- •Волгоградский государственный медицинский университет
- •Волгоград, 2013
- •Учёт успеваемости и посещаемости
- •Тематический план проведения занятий по разделу «Общая микробиология»
- •Часть I морфология микроорганизмов
- •Устройство и требования, предъявляемые к работе в микробиологической лаборатории
- •Устройство микробиологической лаборатории
- •Уровень опасности работ с микробами и категории лабораторий
- •Требования к работе с микроорганизмами I и IV групп патогенности
- •Основные помещения микробиологической лаборатории
- •Требования, предъявляемые к работе в бактериологической лаборатории
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Аппаратура для выращивания микроорганизмов, стерилизации и других микробиологических исследований
- •Микроскопы и методы микроскопии
- •Контрольные вопросы
- •Морфология и структура бактерий Программ трех занятий
- •С пособы окраски
- •Позитивные
- •Самостоятельная работа студента
- •Методика окраски по Граму
- •Методика окраски по Нейссеру
- •Метод Бурри-Гинса (выявление капсулы)
- •Методика окраски по Бурри-Гинсу
- •На практическом занятии
- •Контрольные вопросы
- •Часть II физиология микроорганизмов
- •Питательные среды. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Требования к питательным средам
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Методические указания Работа 1
- •Работа 3
- •Бактериологический метод исследования
- •Техника посева и пересева
- •Изучение бактериальных колоний
- •Выделение чистой культуры бактерий аэробов
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Методы культивирования анаэробных микробов
- •1. Физические методы:
- •2. Химические методы:
- •3. Биологические методы:
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии по теме: «Бактериологический анализ, культивирование анаэробов»
- •Ферментативные свойства бактерий
- •Среды для определения сахаролитических свойств
- •Cамостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Контрольные вопросы
- •Основные противоэпидемические мероприятия в лаборатории Стерилизация
- •Физические методы
- •Механические методы
- •Химические методы
- •Контроль стерилизации
- •Биологический контроль
- •Внутренний контроль качества микробиологических исследований
- •Контроль температурных режимов инкубации
- •Контроль качества стерилизации и дезинфекции
- •Химический контроль
- •Термический контроль
- •Контроль качества дистиллированной воды
- •Центральное стерилизационное отделение
- •Классификация антисептиков по механизму действия
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Демонстрация опыта действия солнечного света на бактерии (опыт Бухнера).
- •Оформление альбома:
- •Санитарная микробиология воды Общие вопросы
- •Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Санитарно-гигиенические показатели и нормативы качества питьевой воды
- •Санитарная микробиология воздуха Общие вопросы
- •Санитарная микробиология предметов обихода и медицинского оборудования Общие вопросы
- •Санитарно-микробиологическое исследование
- •Посевы на стерильность хирургического инструмента
- •Бактериологический контроль эффективности обработки кожи операционного поля и рук хирургов
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Микрофлора тела человека
- •Микрофлора кожи
- •Микрофлора уха
- •Микрофлора конъюнктивы
- •Микрофлора дыхательных путей
- •Микрофлора полости рта
- •Микрофлора желудочно-кишечного тракта
- •Микрофлора мочеполовой системы
- •Значение нормальной микрофлоры
- •Понятие «дисбактериоз». Условия развития
- •Вопросы для обсуждения
- •Микрофлора кожи Посев волоса и «отпечатков» с губ и пальцев рук на мпа
- •Микрофлора носа и зева Посев отделяемого из носа на кровяной агар
- •Микрофлора кишечника Посев кала на среду Эндо
- •Миклофлора зубного налета
- •Оформление протокола
- •Тема: «Генетика бактерий»
- •Механизмы рекомбинаций
- •Самостоятельная работа студентов на практическом занятии
- •Опыт «Конъюгация 2»: передача плазмидного признака рези-стентности к тетрациклину (r Тc).
- •Опыт по определению колициногенности.
- •Диагностика фенилкетонурии.
- •Инфекция
- •Самостоятельная работа студентов на практическом занятии
- •Контрольные вопросы
- •Классификация химиотерапевтических препаратов
- •Механизмы антимикробного действия
- •Основные осложнения при химиотерапии
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных индикаторных дисков
- •Микрофлора человека и санитарная бактериология
- •Список литературы
Методика окраски по Граму
На мазок кладут фильтровальную бумагу и наливают карболовый раствор генцианового фиолетового на 1-2 минуты. Снимают бумагу и, не промывая мазок водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту, обесцвечивая препарат в 96%-ном спирте в течение 30 секунд. Промывают водой. Красят 1-2 минуты водным раствором фуксина. Ополаскивают водой и высушивают. В результате окраски грамположительные микробы окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный.
Техника окраски:
Фиксированный мазок покрывают полоской бумаги, на нее наносят карболовый фуксин Циля и несколько раз подогревают над пламенем горелки до появления паров, каждый раз подливая краситель.
Бумагу снимают и обесцвечивают мазок в 5%-ном растворе серной кислоты, затем промывают водой.
На мазок наливают раствор метиленового синего на 3-5 минут.
Препарат промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсионной системой.
Методика окраски по Нейссеру
Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислой синей 1 минуту, затем сливают краску.
Промывают водой и наливают раствор Люголя на 20-30 секунд.
Далее окрашивают везувином 1-3 мин.
Промывают водой, высушивают.
Тела бактерий окрашиваются в нежный светло-коричневый цвет, зерна волютина – в темно-синий, почти черный цвет.
Метод Бурри-Гинса (выявление капсулы)
Капсулы, имея консистенцию геля, плохо удерживают краситель, и для их выявления чаще всего применяют метод негативного контрастирования.
Методика окраски по Бурри-Гинсу
На середину предметного стекла наносят капельку черной туши и смешивают ее с каплей культуры капсульных бактерий с помощью петли.
Краем другого предметного стекла делают мазок по типу кровяного. Мазок сушат на воздухе и фиксируют в пламени горелки.
Окрашивают 5 минут карболовым фуксином, разведенным водой 1:3.
Осторожно промывают водой, высушивают.
Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы контрастно выделяются на темном фоне препарата.
Самостоятельная работа студента
На практическом занятии
Последовательность действий (этапы) |
Способы действия (ориентиры) |
I. Изучить метод окраски по Граму
|
Цель опыта: определить, имеет ли метод Грама преимущество перед простым методом, и в чем оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение метода окраски по Граму. Материал: стафилококки (грамположительные бактерии) и кишечные палочки (грамотри-цательные бактерии). Ход опыта: приготовить три одинаковых мазка из смеси стафилококков и кишечных палочек; окрасить один мазок водным фуксином, второй – генцианвиолетом, третий – по Граму. Результат: три рисунка и их описание.
Вывод: (вывод содержит ответы на вопросы, поставленные в цели опыта). |
II. Изучить метод окраски по Цилю-Нильсену
|
1. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники окраски по Цилю-Нильсену. 2. Поставьте опыт окраски по Цилю-Нильсену.
Цель опыта: определить, имеет ли метод Циля-Нильсена преимущество перед простым способом окраски, и в чем оно состоит; в каких случаях целесообразно применение этого метода. Материал: два мазка из смеси туберкулезной палочки (кислотоустойчивые бактерии) и кишечных палочек (кислотоподатливые бактерии). Ход опыта: окрасьте один мазок простым способом (метиленовой синью), второй — по Цилю-Нильсену. Результат: два рисунка и их описание.
Вывод.
|
III. Сдать выполненную работу преподавателю |
Дайте на просмотр преподавателю препараты и тетрадь, приведите в порядок рабочее место и сдайте его дежурному студенту. |
IV. Изучить капсулы бактерий |
Промикроскопируйте и зарисуйте демон-страционный препарат из культуры палочки Фридлендера, окрашенный по способу Гинса; капсулы на рисунке укажите стрелкой. |
V. Изучить споры бактерий
|
Промикроскопируйте и зарисуйте мазок из культуры антракоидной палочки, окрашенной по способу Циля-Нильсена; споры на рисунке отметьте стрелкой. |
VI. Изучить жгутики бактерий и подвиж- ность
|
|
VII. Изучить включения бактерий
|
Промикроскопируйте и зарисуйте готовые мазки из культур дифтерийной и сенной палочек. Включения на рисунке отметьте стрелкой и объясните в дневнике причину окраски тела и включений бактерий в разные цвета. |
VIII. Изучить ультра- микроскопическую структуру бактерий |
Посмотрите таблицы с электронограммами бактерий и обсудите вместе с преподавателем тонкую структуру клеточной стенки, строение цитоплазматической мембраны, включений. |
IX. Сдать выполненную работу
|
Продемонстрируйте преподавателю приготов-ленные Вами препараты «раздавленной» и «висячей» капли, технику их микроскопии; дайте на просмотр преподавателю тетради; приведите в порядок рабочее место и сдайте его дежурному студенту. |