором и стеклянными бусами, выдерживают в течение 10-ти минут, производя, таким образом, отмыв марлевой салфетки. Отмывную жидкость засевают глубинным способом по 0,5 мл на две чашки Петри, а марлевую салфетку - в 0,5%-ный сахарный бульон.
Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 часов.
«7. Учет результатов.
Кожа и руки стерильны при отсутствии роста микроорганизмов как на твердой, так и на жидкой питательной среде».
Мероприятия по профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах (приказ № 345 МЗ РФ от 26.11.1997 г.)
В данном документе проведение микробиологического мониторинга является важным параметром эпидемиологического надзора, преследующего цель - определение этиологической структуры внутрибольничных инфекций и оценку качества противоэпидемиологического надзора и предполагает:
- обследование персонала на условно-патогенную и патогенную микрофлору осуществлять только по эпидемиологическим показаниям;
- обследование медицинского персонала на носительство золотистого стафилококка при приеме на работу и в процессе профессиональной деятельности в плановом порядке не проводится;
- родильный дом (отделение) не менее одного раза в год должно закрываться на проведение плановой дезинфекции, в том числе для проведения косметического ремонта)...
Открытие стационара, закрывшегося по эпидпоказаниям, допускается только после получения отрицательного результата лабораторного контроля окружающей среды и разрешения центров Госсанэпиднадзора. В случае планового закрытия обследование объектов окружающей среды не проводится».
Микробиологический контроль стерильности проводится в ЛПУ 1 раз в месяц, центром Госсанэпиднадзора - 1 раз в квартал.
Исследование микробной обсемененности воздушной среды
Бактериологические исследования воздушной среды предусматривают: - определение общего содержания микробов в 1 кубометре воздуха;
определение содержания золотистого стафилококка в 1 кубометре воздуха.
Отбор проб воздуха проводят в следующих помещениях:
- оперблоках;
- перевязочных;
- послеоперационных палатах;
- отделениях и палатах реанимации и интенсивной терапии и других помещении, требующих асептических условий.
Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппарата Кротова.
Скорость протягивания воздуха составляет 25 л/мин, количество пропущенного воздуха должно составлять 100 л для определения общего содержания бактерий и 250 л для определения наличия золотистого стафилококка. Исследование воздуха седиментационным методом допускается в исключительных случаях. В протоколе количество плесневых грибов указывают отдельно.
Примечание. При переносе аппарата Кротова из одного помещения в другое его поверхность обрабатывают дезинфицирующим раствором. Столик, внутренние стыки и крышку прибора с внутренней и внешней стороны протирают спиртом 70°.
Критерии оценки микробной обсемененности воздуха в хирургических клиниках - операционные до начала работы - не выше 500 колоний/м3, во время работы - не выше 1000 колоний/м3; и в том, и в другом случае в 250 л воздуха патогенного стафилококка не должно быть.
Контроль стерильности инструментов (шприцы, иглы, системы переливании крови многократного использования, зонды, бужи и другие изделия из резины), перевязочного материала, операционного белья, рук хирургов и кожи операционного поля (выборочно) - 1 раз в неделю.
Забор проб на стерильность проводит операционная сестра в стерильные емкости, с соблюдением строжайших правил асептики непосредственно перед проведением операции.
Бактериологический контроль эффективности обработки кожи операционного поля и рук хирургов. Марлевой салфеткой, смоченной в физиологическом растворе, протирают ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. Отмывную жидкость засевают на 2 чашки Петри с МПА, а марлевую салфетку - в 0,5% сахарный бульон.
Кожа и руки стерильны при отсутствии роста микроорганизмов как на твердой, так и на жидкой питательной среде. Приказ Министерства здравоохранения РФ № 345 от 26.11.97г. «О совершенствовании мероприятий по профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах».
Ниже приведены основные положения приказа № 345. «Микробиологический мониторинг – важный параметр эпидемиологического надзора, преследующий цель определить этиологическую структуру ВБИ, выявить циркуляцию госпитального штамма и оценить качество противоэпидемического режима.
Микробиологический мониторинг осуществляется лечебно-профилактическими учреждениями, оперативными отделами центров Госсанэпиднадзора, дезинфекционными станциями. Обследование персонала на условно-патогенную и патогенную микрофлору осуществляется только по эпидемиологическим показаниям. Обследование медицинского персонала на носительство золотистого стафилококка при приеме на работу и в процессе профессиональной деятельности в плановом порядке не производится».
«Родильный дом (отделение) не менее одного раза в год должно закрываться на проведение плановой дезинфекции, в том числе при необходимости - для косметического ремонта. Открытие стационара, закрывавшегося по эпидпоказаниям, допускается только после получения отрицательных результатов лабораторного контроля окружающей среды и разрешения центров Госсанэпиднадзора. В случаях планового закрытия обследование объектов окружающей среды не проводится, разрешение органов ГСЭН на открытие не требуется».
«Микробиологический контроль стерильности проводится в лечебно-профилактическом учреждении 1 раз в месяц, центрами Госсанэпиднадзора или дезинфекционными станциями - 1 раз в квартал.
Исследованию подлежат:
лекарственные формы для инъекций,
лекарственные формы для обработки слизистых оболочек и ухода за кожей новорожденных,
растворы для питья,
шовный материал,
хирургические перчатки,
наборы для первичной и повторной обработок новорожденных,
материалы для новорожденных в стерилизационных коробках (биксах),
материалы для операционной в стерилизационных коробках (биксах),
индивидуальные комплекты для приема родов,
зонды, катетеры,
другие изделия медицинского назначения.
Санитарно-бактериологические исследования объектов окружающей среды проводятся в следующих случаях:
по эпидемиологическим показаниям,
при неудовлетворительном соблюдении санитарно-гигиенического и противоэпидемического режимов в акушерском стационаре (на усмотрение центров Госсанэпиднадзора),
с целью контроля качества заключительной дезинфекции перед открытием акушерского стационара, закрывшегося в связи с неблагополучной эпидемиологической обстановкой.
Данные бактериологического обследования новорожденных и родильниц с диагнозом ВБИ, а также медицинского персонала (больных и носителей) в совокупности с результатами санитарно-бактериологических исследований позволяют определить штаммы микроорганизмов, циркулирующих в стационаре.
В соответствии с «Методическими указаниями по микробиологическому контролю в аптеках» (1985), действующими до настоящего времени, отбор проб для бактериологического исследования (силами центров ГСЭН) различных объектов и аптеках производится не менее 2 раз в квартал; при этом пробы воздуха отбирают в следующих помещениях: асептическом блоке, стерилизационной, ассистентской, фасовочной, комнате дефектара и материальной, моечной и в зале обслуживания.
Отбор проб воздуха производят при соблюдении следующих условий:
чистое подготовленное к работе помещение;
закрытые форточки и двери;
определение в помещении процента относительной влажности воздуха;
уровень высоты отбора проб воздуха соответствует высоте рабочего стола;
не ранее, чем за 30 мин. после влажной уборки помещения.
Пробы воздуха отбирают аспирациопным методом с помощью приборов для бактериологического анализа воздуха - прибор Кротова в том числе.
Для определения общего содержания бактерий в 1м3 отбор производят на 2% питательный агар, разлитый и чашки по 12-15 мл. Для определения золотистого стафилококка используют желточно-солевой агар, для определения плесневых и дрожжевых грибов - среду Сабуро.
Критерии оценки микробной обсемененности воздуха помещений аптек: общее количество колоний микроорганизмов в 1 m3 воздуха в асептическом блоке, стерилизационной, ассистентской, фасовочной, дефектарной, материальной после работы должно быть не выше 1000 (до работы 500-750, соответственно), а золотистого стафилококка, плесневых и дрожжевых грибов не должно быть в 250 л воздуха ни до, ни после работы. В моечной ОМЧ во время работы должно быть не выше 1000, золотистого стафилококка не должно быть в 250 л воздуха, количество плесневых и дрожжевых грибов до 12/м3 воздуха. В зале обслуживания аптек во время работы ОМЧ должно быть не выше 1500, количество золотистого стафилококка допускается до 100 в 1 м , а плесневых и дрожжевых грибов - до 20 в 1 м3 воздуха.
Известно, что причиной пирогенности дистиллированной воды, предназначенной для изготовления инъекционных растворов, а также самих инъекционных растворов, в подавляющем большинстве случаев являются грамотрицательные (пирогенообразующие) микроорганизмы.
Их предельно допустимое содержание в 1 мл дистиллированной воды, используемой для приготовления инъекционных растворов, нормируется на уровне 5 КОЕ, при обшем количестве 15-20 КОЕ/мл, а растворы глюкозы (5-10-25-40%), натрия хлорида (0,9%) до стерилизации, но не позднее 1-1,5 часов после изготовления должны содержать не более 50 особей в 1 мл, из них пирогенных - не более 10. При этом содержание кишечной палочки и протея в дистиллированной воде и других лекарственных формах не допускается.
