5. Опыт по определению колициногенности.

Пояснение: колицины – вещества, продуцируемые бак­териями, губительно действующие на близкородственные бактерии (штаммы того же вида). Образование колицинов (колициногенность) детерминировано генами Со1-плазмид. По способности продуци­ровать колицины бактерии внутри вида делятся на колициногеновары, а по чувствительности к действию стандартных колици­нов — на колициновары.

Опыт ставят с целью определения наличия Со1-плазмиды в изучаемой культуре кишечной палочки. В качестве индикаторно­го штамма используют штамм Е. сoli φ, чувствительный к колицинам Е. Для этого берут пробирки со скошенным агаром, у ко­торого отрезана верхняя часть. Исследуемую культуру засевают уколом внутрь среза агара и помещают в термостат на 24 часа. Через сутки на поверхность скошенного агара методом штриха засевают индикаторную культуру. Посевы вновь помещают в термостат. Через 24 часа учитывают результаты. Этот метод вы­явления бактериоцинов (колицинов) получил название метода отсроченного антагонизма. Если изучаемая культура имеет Со1-плазмиду, то продуцируемые клетками колицины диффундируют в среду и тормозят рост индикаторной культуры; если образова­ние колицинов не происходит (нет Со1-плазмид), то индикатор­ная культура хорошо растет на поверхности скошенного агара.

Учтите результаты опыта, зарисуйте. Сделайте заключение о наличии или отсутствии Со1-плазмид, если: а) отсутствует рост индикаторной культуры; б) индикаторная культура растет в экс­перименте.

6. Диагностика фенилкетонурии.

Пояснение: достижения генетики бактерий широко ис­пользуют в биологии, биотехнологии и медицине. Одним из примеров этого может служить диагностика фенилкетонурии с использованием штаммов кишечной палочки, ауксотрофных по фенилпировиноградной кислоте (не растут в ее отсутствие). Фенилкетонурия — наследственное заболевание, связанное с гене­тически обусловленным нарушением обмена ароматических аминокислот (превращения фенилаланина в тирозин). У таких больных в моче появляется фенилпировиноградная кислота, чего не бывает у здоровых лиц. Для ее обнаружения можно использо­вать ауксотрофный штамм Е. соli по фенилпировиноградной кислоте. Этот штамм засевают на чашку с минимальной средой в виде газона. В среде прорезают лунки, в которые вносят образцы исследуемой мочи. Контролями служат лунки с раствором фенилпировиноградной кислоты и образцом мочи здорового чело­века. Посев помещают в термостат и через сутки учитывают ре­зультаты. Если в исследуемом образце мочи содержалась фенил­пировиноградная кислота, то вокруг этой лунки наблюдается зона роста кишечной палочки, сравнимая с ростом вокруг кон­трольной лунки с раствором фенилпировиноградной кислоты. Вокруг лунки с образцом мочи здорового человека рост всегда отсутствует.

Учтите и зарисуйте результаты. Укажите, в каких образцах найдена фенилпировиноградная кислота. О чем это свидетель­ствует? Сравните результаты, сделайте вывод.

Инфекция

Тема: «Учение об инфекции. Патогенетические факторы бактерии. Биологический метод исследования»

Цель:

– научиться методам определения некоторых токсинов и ферментов

патогенности бактерий;

– усвоить этапы биологического метода исследования.

Задачи:

– уметь оценить результаты изучения патогенетиче­ских факторов

микроорганизмов;

– овладеть методикой заражения, вскрытия и бакте­риологического

исследования лабораторных животных.

Инфекционный процесс – это совокупность физиологических и патологических процессов, возникающих в организме при внедрении в него патогенных микробов. Крайней степенью этого взаимодействия является инфекционная болезнь.

Патогенность – это генетически обусловленная способ­ность микроорганизма вызывать инфекционный процесс.

Вирулентность – это степень патогенности, фенотипическое выражение патогенного генотипа. Вирулентность является количественной характеристикой патогенности и измеряется условно принятыми единицами: минимальная летальная доза – количество микробов, ко­торое вызывает гибель 95% животных, взятых в опыт (DLM).

DL₅₀ – летальная доза, вызывающая гибель 50% подопыт­ных животных.