Лабораторная работа Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы слюны

Метод основан на сравнении скорости гидролиза крахмала (продукт гидролиза крахмала обнаруживают пробой с йодом под действием α – амилазы слюны).

В три пробирки наливают по 1 мл слюны, разведенной в 40 раз (10,20,50).

В первую пробирку добавляют 2 капли воды, во вторую - 1% раствора NaCl, в третью - 2 капли 1% раствора CuSO4. После этого в каждую пробирку добавляют по 5 капель 1% раствора крахмала. Все пробирки оставляют при комнатной температуре ( или лучше термостат t=38) на 2 минуты, затем во все пробирки добавляют по 1 капле раствора йода, перемешивают, наблюдают окраску и определяют, в какой пробирке действует активатор или ингибитор. Целесообразно в каждую пробирку прибавить по 2 мл воды и перемешать - окраска будет более наглядной.

Активаторы стимулируют действие ферментов, но в отличие от коферментов не принимают участие в реакции.

Проба	Слюна	Вода, NaCl,CuSO4	Крахмал	Термостат t=38	Раствор I2	Окраска
Пробирка 1	слюна 1мл	вода 2 капли	крахмал 1% 5 капель	термостат 380 2 мин	раствор йода 1 кап
Пробирка 2	слюна 1мл	1% р –р NaCL 2 капли	крахмал 1% 5 капель	термостат 380 2 мин	раствор йода 1 кап
Пробирка 3	слюна 1мл	1% р –р СuSO4 2 капли	крахмал 1% 5 капель	термостат 2 мин	раствор йода 1 кап

В первой пробирке появляется фиолетовая или красно-бурая окраска, во второй пробирке, где ионы Cl- играют роль активаторов, пояляется желтая окраска, а в третьей пробирке, где ионы Cu ²⁺ тормозят действие амилазы, окраска будет синей.

Окраска зависит от расщепления крахмала.

Вывод: Для амилазы активатор NaCl

Ингибитор CuSO₄

Вопросы к итоговому занятию «химия белков. Ферменты».

1. Первичная структура белков (определение, связи, стабилизирующие первичную структуру, свойства).

2. Вторичная структура белков (определение, связи, стабилизирующие вторичную структуру, виды).

3. Третичная структура белков (определение, связи, стабилизирующие третичную структуру, виды).

4. Четвертичная структура белков (определение, связи, стабилизирующие четвертичную структуру).

5. Протомер (определение, пример). Строение молекулы гемоглобина.

6. Изоэлектрическое состояние белковой молекулы (определение, свойства белков в изоэлектрической точке).

7. Напишите структурную формулу трипептида, состоящего из ВАЛ, ЦИС и ФЕН.

8. Напишите структурную формулу трипептида, состоящего из АЛА, ГИС и ТИР.

9. Напишите структурную формулу трипептида «глицил-серил-триптофан».

10. Напишите структурную формулу трипептида «лейцил-метионил-цистеин».

11. Классификация белков (по строению, функциям, примеры).

12. Денатурация белков (виды, факторы, вызывающие денатурацию).

13. Применение обратимой и необратимой денатурации в медицине.

14. Назовите признаки, отличающие биологические катализаторы от неорганических.

15. Укажите, в чем сходство биологических и неорганических катализаторов.

16. Дайте определение понятиям: кооперативность действия ферментов, компартментализация.

17. Дайте определение активного центра фермента. Какие функциональные группы и радикалы наиболее часто входят в состав активного центра?

18. Структура сложных ферментов.

19. Дайте определение специфичности ферментов. Виды специфичности.

20. Дайте определение абсолютной специфичности ферментов. Приведите пример.

21. Дайте определение относительной специфичности ферментов. Приведите пример.

22. Дайте определение стереохимической специфичности ферментов. Приведите пример.

23. Перечислите факторы, от которых зависит скорость ферментативной реакции.

24. Дайте определение оптимальному значению рН фермента.

25. Нарисуйте график зависимости скорости ферментативной реакции от рН среды.

26. Дайте определение термолабильности ферментов. Температурный оптимум действия ферментов.

27. Нарисуйте график зависимости скорости ферментативной реакции от температуры.

28. Константа Михаэлиса (определение, значение). На графике определите К_m (укажите, какое свойство фермента характеризует K_m).

29. Регуляторные ферменты. Особенности структуры, кинетика реакций, катализируемых регуляторными ферментами. Биологическое значение.

30. Нарисуйте график зависимости скорости реакции от концентрации субстрата для регуляторного фермента.

31. Назовите виды ингибирования ферментов. Приведите пример необратимого ингибирования.

32. Назовите типы обратимого ингибирования. Приведите пример.

33. Конкурентное ингибирование. Основные признаки конкурентного ингибитора. Выявление типа ингибирования с помощью графика Михаэлиса-Ментен

34. Неконкурентное ингибирование. Основные признаки этого типа ингибирования, выявление с помощью графика Михаэлиса-Ментен.

35. Аллостерическая регуляция активности ферментов. Физиологическое значение регуляции активности ферментов.

36. Гомотропная регуляция активности ферментов. Приведите пример.

37. Гетеротропная регуляция активности ферментов. Приведите пример.

38. Изоферменты (особенности строения, локализация, функции). Приведите примеры.