Самостоятельная работа студента на практическом занятии

Посев воздуха по методу Коха для определения мик­робного числа

Чашки Петри с МПА оставляют открытыми на оп­ределенное время (5-10 минут на общую обсемененность и не менее 40 минут на кокковую флору), затем их закрывают, подписывают и выдерживают в термо­стате при температуре 37 °С, и еще 24 часа при комнат­ной температуре. Количество выросших колоний соот­ветствует степени загрязненности воздуха. По при­близительному подсчету, на площадь 100 см² в течение 5 мин оседает столько микробов, сколько их содержит­ся в 10 л воздуха. Площадь чашки Петри 78,5 см². Ко­личество колоний на чашке необходимо сосчитать, за­тем вычислить с помощью пропорции количество в 1 м воздуха, то есть вычислить его микробное число.

Демонстрация аспирационного метода

Для исследования этим способом пользуются аппа­ратом Кротова. Воздух в количестве 50-100 л пропус­кают со скоростью 25 л в минуту над открытой чашкой Петри с МПА. Открытую чашку с питательной средой устанавливают на вращающийся столик. Воздух посту­пает через клиновидную щель и с силой ударяется о поверхность питательной среды, на которой фиксиру­ются микробы. По истечении заданного времени чашку с посевом воздуха снимают, закрывают и помещают в термостат при температуре 37 °С на 24 часа.

Допустим, на чашке при подсчете обнаружено 200 колоний, воздух пропускали 2 минуты со скоростью 25 л в мин. Всего пропущено 50 л воздуха. Число микро­бов в 1 м воздуха равно

Демонстрация определения коли-титра воды мето­дом мембранных фильтров

Для определения коли-титра используют нитроцеллюлозные фильтры, которые бывают 5 номеров. Для исследования воды используют фильтр № 3. Через него фильтруют 500 мл воды в течение 2,5 минут. Затем фильтр переносят стерильным пинцетом на чашку со средой Эндо (на чашку можно поместить 4 фильтра).

Через сутки инкубации в термостате при 37 °С на пленке появляются типичные красные колонии Е. coli. Делают мазок. В случае обнаружения грамнегативных палочек оставшуюся часть колонии пересевают в глюкозо-пептонную среду и инкубируют при 43 °С. При положительной бродильной пробе присутствие кишеч­ной палочки считается доказанным. Например, если на фильтре образовалось 4 колонии Е. coli, так как фильт­ровали 500 мл воды, то в 1 л будет 4x2=8 бактерий. Ес­ли коли-индекс равен 8, то коли-титр равен 1000:8=125.

Демонстрация определения коли-титра воды по ме­тоду Эйкмана (двухфазно-бродильный метод)

Общий объем исследуемой воды 333 мл. Исследо­вание проводится на глюкозопептонной среде Эйкмана (вода, пептон, глюкоза). Концентрированная среда Эйкмана заливается в три флакона по 100 мл в каждый, в 3 пробирки по 1 мл и в 3 пробирки по 10 мл. Иссле­дуемая вода засевается во флаконы по 100 мл, в первые 3 пробирки по 10 мл, в последующие 3 по 1 мл воды. Таким образом, в 9 емкостей засевается 333 мл воды. Посевы помещают в термостат на сутки. Далее из всех емкостей делаются высевы на среду Эндо. Для этого чашку со средой Эндо делят на 9 секторов. В за­висимости от количества пробирок и флаконов, давших рост кишечной палочке на среде Эндо (красные коло­нии), цифровое значение коли-титра находят по специ­альной таблице.

Тема: «Нормальная микрофлора организма человека»

Цель:

– научиться методам определения микрофлоры организма человека.

Задачи:

– усвоить значение нормальной микрофлоры в жизнедеятельности

человека;

- овладеть методами определения микрофлоры различных органов

и полостей организма человека;

- уметь оценить полученные результаты.